国家重点基础研究发展计划(2010CB529105)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：山东省医药生物技术研究中心山东省千佛山医院山东省医学科学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 碳酸酐酶1对骨形成作用的研究被引量：2
- 2012年
- 目的:为了研究碳酸酐酶1(carbonic anhydrase I,CA1)在生物矿化和骨形成过程中的作用。方法:选择HeLa细胞为研究对象,用地塞米松(dexamethasone,DEX)、β-磷酸甘油(β-glycerophosphate,β-GP)和维他命C(ascorbic acid,AA)诱导其钙化,茜素红染色法观察矿化结节的形成,荧光定量PCR检测细胞骨化标志蛋白Runx2/cbfa1的表达。CA1表达水平的变化采用Western blot和荧光定量PCR的方法检测。同时用碳酸酐酶抑制剂乙酰唑胺处理HeLa细胞,观察CA1表达被抑制后对HeLa细胞钙化的影响。结果:HeLa细胞在诱导后形成大量矿化结节,Runx2/cbfa1转录水平明显升高,显示DEX、β-GP和AA可诱导HeLa细胞钙化和骨化,HeLa细胞钙化后CA1表达明显增高。HeLa细胞经乙酰唑胺处理后,CA1的表达量减少,矿化结节形成明显减少,说明抑制CA1表达可以抑制HeLa细胞矿化和骨化过程。结论:CA1在生物矿化和新骨形成过程中起着重要作用。
- 郑亚冰王林常建芳王月俭韩金祥常晓天
- 关键词：生物矿化成骨诱导
- 表达芯片筛选类风湿关节炎特异表达基因被引量：3
- 2014年
- 为了寻找类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)新的特异性表达标记物,应用基因芯片对RA、骨关节炎(osteoarthritis,OA)和强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者关节滑膜组织的基因表达谱进行比较,并采用实时定量PCR方法对芯片结果进行验证.全基因组表达芯片的结果显示,与OA滑膜组织及AS滑膜组织相比,在RA患者的滑膜组织中,CD38,ANKRD38,E2F2,CFDP1,CD7,ISG20和IL2RG基因表达异常;实时定量PCR结果证实,RA患者滑膜组织中,CD38、E2F2和IL2RG基因表达明显增高.
- 岳龙涛张伟郑亚冰刘文波常晓天
- 关键词：类风湿关节炎基因表达谱芯片CD38
- 高表达碳酸酐酶1参与骨化过程的研究
- 2012年
- 目的碳酸酐酶1不仅可以催化二氧化碳水化反应，还可以加速碳酸钙的形成，而钙沉淀是新骨形成的重要步骤。本研究以培养细胞为模型探索碳酸酐酶1在骨形成过程中的作用。方法用成骨诱导培养基（OM）诱导骨肉瘤细胞Saos-2钙化，然后用茜素红染色法观察细胞矿化结节的形成，用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞骨化标志蛋白核心结合蛋白因子2（Runx2）、成骨细胞特异性转录因子（OSX）、碱性磷酸酶（AIJP）、骨钙素和骨涎蛋白（BSP）的表达。用蛋白印迹法和荧光定量PCR检测细胞钙化前后碳酸酐酶1的表达量的变化。用碳酸酐酶抑制剂乙酰唑胺处理Saos-2细胞，观察细胞钙化过程是否被抑制。2组间比较采用t检验，不同时间点的统计学分析采用重复测量的方差分析。结果Saos-2细胞在OM诱导后形成大量矿化结节（0．68±0．03与2．76±0．13，P〈0．01），Runx2、ALP、骨钙素、OSX和BSP转录水平明显升高，显示OM可诱导Saos-2细胞钙化和骨化。Saos-2细胞钙化后碳酸酐酶1表达明显增高（0．25±0．03与0．94±0．06，P〈0．01）。Saos-2细胞经乙酰唑胺处理后，碳酸酐酶1的表达量减少（1．09±0．05与0．55±0．07，P〈0．05），矿化结节形成明显减少（2．76±0．13与2．19±0．07，P〈0．01），骨化标志蛋白的表达也明显下降，说明抑制碳酸酐酶1表达可以抑制Saos-2细胞矿化和骨化过程。结论碳酸酐酶1在新骨形成过程中起着重要作用。
- 郑亚冰王林赵丹王月俭安琨韩金祥常晓天
- 关键词：骨生成成骨诱导生物矿化
- 维生素D结合蛋白在类风湿关节炎滑膜中表达的研究被引量：6
- 2012年
- 目的本研究通过蛋白质组学的方法比较类风湿关节炎（RA）、骨关节炎及强直性脊柱炎（AS）滑膜组织中表达的蛋白，筛选RA滑膜中表达特异性下调的蛋白，并通过单核苷酸多态性（SNPs）分析方法分析靶蛋白编码基因对RA的遗传易感性。方法提取RA（10例）、骨关节炎（10例）及AS（10例）滑膜组织总蛋白，每类疾病的样本等比例混合，然后用2．D凝胶电泳进行分析，对RA样本中表达量明显低于骨关节炎和As的蛋白进行飞行时间质谱鉴定，检测结果用蛋白印迹法验证。用Taqman方法对中国人群中267例RA患者和160名健康对照的维生素D结合蛋白（VDBP）编码基因的标签SNPs进行基因分型，并扩大样本量（389例RA和371名健康对照）验证分型结果。采用单因素方差分析和Fisher确切概率法进行检验。结果蛋白质组学研究发现，在RA患者滑膜中VDBP表达量明显下降，蛋白印迹法也验证了这一结果。基因分型研究发现，SNP位点rs2282679与RA密切相关（P=-0．026794）。进一步扩大样本实验也得出了一致结果，rs2282679与RA有相关性[比值比（OR）=0．678639，95％可信区间（凹）0．541113～0．851118，P=O．000776]。结论与骨关节炎和AS患者相比，VDBP在RA患者滑膜中表达量明显下降。VDBP基因上的SNP位点rs2282679与RA有相关性。VDBP在RA中的表达下调及其基因的遗传效应显示VDBP可能参与RA的病理过程。
- 王月俭房克华赵丹潘继红赵燕张云忠常晓天
- 关键词：蛋白质组学关节炎类风湿单核苷酸
- siRNA沉默PCSK6基因对胶原诱导性关节炎的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨siRNA沉默PCSK6基因对胶原诱导性关节炎(CIA)成纤维样滑膜细胞(FLS)生物学行为的影响。方法采用牛Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA模型,取膝关节滑膜组织原代培养FLS;采用人工合成的siRNA oligo-433干扰剂、siRNA oligo-688干扰剂、siRNA oligo-2506干扰剂特异性抑制PCSK6在CIA FLS中的表达,阴性siRNA为阴性对照组,瞬时转染24、36 h后,采用RT-q PCR法检测抑制效率,同时检测PCSK6基因沉默后各相关基因的表达;采用MTT、Transwell、细胞划痕、流式细胞术、ELISA等方法检测干扰PCSK6表达后对细胞增殖、侵袭、迁移、细胞周期和相关炎性因子分泌的影响。结果转染特异性siRNA-PCSK6后,各干扰组与阴性对照组相比,siRNA oligo-2506干扰剂转染24 h时,PCSK6 mRNA水平抑制效果显著(P<0.001),CIA FLS的增殖受到抑制(P<0.001),细胞的侵袭和迁移能力下降(P<0.001),肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)分泌降低(P<0.001),G_0/G_1期的细胞数目增多(P<0.05),PCSK6下游基因CXCL9、MMP2、MMP9、NOSTRIN、HIF-1α、M PZL2、IGF2、PADI4表达均明显下降(P<0.05)。结论 PCSK6基因沉默对CIA FLS的生物学行为具有一定作用,为进一步研究CIA发病机制奠定基础。
- 姜慧钰王林潘继红
- 关键词：SIRNA胶原诱导性关节炎类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞
