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基于多元统计分析对秦艽中环烯醚萜苷抗胶原诱导型关节炎作用机制的研究被引量：6: 2019年; 目的:测定秦艽中环烯醚萜苷对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节滑膜中TGF-β1、IFN-γ、IL-4、VEGF、RANTES、CD3、CD34及CD68的表达水平并进行多元统计分析,以探讨秦艽中环烯醚萜苷对类风湿性关节炎(RA)的治疗作用及相关机制。方法:构建大鼠胶原诱导型关节炎模型,通过免疫组化法检测大鼠踝关节TGF-β1、IFN-γ、IL-4、VEGF、RANTES、CD3、CD34及CD68的表达,HE染色观察踝关节组织的病理学改变,并采用主成分分析法(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析法(OPLS-DA)对测定数据进行分析。结果:与正常对照组比较模型组的TGF-β1、IFN-γ、RANTES、VEGF、CD3、CD34和CD68的表达水平明显升高,IL-4表达明显降低。经药物治疗后,与模型组比较,秦艽环烯醚萜苷0.35g/kg组的关节肿胀度、评分、TGF-β1、IFN-γ、CD3、CD34和CD68表达明显降低,VEGF表达降低。HE染色结果显示,秦艽环烯醚萜苷0.35g/kg组的关节软骨破坏有所修复,血管新生减少。在PCA的基础上进行OPLS-DA分析,筛选出VEGF、RANTES和CD34是区分对照组与CIA模型组的关键差异变量。结论:多元统计分析方法可对RA复杂的致病及治疗作用机理中的数据起到更好的解析作用。秦艽环烯醚萜苷可能主要通过下调CD34、VEGF的表达,抑制病理性微血管新生,改善关节滑膜慢性炎症这一机制干预RA的发展。; 李琪陈秀徐艳徐艳张雪张宏; 关键词：秦艽环烯醚萜苷类风湿性关节炎细胞因子

基于代谢组学和网络药理学的复方黑骨藤有效组分抗类风湿性关节炎机制研究被引量：3: 2023年; 该实验利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间高分辨率质谱(ultra-performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight high resolution mass spectrometer,UPLC-Q-TOF-HRMS)技术探讨复方黑骨藤有效组分对胶原诱导性关节炎(collagin-induced arthritis,CIA)大鼠脾脏代谢组的影响,并通过网络药理学分析其潜在抗炎机制。造模成功后,给药28 d,取大鼠脾脏组织,处理后采集UPLC-Q-TOF-HRMS谱,利用主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)以及MetPA方法对其进行分析。结果表明与空白对照组相比,模型组中肌苷、胞内胆碱、次黄嘌呤、牛磺酸等22种生物标志物含量显著升高,而CDP-乙醇胺、磷酰胆碱等9种生物标志物含量显著降低;与模型组相比,复方黑骨藤有效组分可使肌苷、胞内胆碱、CDP-乙醇胺、磷酰胆碱等21种生物标志物明显回调;差异代谢物通路富集分析显示共涉及17条通路,主要包括嘌呤代谢、牛磺酸与亚牛磺酸代谢、甘油磷脂代谢以及半胱氨酸与甲硫氨酸代谢。此外,网络药理学分析发现嘌呤代谢、甘油磷脂代谢、半胱氨酸与甲硫氨酸代谢等在类风湿性关节炎病理过程中占重要地位。该研究表明复方黑骨藤有效组分可通过改善CIA大鼠的脾脏代谢紊乱来延缓机体炎症反应的发生发展,揭示复方黑骨藤有效组分具有多靶点、多途径的抗炎机制,为复方黑骨藤有效组分抗类风湿性关节炎作用机制做出了新的解释。; 张琴张宏张宏王博李晨阳李琪; 关键词：类风湿性关节炎网络药理学

秦艽分离有效部位对胶原诱导性关节炎的作用研究被引量：2: 2017年; 目的:分离并筛选秦艽有效部位,研究其对胶原诱导性关节炎大鼠的治疗作用及作用的分子机制。方法:通过D-101大孔树脂对秦艽醇提物进行分离纯化;采用二甲苯致小鼠耳肿胀急性炎症模型观察秦艽各分离片段的抗炎活性;进一步通过胶原诱导性关节炎大鼠模型,研究秦艽10%乙醇分离片段对大鼠足肿胀度、外周血中Ⅱ型胶原抗体、TNF-α、IFN-γ和IL-4水平的影响;并利用UPLC法测定各分离片段中4种环烯醚萜类化合物的富集情况。结果:秦艽10%乙醇分离片段(生药5g/kg)显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀;在胶原诱导性关节炎大鼠模型实验中,秦艽10%乙醇分离片段(生药3.5g/kg)能显著减轻关节肿胀,降低Ⅱ型胶原抗体、TNF-α和IFN-γ水平,升高IL-4水平。通过UPLC法检测发现10%乙醇分离片段中的主要成分为4种环烯醚萜类化合物,总含量为69.98%。结论:D-101大孔树脂可用于秦艽醇提物的分离纯化,10%乙醇分离片段为秦艽抗类风湿性关节炎的有效部位,通过UPLC法测定该有效部位的主要成分为环烯醚萜类化合物。; 徐艳张宏陈姚侯玉婷李琪; 关键词：秦艽环烯醚萜耳肿胀胶原诱导性关节炎

正交试验优选复方黑骨藤超声法提取工艺被引量：1: 2014年; 目的:研究复方黑骨藤药材的最佳超声提取工艺。方法:以杠柳苷、龙胆苦苷和延胡索乙素的提取率为质量指标,采用正交试验优选提取工艺;以抗炎效果为生物指标,验证提取工艺的有效性。结果:最佳工艺条件为:提取2次,提取时间为30 min,料液比为1∶15,提取温度为60℃,功率为800 W,超声间隙时间为5 s/3 s,药材粒度为过24目。以最佳工艺提取得到的提取物能有效抑制二甲苯引发的小鼠耳廓肿胀度。结论:该方法适用于复方黑骨藤中有效成分的提取,该提取物有较好的抗炎效果,此工艺合理可行,方法可信。; 姚瑾黎霞罗岚钟菡张宏; 关键词：杠柳苷龙胆苦苷延胡索乙素超声提取

复方黑骨藤有效组分抗类风湿性关节炎作用及分子机制被引量：3: 2021年; 目的观察复方黑骨藤有效组分(EC-PFSC)对类风湿性关节炎(RA)的治疗作用,并对比与传统复方黑骨藤间的药效差异,探讨其相关分子机制。方法首先采用二甲苯致小鼠耳肿胀和角叉菜胶致小鼠足肿胀两种炎症模型,整体评价EC-PFSC不同剂量的抗炎活性,筛选最佳剂量;然后进一步构建胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,选用最佳剂量观察EC-PFSC对CIA大鼠的治疗作用,免疫组化法检测大鼠踝关节中半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)表达,Western Blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)、磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)、磷酸化p38(P-p38)蛋白表达,RT-qPCR法检测caspase3、iNOS、COX-2 mRNA表达,从分子水平探明EC-PFSC的作用机制;最后利用UPLC法测定14种有效化合物的富集情况。结果 EC-PFSC中剂量组(278.0 mg/kg)抑制小鼠耳肿胀和足肿胀效果最佳;在CIA大鼠实验中,与空白组比较,模型组iNOS、COX-2、P-ERK、P-p38表达升高(P<0.01),caspase3表达下调(P<0.01),给予EC-PFSC和传统复方黑骨藤后,上述指标均有所改善,以EC-PFSC组效果更优;UPLC法检测发现EC-PFSC中14种有效化合物总含量为49.03%,高于传统复方黑骨藤。结论 EC-PFSC对RA有良好的治疗效果,其机制可能与下调ERK、p38的磷酸化水平,进而抑制炎症介质iNOS、COX-2的释放,同时激活凋亡蛋白caspase3有关。; 李佳俊张宏李克娟陈秀李琪; 关键词：类风湿性关节炎分子机制

建立HPLC法同时测定复方黑骨藤中9种有效成分的含量被引量：6: 2016年; 目的:建立HPLC法同时测定复方黑骨藤中落干酸、6’-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、杠柳苷、延胡索乙素、四氢小檗碱、延胡索甲素9种有效成分的含量。方法:采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.05%三乙胺+乙酸水溶液(B,pH=6.0)为流动相,梯度洗脱(0~5 min,5%A→8%A;5~5.5 min,8%A→11%A;5.5~20 min,11%A;20~30 min,11%A→30%A;30~40 min,30%A→40%A;40~42 min,40%A→55%A;42~53 min,55%A→75%A),流速1.2 m L·min^(-1),柱温25℃,检测波长为206 nm(延胡索乙素、四氢小檗碱、延胡索甲素)、225 nm(落干酸和杠柳苷)、243 nm(獐牙菜苦苷和獐牙菜苷)和275 nm(6’-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷和龙胆苦苷),进样量10μL。结果:落干酸、6’-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、杠柳苷、延胡索乙素、四氢小檗碱和延胡索甲素的质量浓度在一定范围内,与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为92.7%、90.9%、91.2%、94.9%、97.4%、94.6%、96.1%、90.9%和104.4%,RSD分别为2.1%、1.3%、1.1%、1.6%、0.7%、0.6%、1.8%、2.0%和1.4%;样品中上述9种成分含量范围分别为3.464~3.535、1.133~1.178、0.373~0.382、13.598~14.142、0.109~0.112、0.499~0.510、0.114~0.119、0.027~0.028和0.163~0.174 mg·g^(-1)。结论:经方法学验证,本方法可用于黑骨藤复方药物中9种有效成分的分析和含量测定,为复方黑骨藤药物的质量控制奠定基础。; 徐艳李琪姚瑾李慧敏张晓峰张宏; 关键词：獐牙菜苦苷龙胆苦苷杠柳苷四氢小檗碱

黑骨藤LC-MS定性分析及4种绿原酸一测多评分析方法被引量：3: 2021年; 利用UPLC-Q-TOF-MS法对黑骨藤进行定性分析,从乙酸乙酯片段和V(乙酸乙酯)∶V(甲醇)=1∶1片段中共分离出10种化合物.此外,首次建立黑骨藤中4种绿原酸的单标记多组分定量分析方法(QAMS),并对其有效性进行了系统评价.以隐绿原酸为内标物,在不同色谱条件下,该成分与其他3种组分的相对校正因子具有良好的重现性.通过比较QAMS法和外标法的结果,未发现显著差异(P>0.05,相关系数R>0.9993,相对误差δ<4.65%,相对标准偏差RSD<3.37%).; 李琪王博李晨阳赵喜玲陈坤张宏; 关键词：黑骨藤绿原酸

复方黑骨藤对佐剂性关节炎大鼠IL-4、IFN-γ及TGF-β1表达的影响被引量：10: 2017年; 目的:研究复方黑骨藤对佐剂性关节炎大鼠模型血清中IL-4、IFN-γ和TNF-α及关节滑膜组织中TGF-β1的表达水平的影响,以深入探讨复方黑骨藤对类风湿关节炎的治疗作用及其相关机制。方法:构建大鼠弗氏完全佐剂性(AA)关节炎模型,通过ELISA与免疫组化方法分别检测大鼠血液中IL-4、IFN-γ、TNF-α的含量和大鼠膝关节滑膜组织中TGF-β1的含量。结果:模型组与正常组比较,血清的IFN-γ、TNF-α水平升高,IL-4和滑膜组织中的TGF-β1水平降低(P<0.01)。复方黑骨藤组与模型组比较血清中IFN-γ、TNF-α水平显著下降,IL-4、TGF-β1水平上调,与模型组有显著性差异。结论:本实验研究表明复方黑骨藤能显著抑制IFN-γ、TNF-α的表达,增强IL-4、TGF-β1的表达,调整大鼠Th1/Th2细胞及其细胞因子失衡,从而减轻关节滑膜炎症的持续发展和软骨破坏,对实验性类风湿关节炎的滑膜组织中T细胞增生及浸润具有显著的抑制作用。; 冉然侯玉婷黎霞; 关键词：TH1/TH2 IL-4 IFN-Γ TGF-Β1

基于响应面方法对黑骨藤复方药物中总萜分析方法的快速优化被引量：2: 2013年; 通过Box-Benhnken Design(BBD)实验设计原理,优化硫酸香草醛法的显色条件,测定黑骨藤复方中总萜的含量,并通过BBD实验设计,用龙胆苦苷作为对照品,寻找最佳条件.结果表明,显色最佳条件为0.5 mL体积分数3%香草醛冰乙酸溶液,5 mL质量分数62%硫酸溶液,显色温度70℃,显色时间60min,优化条件下拟合方程的预测值与实验结果符合.龙胆苦苷在4.726～94.523 mg/L范围内线性关系良好,其回归方程为:Y=0.008 40X+0.045 54(r=0.999 24).BBD实验设计为该类实验提供显色条件优化的一种新方法,为黑骨藤复方中总萜的测定奠定良好的基础.; 罗岚黎霞李敏秦钊张宏; 关键词：龙胆苦苷

基于肠道菌群探讨复方黑骨藤有效成分组对胶原性关节炎大鼠的调节作用被引量：1: 2022年; 目的基于肠道菌群研究复方黑骨藤有效成分组(active ingredient group from Periploca forrestii Schltr.compound,AIG)对胶原诱导性关节炎(collagin-induced arthritis,CIA)大鼠的治疗作用。方法采用牛Ⅱ型胶原乳剂制备CIA大鼠模型,采用酶联免疫方法考察各组大鼠踝关节中TNF-α、IL-6的含量变化,同时运用16s rRNA高通量测序技术测定各组大鼠肠道菌群,并通过KEGG预测菌群功能。结果AIG可明显改善CIA大鼠关节滑膜组织中炎性细胞浸润和组织增生等情况,减轻关节肿胀,以及明显降低其踝关节中IL-6和TNF-α的含量。肠道菌群结果表明AIG能增加CIA大鼠拟杆菌门、拟普雷沃菌属和Prevotella_9的相对丰度,降低杜氏杆菌属、毛螺菌属等11种菌属的相对丰度。功能预测发现AIG可能影响细胞凋亡等信号通路。结论AIG可明显改善CIA大鼠足趾肿胀,以及关节滑膜中炎性细胞浸润和组织增生,修复CIA大鼠紊乱的肠道菌群结构,可能影响其细胞凋亡通路,恢复机体免疫力。; 王博张宏张宏李晨阳陈健沈磊李琪; 关键词：有效成分组胶原性关节炎肠道菌群

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国家自然科学基金(31240087)

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