山东省高等学校科技计划项目(J12LK03)
- 作品数：8 被引量：37H指数：5
- 相关作者：尹崇高李洪利刘雨清张宝刚张长杰更多>>
- 相关机构：潍坊医学院更多>>
- 发文基金：山东省高等学校科技计划项目国家自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤相关巨噬细胞通过EMT促进乳腺癌的浸润转移被引量：6
- 2013年
- 探讨肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)是否通过上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)促进乳腺癌浸润转移。免疫组化检测80例乳腺浸润性导管癌中TAMs标记物CD68、E-cadherin和Vimentin的表达。结果显示,乳腺浸润性导管癌中CD68阳性表达率明显高于正常乳腺组织,CD68阳性表达与分化程度、淋巴结转移程度相关,与E-cadherin表达呈负相关,与Vimentin表达呈正相关。分离新鲜肿瘤组织中的TAMs,细胞免疫荧光鉴定TAMs分离成功;乳腺癌MCF-7细胞在TAMs条件培养基培养后:细胞形态学发生改变;Transwell侵袭实验表明,细胞侵袭转移力增强;Western blot结果显示,细胞中E-cadherin表达明显减少,Vimentin表达明显增多。由此可得出,TAMs与乳腺癌的浸润转移过程密切相关,TAMs可促进MCF-7细胞发生EMT进而促进乳腺癌的浸润转移。
- 宋瑞卉张宝刚李洪利尹崇高董惠郭文君
- 关键词：乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞上皮-间质转化
- 吞噬细胞运动蛋白1在IL-8诱导的乳腺癌细胞的侵袭和转移中发挥重要作用被引量：7
- 2016年
- 目的探讨吞噬细胞运动蛋白1(engulfment and cell motility 1,ELMO1)在IL-8诱导的乳腺癌细胞侵袭和转移过程中的作用。方法采用趋化运动实验检测不同浓度IL-8刺激下乳腺癌细胞的趋化运动能力;采用Western blot检测乳腺癌细胞中ELMO1的表达情况;利用小RNA干扰技术,瞬时转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,用过表达质粒上调乳腺癌细胞MCF-7中ELMO1的表达;应用趋化运动实验和Transwell侵袭实验检测各组转染细胞的趋化和侵袭能力。结果趋化运动实验结果显示,在IL-8刺激下,乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的运动能力明显增强,具有剂量依赖性;Western blot结果显示ELMO1在si ELMO1/MDA-MB-231细胞中的表达明显降低,而在MCF-7/ELMO1细胞中的表达明显增高;趋化运动实验结果显示在IL-8刺激下,Si ELMO1/MDA-MB-231细胞组的趋化运动能力明显降低,MCF-7/ELMO1细胞组的趋化运动能力明显增强;Transwell侵袭实验结果显示在IL-8刺激下,敲除ELMO1明显降低MDA-MB-231细胞的侵袭能力,过表达ELMO1明显增强MCF-7细胞的侵袭能力。结论 IL-8能促进MDA-MB-231和MCF-7细胞的趋化运动和侵袭能力,而ELMO1在IL-8诱导的乳腺癌细胞趋化和侵袭作用中发挥重要作用。
- 张长杰徐新伟李洪利刘雨清尹崇高
- 关键词：乳腺癌IL-8趋化运动
- 靶向阻断Snail逆转非小细胞肺癌多药耐药的研究被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)与多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因的相互关系,为临床肺癌治疗提供实验和理论依据。方法:采用免疫组织化学SP法检测52例肺癌组织中Snail、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、肺耐药蛋白(lung resistance p rotein,LRP)的表达并分析它们的相关性。用RNA干扰技术稳定敲除肺腺癌细胞系A549中的Snail,采用Western blot法检测稳定转染后Snail蛋白的表达情况。Snail下降后,Western blot法检测P-gp、LRP蛋白表达情况。结果:Snail、P-gp、LRP在NSCLC组织中的表达率分别是73.1%、53.8%、51.9%,P-gp及LRP的蛋白表达与Snail的表达呈正相关。采用RNA干扰的方法成功敲除肺腺癌细胞系A549中Snail基因;A549细胞中Snail基因被敲除后耐药相关蛋白P-gp和LRP的表达明显降低。结论:在NSCLC中,Snail蛋白的表达与耐药相关基因的表达呈正相关;阻断肺癌细胞系A549细胞中的Snail能有效逆转肺癌的多药耐药特性。
- 张丽娜刘菲孙磊田慧玲陈为一李洪利张宝刚尹崇高郭文君
- 关键词：SNAIL上皮一间质转化LRP
- NUAK1增加乳腺癌细胞的趋化和粘附能力被引量：1
- 2014年
- 本课题组先前已证明NUAK1/ARK5可通过影响F-actin的聚合从而促进乳腺癌细胞的侵袭和转移.但是NUAK1是否还通过其它机制影响乳腺癌的侵袭和转移尚有待于探讨.本文证明NUAK1还可以影响乳腺癌细胞趋化、粘附能力从而在乳腺癌细胞侵袭转移中起重要作用.应用化学合成的小RNA干扰质粒转染到乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,用免疫印迹技术检测NUAK1蛋白的表达情况.结果显示,在敲除NUAK1的细胞(siNUAK1/MDA231)中,NUAK1蛋白表达水平明显降低;趋化运动实验结果显示,siNUAK1/MDA231细胞的趋化运动能力比未处理组(Scr/MDA231)细胞明显降低;细胞粘附实验结果显示,EGF刺激5 min、15 min后,siNUAK1/MDA231细胞比Scr/MDA231细胞粘附细胞数量均明显减少;免疫印迹技术检测integrinβ1磷酸化验证NUAK1影响乳腺癌细胞粘附的机制.结果显示,siNUAK1/MDA231细胞内integrinβ1磷酸化比Scr/MDA231细胞不同程度降低.上述结果表明,NUAK1通过磷酸化integrinβ1促进乳腺癌细胞与纤维粘连蛋白的粘附,从而促进乳腺癌的侵袭和转移.
- 李洪利尹崇高
- 关键词：乳腺癌整合素Β1粘附
- PKC-ζ通过上皮-间质转化对肺腺癌侵袭转移的影响
- 2017年
- 目的观察蛋白激酶C-ζ(PKC-ζ)通过上皮-间质转化(EMT)对肺腺癌侵袭转移的影响作用。方法应用RNAi技术将合成的小RNA干扰质粒瞬时转染入肺腺癌细胞系A549,进行Western blot检测转染,其后应用Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力及转染细胞组中E-cadherin,Vimentin蛋白的表达情况。结果转染72h后,与Scr/A549相比,Si PKC-ζ/A549中PKC-ζ蛋白表达量明显降低,同时Si PKC-ζ/A549的体外侵袭能力明显减弱(P<0.05),并伴有Vimentin蛋白表达水平的降低和E-cadherin蛋白表达水平的升高(P<0.05)。结论 PKC-ζ通过促进肺腺癌细胞EMT的发生,从而促进肺腺癌细胞的侵袭和转移。
- 潘文浩尹崇高李洪利
- 关键词：肺腺肿瘤E-CADHERINVIMENTIN
- GAB2提高体外培养的乳腺癌MCF-7细胞迁移能力被引量：7
- 2016年
- GRB2相关结合蛋白(GRB2-associated binding protein 2,GAB2)是Gabs家族重要成员,在细胞增殖、分化及迁移等过程中发挥重要作用。已有研究证明,GAB2与肿瘤侵袭转移相关,但目前GAB2在乳腺癌细胞侵袭中的研究少见报道。本研究证明,GAB2可提高乳腺癌MCF-7细胞迁移能力。Western印迹结果显示,GAB2蛋白在高转移细胞株MDA-MB-231中高表达;相反,在低转移细胞株MCF-7中低表达。瞬时转染结合Western印迹、酶联免疫吸附实验(ELISA)揭示,过表达GAB2明显增加MMP-2及MMP-9蛋白表达。Transwell检测显示,过表达GAB2明显增强MCF-7细胞的迁移能力。与未转染细胞比较,采用10 ng/m L表皮细胞生长因子(EGF)刺激转染细胞5 min,即可明显增强磷酸化的Akt、ARK5表达。上述结果提示,GAB2可通过参与Akt-ARK5信号通路,增加MMP-2、MMP-9蛋白表达,增强肿瘤细胞的迁移能力,这可能是GAB2促进肿瘤侵袭的部分机制。
- 田红艳李洪利刘雨清张长杰尹崇高
- 关键词：乳腺癌迁移基质金属蛋白酶-2基质金属蛋白酶-9信号通路
- microRNA-31通过靶向调控Dock1抑制乳腺癌的上皮-间质转化被引量：7
- 2019年
- 目的:探讨microRNA-31(miR-31)靶向调控Dock1对乳腺癌上皮-间质转化的影响。方法:通过qRT-PCR、Western blot检测人正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞中miR-31、Dock1的表达情况;将含有miR-31的过表达质粒或Dock1的敲除质粒转入乳腺癌细胞MDA-MB-231中并检测转染效率;用Western blot检测转染后各组细胞中Dock1的表达变化; Transwell侵袭实验检测转染及共转染后各组细胞的侵袭能力的变化; Western blot检测转染及共转染后各组细胞中EMT标志物的表达情况。结果:MCF-7细胞中miR-31的表达明显高于MDA-MB-231细胞,但两组都低于其在MCF-10A中的表达。转染对照及过表达质粒后,MDA-MB-231细胞中miR-31的表达较正常组与对照组明显上调,Dock1表达明显下调。Transwell侵袭实验结果显示,MDA-MB-231/miR-31组相比于MDA-MB-231/NC组穿过基底膜的细胞数明显减少,而与MDA-MB-231/miR-31+con组相比无明显差距; MDA-MB-231/miR-31+Dock1组与MDA-MB-231/miR-31+con组相比穿过基底膜的细胞数明显增多。Western blot结果显示,MDA-MB-231/miR-31和MDA-MB-231/miR-31+con细胞相比于MDA-MB-231/NC细胞中E-cadherin表达水平显著上调,在MDA-MB-231/miR-31+Dock1细胞中E-cadherin的表达水平与对照组相比无统计学意义;与MDA-MB-231/NC细胞相比,MDA-MB-231/miR-31和MDA-MB-231/miR-31+con细胞中Vimentin表达水平明显下调,MDA-MB-231/miR-31+Dock1细胞中Vimentin的表达水平几乎无变化。结论:miR-31可以靶向调控Dock1来抑制乳腺癌的上皮-间质转化,进而抑制乳腺癌的侵袭与转移。
- 曾国栋陈智凯林祥博尹崇高尹崇高
- 关键词：乳腺癌上皮-间质转化
- Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的研究被引量：5
- 2014年
- 目的:探讨Gab2-Akt-ARK5通路在胶质瘤侵袭中的意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测90例胶质瘤组织中ARK5及Gab2表达。采用小RNA干扰转染LN-229细胞株,Western Blot检测瞬时转染后ARK5及Gab2表达。体外侵袭实验检测转染后侵袭能力变化及Western Blot检测Gab2下降后Akt和ARK5的磷酸化。结果:胶质瘤组织中ARK5和Gab2免疫组织化学阳性结果呈正相关且在高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ、Ⅳ级)中表达明显高于低级别胶质瘤(WHO分级为Ⅰ、Ⅱ级)。转染ARK5、Gab2、ARK5-Gab2及SCR质粒的LN-229细胞分别称siARK5/LN-229、siGab2/LN-229、siARK5-siGab2/LN-229和SCR/LN-229。其中siARK5干扰效率为70%,siGab2的干扰效率为75%。转染后,与SCR/LN-229相比,siARK5/LN-229中ARK5表达降低,siGab2/LN-229中Gab2表达降低,siARK5-siGab2/LN-229中ARK5和Gab2表达均降低。siARK5/LN-229和siGab2/LN-229侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数均比对照组少(P<0.01),且siARK5-siGab2/LN-229细胞数减少更显著(P<0.01)。在IGF-1刺激下,siGab2/LN-229中Akt和ARK5的磷酸化减弱。结论:应用小RNA干扰技术降低ARK5或Gab2表达使LN-229细胞侵袭转移能力降低,同时Gab2表达降低抑制ARK5和Akt磷酸化,提示Gab2-Akt-ARK5通路参与胶质瘤细胞的侵袭。
- 孙磊刘雨清李小龙刘菲张丽娜李洪利张宝刚
- 关键词：胶质瘤小RNA干扰
