吉林省自然科学基金(201215230)
- 作品数：7 被引量：8H指数：3
- 相关作者：张颖高旭鲁承陈海迪赵文婧更多>>
- 相关机构：延边大学东北农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：吉林省自然科学基金吉林省牧业管理局资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 表达鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒的构建与鉴定被引量：3
- 2014年
- [目的]构建表达鹅细小病毒(GPV)VP3基因的重组腺病毒,为机体免疫试验和免疫效果评价奠定基础。[方法]以重组质粒pc DNA-VP3为模板,以GPV-VP3为目的基因,构建GPV-VP3重组腺病毒载体,通过转染获得能稳定表达GPV-VP3基因的重组腺病毒,通过IFA和Western-blot检测GPV-VP3基因的表达情况。[结果]扩增到的GPV-VP3基因全长为1 605 bp,线性化的重组腺病毒穿梭质粒p CR259-VP3能在QBI-HEK293细胞中瞬时表达GPV-VP3基因,表达蛋白的分子量约为60 Ku。[结论]该重组腺病毒的构建将为GPV新型疫苗研发和后期体内试验奠定基础。
- 陈海迪高旭张颖许应天张立媛于清洋鲁承
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因重组腺病毒真核表达
- 表达鹅α干扰素基因重组禽痘病毒的构建及表达产物抑制鹅细小病毒活性的初步研究被引量：1
- 2012年
- 为研究表达鹅α干扰素(GoIFN-α)基因重组活载体疫苗对抑制病毒增殖活性,本实验从植物血凝素刺激的延边白鹅外周血淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增gIFN-α基因,其大小为576 bp。将其与LacZ表达盒串联克隆于pSY681质粒中构建pSY681-IFN-α-LacZ转移重组质粒。采用脂质体将重组质粒转染于预感染禽痘病毒(FPV)017株的鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝/白斑筛选获得重组禽痘病毒rFPV-IFN-α。采用间接免疫荧光和western blot方法对重组毒鉴定结果显示,GoIFN-α基因在CEF中获得表达,分子质量约为29 ku。表达的CoIFN-α对鹅细小病毒在鹅胚成纤维细胞中的复制具有抑制作用。本研究为进一步开展GoIFN-α基因重组FPV活载体疫苗的体内试验奠定了基础。
- 张颖高旭陈海迪鲁承
- 关键词：IFN-Α重组禽痘病毒抗病毒
- 鹅细小病毒vp3基因PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2012年
- 本试验根据GenBank上发表的鹅细小病毒B株基因序列,针对vp3基因设计并合成了一对特异性引物,建立GPV vp3基因的PCR诊断方法。结果表明,该方法扩增的产物与预期大小相符(约654bp),而其他相关病毒均为阴性反应,敏感度为12.4pg。对15份GPV疑似病例检出的阳性率为100%,而琼脂扩散试验(AGP)检出的阳性率为60%。证明建立的PCR方法特异性强、敏感性高,可用于临床病料的快速诊断。
- 张颖高旭鲁承赵文婧
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因PCR
- 鹅细小病毒YBLJ株VP3基因的真核表达被引量：4
- 2012年
- 为了研究鹅细小病毒(GPV)YBLJ株VP3基因的生物学特性,根据已克隆的GPV YBLJ株VP3基因序列(GenBank:JN836326),设计并合成一对特异性引物,经PCR扩增、克隆、转化、酶切与亚克隆,构建真核表达载体pcDNA-VP3,将鉴定正确的质粒转染至Vero细胞,经RT-PCR检测VP3基因转录水平,通过间接免疫荧光试验(IFA)观察VP3基因表达水平。结果显示,克隆的VP3基因全长约1 605bp,构建了真核表达载体pcDNA-VP3,经RT-PCR对转染细胞总RNA扩增得到特异性目的片段,IFA检测显示VP3基因在Vero细胞中获得了稳定表达。本研究为GPV核酸疫苗的研制奠定了基础。
- 张颖鲁承赵文婧陈海迪高旭
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因真核表达
- 鹅细小病毒vp2基因工程亚单位疫苗的免疫试验被引量：1
- 2012年
- 为研究鹅细小病毒(GPV)VP2蛋白基因工程亚单位疫苗对实验动物的免疫效果,本试验对GPV延边分离株的vp2基因进行原核表达,将Western-blot试验鉴定为阳性的表达蛋白进行乳化,免疫BALB/c小鼠,应用ELISA方法监测试验动物的体液免疫水平,以此评价该疫苗的免疫效果。结果表明,在三免后2d,重组蛋白佐剂组检测到的血清OD450nm值达0.687,而生理盐水阴性对照组为0.038,两者差异极显著(P<0.01),提示本研究制备的基因工程亚单位疫苗在试验动物体内产生了VP2抗体水平。
- 高旭张颖鲁承修占伍
- 关键词：鹅细小病毒基因工程亚单位疫苗免疫试验
- 延边白鹅γ干扰素基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2012年
- 为了研究延边白鹅γ干扰素的生物学特性,本试验采用刀豆素(ConA)刺激延边白鹅外周血淋巴细胞,提取总RNA,经RT-PCR方法扩增鹅γ干扰素基因,将其克隆到pMD18-T载体中,进行序列和序列分析。结果显示,延边白鹅γ干扰素基因全长495bp,经序列比对发现,克隆到的延边γ白鹅干扰素基因(JX966250)与哈尔滨鹅γ干扰素基因(AY524421)核苷酸序列同源性高达100%,与广东狮头鹅(EU030377)核苷酸序列同源性达99.6%,而三者的氨基酸同源性为100%。本试验成功克隆到延边白鹅γ干扰素基因,为进一步研究鹅干扰素的分子生物学特性和抗病毒作用机理奠定了基础。
- 张颖高旭汪雨婷陈海迪鲁承黄闯武宇辉
- 关键词：Γ干扰素克隆
- 延边白鹅IFN-α基因的原核表达及其表达产物生物学活性的研究被引量：1
- 2014年
- 以本实验室构建的鹅pMD18-T-IFN-α载体为基础,利用PCR技术扩增得到鹅α干扰素(IFN-α)DNA,经BamHⅠ+SalⅠ双酶切,将其亚克隆到原核表达载体pET-30a上。将构建的重组质粒pET-30aIFN-α转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western-blot分析鉴定;用Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白作为抗原,免疫家兔制备多克隆抗体并进行鉴定。结果显示,PCR扩增出的鹅α干扰素基因全长576bp;成功构建了原核表达载体pET-30a-IFN-α并得到表达;经SDS-PAGE和Western-blot检测,该蛋白的分子质量约为29ku,以纯化后的重组蛋白为抗原免疫家兔,成功制备了多克隆抗体,血清效价为1∶32。本试验为研究鹅IFN-α的作用机理,开发有效防治鹅疾病的新型制剂奠定了基础。
- 彭永刚陈海迪高旭张颖鲁承张丽媛于清洋宋铭忻
- 关键词：Α干扰素原核表达多克隆抗体
