NSFC-广东联合基金(U0831004)
- 作品数：6 被引量：31H指数：3
- 相关作者：吕敏娜吴彩艳戚南山孙铭飞廖申权更多>>
- 相关机构：广东省农业科学院南京农业大学广州英赛特生物技术有限公司更多>>
- 发文基金：NSFC-广东联合基金广东省农科院院长基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆和表达
- 2012年
- 通过RT-PCR方法克隆出GD株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-1)的结构蛋白VP1基因片段,VP1基因片段和原核表达载体pMAL-C2X均以EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后构建获得重组质粒pMAL-C2X-VP1,经限制性酶切和序列测序证明,目的基因正确插入表达载体,转入E.coli BL21(DE3),构建重组表达菌E.coliBL21/pMAL-C2X-VP1,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明,DHV-1的结构蛋白VP1能在E.coliBL21(DE3)中表达,获得可溶性重组蛋白,表达产物的分子质量约为69ku。
- 吕敏娜戚南山覃宗华廖申权余劲术袁建丰吴彩艳孙铭飞
- 关键词：VP1基因
- 柔嫩艾美耳球虫感染鸡的盲肠上皮间淋巴细胞表达白介素17的动态变化被引量：3
- 2012年
- 以1×104个柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊感染10日龄AA肉鸡,于感染后第24、48及72小时分离鸡盲肠上皮间淋巴细胞(IELs)。提取鸡盲肠IELs总RNA,用实时荧光定量PCR方法检测IL-17的表达动态;然后用FITC标记的抗鸡CD4单抗和PE标记的抗小鼠IL-17单抗作为抗体对盲肠IELs进行荧光抗体染色,再进行流式细胞术分析,检测了表达IL-17的CD4+盲肠IELs在柔嫩艾美耳球虫感染后的动态变化。实时荧光定量PCR结果表明,鸡在感染柔嫩艾美耳球虫后能够显著上调IL-17mR-NA的表达水平,流式细胞分析结果表明,在球虫感染后表达IL-17的CD4+细胞数量显著上升。这些结果表明,IL-17参与了宿主抵抗球虫感染的反应。
- 张蕾马立平刘任强汪明
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫白介素17
- 顶复门原虫类异戊二烯生物合成途径及其关键酶的研究进展被引量：2
- 2012年
- 顶复门原虫包括疟原虫(Plasmodium spp.)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、艾美耳球虫(Eimeria spp.)、锥虫(Trypanosoma spp.)、泰勒虫(Theileria spp.)及巴贝斯虫(Babesia spp.)等一大类引起严重人畜疾病的寄生性原虫。顶复门原虫利用2C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)途径合成类异戊二烯前体物质,这些化合物对于维持顶复门原虫的生存具有十分重要的作用。1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸(DOXP)还原异构酶是MEP途径的关键酶,对其作用机理及抑制剂的筛选研究已取得重要进展。论文对顶复门原虫类异戊二烯的MEP途径,DOXP还原异构酶的作用机理及靶标研究进展进行综述。
- 廖申权吴彩艳戚南山吕敏娜覃宗华孙铭飞
- 关键词：药靶
- 顶复门原虫入侵相关因子的研究进展被引量：22
- 2012年
- 顶复门原虫是一类专一性的细胞内寄生原虫,包括弓形虫(Toxoplasma gondii)、隐孢子虫(Cryptosporid-iumspp.)、疟原虫(Plasmodiumspp.)、巴贝斯虫(Babesiaspp.)及艾美耳球虫(Eimeriaspp.)等,是人和动物的重要病原。这类原虫具有相似的亚细胞结构和保守的入侵机制。研究结果表明,入侵过程是由大量的入侵相关蛋白分子所介导的,包括微线、棒状体及致密颗粒所分泌的相关蛋白等。随着生物信息学及分子生物学的发展,顶复门原虫入侵相关蛋白分子的研究资料也日益增多。笔者结合最近几年本课题组的研究成果,综述了顶复门原虫入侵相关蛋白因子的最新进展。
- 戚南山孙铭飞廖申权吴彩艳吕敏娜袁建丰余劲术李祥瑞蔡建平
- 关键词：入侵机制
- 柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白EtRON2基因的克隆及序列分析被引量：6
- 2011年
- 预测并克隆柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2(EtRON2)基因,分析其结构特点及与顶复门其他虫属间的差异。本研究利用生物信息学和比较基因组学技术注释拼接得到柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)棒状体颈部蛋白2(EtRON2)的基因序列,用RT-PCR方法扩增出Etron2全长ORF;以E.tenella子孢子的基因组DNA为模板,用PCR方法成功扩增出Etron2ORF片段的gDNA序列片段。生物信息学分析结果显示,Etron2ORF片段的gDNA含有11个内含子,ORF全长为4 020bp,编码一段全长为1 339个氨基酸的多肽片段,与其他物种RON2的氨基酸序列相似性为15%～41%;Etron2基因在顶复门原虫中相对保守,与犬新孢子虫及弓形虫相似性最高,亲缘关系最近,Etron2的成功克隆填补了柔嫩艾美耳球虫在此方面研究的空白,为进一步研究其功能打下了基础。
- 戚南山孙铭飞廖申权吴彩艳吕敏娜袁建丰余劲术蔡建平李祥瑞
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫基因克隆
- 柔嫩艾美耳球虫Etron2基因在不同发育阶段转录水平差异的分析被引量：2
- 2012年
- 为研究柔嫩艾美耳球虫不同发育时期Etron2基因的转录水平差异,选取E.tenella生活史中的未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子、第二代裂殖子,分别提取总RNA,反转录为cDNA;选择Etactin作为参照基因,Etron2为目的基因,设计实时荧光定量PCR的引物,分析在E.tenella生活史中不同发育阶段Etron2转录水平的差异。结果显示Etron2在未孢子化卵囊中转录水平最高,然后分别是裂殖子、孢子化卵囊和子孢子。在柔嫩艾美耳球虫发育过程中,Etron2基因可能在未孢子化卵囊阶段被转录储备,随着宿主细胞的刺激,得以大量表达,在入侵过程中发挥作用。
- 戚南山孙铭飞吴彩艳廖申权吕敏娜袁建丰余劲术李祥瑞蔡建平
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫实时荧光定量PCR转录水平
