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国家高技术研究发展计划(2006AA10Z301)

作品数:13 被引量:77H指数:6
相关作者:林俊芳郭丽琼赵力超王杰程抒劼更多>>
相关机构:华南农业大学广东农工商职业技术学院合肥工业大学更多>>
发文基金:国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
相关领域:农业科学轻工技术与工程生物学化学工程更多>>

文献类型

  • 13篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 6篇农业科学
  • 5篇生物学
  • 4篇轻工技术与工...
  • 1篇化学工程

主题

  • 6篇克隆
  • 4篇银耳
  • 4篇基因
  • 3篇木聚糖
  • 3篇木聚糖酶
  • 3篇聚糖酶
  • 3篇基因克隆
  • 2篇芽孢
  • 2篇紫杉
  • 2篇紫杉醇
  • 2篇灰盖鬼伞
  • 2篇基因表达
  • 2篇鬼伞
  • 2篇红豆杉
  • 2篇福寿螺
  • 1篇电击转化
  • 1篇动力学模型
  • 1篇遗传转化体系
  • 1篇诱导剂
  • 1篇蔗渣

机构

  • 13篇华南农业大学
  • 2篇广东农工商职...
  • 1篇福建农林大学
  • 1篇合肥工业大学

作者

  • 12篇郭丽琼
  • 12篇林俊芳
  • 3篇程抒劼
  • 3篇杨培周
  • 3篇王杰
  • 3篇赵力超
  • 2篇刘二鲜
  • 2篇聂燕华
  • 2篇黄仕杰
  • 2篇郑兰娟
  • 1篇韩飞
  • 1篇郭心悦
  • 1篇柳永
  • 1篇刘晓娟
  • 1篇王艺红
  • 1篇王晓丹
  • 1篇王燕
  • 1篇赵姝娴
  • 1篇娄囡囡
  • 1篇尤琳烽

传媒

  • 2篇生物技术通报
  • 2篇食品与发酵工...
  • 1篇中国科学(C...
  • 1篇农业工程学报
  • 1篇中国农业科学
  • 1篇食品工业科技
  • 1篇食品科学
  • 1篇食用菌学报
  • 1篇中国食品学报
  • 1篇Agricu...
  • 1篇现代食品科技

年份

  • 1篇2014
  • 2篇2012
  • 2篇2011
  • 2篇2010
  • 3篇2009
  • 3篇2008
  • 1篇2007
13 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
木聚糖酶酶活性测定方法及酶活性单位定义被引量:21
2009年
为统一木聚糖酶酶活性的单位定义及测定方法进行了实验。通过对现有酶活性的单位定义及测定方法的比较分析,得出木聚糖酶的酶活性单位定义为:在特定条件下,每分钟水解木聚糖形成1μmol木糖(还原糖)所需酶量为1个酶活力单位(U),并且采用还原糖法中的DNS法作为测定木聚糖酶酶活性的方法,该法具有合理性和科学性,建议以此作为木聚糖酶酶活性测定及酶活性单位定义的统一方法。
王晓丹郭丽琼赵力超林俊芳
关键词:木聚糖酶酶活性测定
银耳芽孢完整细胞高效转化体系的建立被引量:13
2008年
银耳(Tremella fuciformis)属于高等担子菌,其担孢子芽殖产生酵母状分生孢子称为银耳芽孢.银耳芽孢单核,能像酵母那样快速生长且容易培养,具备优良外源基因表达宿主的特点.本研究以gpd-Gl启动子分别与绿色荧光蛋白基因gfp和潮霉素抗性基因hph连接构建表达载体pGlg-gfp和pGlq-hph;设置潮霉素浓度梯度在3种培养基中对银耳芽孢的敏感性进行测定,结果表明银耳芽孢在不同的培养基上对潮霉素的敏感性不同,在MA培养基上其最低敏感浓度为5μg/mL;采用电击法把pGlq-hph质粒转化进银耳芽孢完整细胞,假定转化子经MA筛选培养基筛选,结果表明银耳芽孢完整细胞电击转化的最佳参数为:STM电击缓冲液、银耳芽孢浓度1.0×108个/mL,电击体积200μL,表达质粒6μg,电击电压2.0kV/cm,电击后采用MB液体培养基静置预培养48h,转化率达277个/μgDNA.采用最佳电击参数把质粒pGlg-gfp和pGlg-hph按1︰1共转化银耳芽孢,转化子经过筛选培养基筛选、PCR鉴定及Southern杂交验证,结果表明受鉴定的8个转化子中有3个整合了gfp基因,其共转化率为37.5%.这3个gfp基因转化子的芽孢在激光荧光显微镜下可观察到发出强烈的荧光,表明了外源gfp基因能够在银耳芽孢中获得高效率的表达.
郭丽琼柳永赵姝娴刘二鲜林俊芳
关键词:电击转化基因表达GFP基因
福寿螺(Ampullaria crossean)mfc基因的分子克隆和序列分析被引量:9
2008年
目的:从福寿螺胃组织细胞中克隆多功能纤维素酶基因(mfc)。方法:设计引物,采用RT-PCR方法从福寿螺胃组织细胞中扩增多功能纤维素酶基因,与pGEMT-easy载体连接,转化大肠杆菌DH5α。结果:该基因全长为1225bp,上游5′端非翻译区19bp,3′端非编码区21bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)1185bp,编码395个氨基酸,推测等电点pI为6.57,分子质量45.8kDa。推测的多功能纤维素酶具有糖苷水解酶保守的氨基酸序列,属于糖苷水解酶第10家族。同源性比对结果显示,该基因及推测的氨基酸序列与egx(Gen-Bank Accession No.AAP31839)的同源性分别为99.3%和99.8%,在8个位点出现核苷酸差异,在1个位点出现氨基酸差异。通过软件分析并预测,该基因编码的蛋白共存在14个丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸磷酸化位点,没有信号肽序列。结论:成功克隆出福寿螺多功能纤维素酶基因。
杨培周郭丽琼王艺红林俊芳
关键词:福寿螺克隆
Development of Highly Efficient Transformation System of Yeast-Like Conidia of Tremella fuciformis被引量:3
2009年
Tremellafuciformis is one of higher basidiomycetes. Its basidiospore can reproduce yeast-like conidia, which is also called the blastospore by budding. The yeast-like conidia of T. fuciformis is monokaryotic and easy to culture by submerged fermentation similar to yeast. Thus, it is a good recipient cell for exogenous gene expression. In this study, the expression plasmid pAN7-1 (containing promoter gpd-An derived from Aspergillus nidulans and selectable marker gene hph conferring resistance to hygromycin B) and plasmid pLg-hph (containing promoter gpd-Le derived from Lentinula edodes and selectable marker gene hph) were transformed into the yeast-like conidia of T. fuciformis by PEG-mediated protoplast transformation, respectively. The primary putative transformants were selected by the sandwich screening method with the selective medium containing 50 μg mL^-1 hygromycin. The putative transformants were obtained from the primary putative transformants transferred on PDSA plates containing 100 μg mL^-1 hygromycin for second round selection. Experimental results showed that the optimal concentration of PEG 4000 for mediating protoplast transformation was 25%. PCR and Southern blotting confirmed that the selectable marker gene hph was integrated effectively into the genome of the yeast-like conidia of T. fuciformis with plasmid pLg-hph transformation. Its transformation efficiency was 110 transformants per μg DNA, and the hph gene was integrated into the genome of some yeast-like conidia with plasmid pAN7-1 transformation. However, its transformation efficiency was only 9 transformants per μg DNA. The presence of hph gene in the genome of transformants after 5 generations of sub- culturing on PDSB medium was confirmed by PCR, suggesting that the foreign gene hph was stable during subculture.
GUO Li-qiongLIU Er-xianWANG JieLIN Jun-fang
关键词:PROMOTER
转基因草菇高产多功能纤维素酶的培养条件
2010年
以转多功能纤维素酶基因(mfc)草菇子代中单孢分离获得的高产多功能纤维素酶菌株TVM186为研究对象,分析固态发酵对该工程菌株产多功能纤维素酶(MFC)的影响。通过单因素试验分析麸皮粉、大豆粉、香蕉皮粉等对MFC活性的影响,确定发酵主要影响因子为麸皮粉和大豆粉,适宜配比为质量比1∶1;利用均匀设计分析发酵条件对该菌株产MFC的影响,结果表明:草菇工程菌株TVM186固态发酵的适宜培养条件为:培养基起始pH值7.4,接种量6%,温度34℃,时间10 d,含水量64%,装料量18.5 g,其酶活力可达到木聚糖酶(Xylanase)1 427.38 U/g、内切-β-1,4-葡聚糖酶(CMCase)597.59 U/g。
郑兰娟林俊扬林俊芳郭丽琼
关键词:草菇固态发酵木聚糖酶
重组多功能木聚糖酶酶解条件的优化被引量:2
2014年
重组多功能木聚糖酶(recombinant multi-functional xylanase,RMFXase)是以草菇为表达载体,具有多种酶活力的新型酶。为揭示该酶与底物的作用规律,同时为转基因酶的应用提供基础数据,该文利用重组多功能木聚糖酶水解南方特色的甘蔗加工废弃物生产低聚木糖,通过响应面法建立以重组多功能木聚糖酶质量浓度、底物质量浓度和酶解时间为控制因素的反应动力学方程组,从而推导得到酶解最佳工艺参数。试验并通过高效液相色谱法法,监测反应过程中产物的动态变化,分析产物的生成规律。结果表明,通过响应面法推导出符合连续式酶解反应器的最佳酶解工艺参数为:加酶量900 U/mL、底物质量浓度110 mg/mL、反应时间80 min。该条件下酶解木聚糖含量为54.7%的蔗渣半纤维素,得到的低聚木糖DP值达到3,酶解率达到23.94%。酶解过程中重组多功能木聚糖酶表现出高内切-β-1,4-木聚糖活力,优先降解大分子木聚糖,后期产物主要以木二糖和木三糖为主,且底物纯度越高,底物利用率越高。
赵力超王燕刘晓娟林俊芳
关键词:食品动力学模型蔗渣
银耳芽孢内源gpd启动子的克隆与功能鉴定被引量:7
2012年
利用反向长距离PCR技术从银耳(Tremellafuciformis)芽孢gpd基因出发克隆上游gpd启动子序列,将预测的gpd启动子片段与多功能纤维素基因(mfc)连接构建表达载体,与潮霉素抗性质粒pBgGl-hph共转化银耳芽孢,对拟共转化子进行酶活发酵试验。结果表明:4轮反向长距离PCR克隆得到了1761bp的上游序列,经预测启动子落在上游1000bp左右区域内,包含两个高分值的起始转录位点,将gpd启动子分成gpd-Tre1(885bp)、gpd-Tre2(708bp)、gpd-Tre3(466bp)3段区域,分别与多功能纤维素基因(mfc)构建表达载体pgTre1-mfc、pgTre2-mfc和pgTre3-mfc。拟共转化子酶活发酵试验结果发现3个表达载体的转化子均能检测到多功能纤维素酶活,转化子T1-2包含gpd-Tre1启动子大片段,整体酶活最高,CMC酶活为14.12U/mL,比出发菌株Tr01提高34.3%,比工程菌株yLes3提高25.7%,木聚糖酶活为34.8U/mL,比Tr01酶活提高26.3%,略低于yLes3。3个启动子片段均具有表达活性,相比之下885bp的大片段gpd启动子表达活性更高。
聂燕华林俊芳王杰尤琳烽郭丽琼
关键词:银耳芽孢
多功能纤维素酶基因克隆及其在灰盖鬼伞中的表达研究
纤维素酶是能将纤维素降解成纤维二糖和葡萄糖等小分子物质的一类酶的总称。纤维素酶在食品、饲料、能源、纺织、造纸、医药等领域有着广泛的用途。生物转化纤维素生成葡萄糖至少需要内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶等三种不同...
杨培周郭丽琼蔡永乐张伟苑林俊芳
关键词:灰盖鬼伞基因表达
文献传递
南方红豆杉10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶基因的克隆与生物信息学分析被引量:3
2011年
对中国重要药用植物南方红豆杉中的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因进行分离、测序以及生物信息学分析。根据GenBank中已登录的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术从南方红豆杉叶片中克隆了1个DBAT基因Tc-DBAT的全长cDNA。结果显示,Tc-DBAT cDNA含有1个1 323 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码440个氨基酸,对应基因组序列含有1个内含子。Tc-DBAT蛋白N端含有5个N-酰基化作用位点和2个保守的N-糖基化作用位点,具有1个保守的B ig-1结构域,多个重要的磷酸化位点以及1个类似钙结合蛋白重复结构。序列同源性比较、系统发生分析以及蛋白质高级结构预测均表明,Tc-DBAT属于转移酶超家族(transferase superfamily),是一个具有乙酰转移酶活性的功能蛋白,能够催化10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)10位的乙酰化,从而生成抗癌新药紫杉醇生物合成途径中的最后一个双萜中间体——巴卡亭Ⅲ。有望通过成功克隆和鉴定紫杉醇生物合成途径中的关键酶基因达到提高其半合成前体巴卡亭Ⅲ产量的目的,并且为进一步利用组合表达系统商业化生产紫杉醇奠定基础。
程抒劼黄仕杰郭丽琼韩飞林俊芳
关键词:南方红豆杉紫杉醇基因克隆生物信息学分析
银耳芽孢的诱导培养及其差异基因片段的克隆被引量:1
2012年
为了探讨银耳芽孢内源诱导型启动子克隆的有效方法,克隆银耳芽孢诱导型差异基因片段,本研究采用乙醇和纤维二糖两种碳源对银耳芽孢进行诱导培养,对其生长情况进行了比较分析,并用cDNA-AFLP技术对差异培养的细胞进行差异表达基因克隆及分析。结果表明乙醇、纤维二糖诱导碳源培养银耳芽孢与葡萄糖相比具有很大差异,其中乙醇培养细胞脱氢酶类活性提高168%,纤维二糖培养细胞最大生长量减小32.2%。从两种差异培养的细胞中克隆得到14条特异性的差异表达基因片段,其中5条在乙醇、纤维二糖样品中各有表达的差异序列,与编码细胞色素C氧化酶、细胞色素b蛋白的基因序列同源,该基因的表达与乙醇代谢途径及胁迫诱导相关。银耳芽孢诱导培养及其诱导差异基因片段的克隆是建立食用菌诱导型表达系统一次有益尝试,为构建高效银耳生物反应器提供一定的理论参考。
聂燕华王杰林俊芳郭丽琼
关键词:银耳芽孢诱导剂
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