湖北省自然科学基金(2012FFB01404)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
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- 猪源嗜性衣原体HB1043株主要外膜蛋白(MOMP)基因的分析及重组表达被引量：2
- 2013年
- 根据GenBank中衣原体主要外膜蛋白(MOMP)全基因序列设计特异性引物,以临床分离的衣原体病原中提取的衣原体全基因组为模板,利用特异性引物PCR扩增得到MOMP全基因序列。通过BLAST比对,结果显示其与已提交的猪流产衣原体CG1株的MOMP序列(EU531729)有1个碱基不同。根据对测序结果进行信号肽序列预测及内切酶位点分析,选用BamHⅠ和SalⅠ双酶切将目的蛋白序列克隆到表达载体pET-28a上,得到重组质粒pET-28a-MOMP。将重组质粒转化入E.coli BL21进行表达,表达产物使用镍离子亲和层析柱进行纯化得到目的蛋白rMOMP。目的蛋白经Western-blot检测,证明其具有免疫学活性。
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- 基于重组外膜蛋白的猪流产嗜性衣原体病抗体ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2015年
- 为建立检测流产嗜性衣原体(C.abortus)抗体的快速检测方法,本研究以纯化的重组表达C.abortus主要外膜蛋白(MOMP)为包被抗原,采用方阵法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度,对反应条件进行优化,建立了C.abortus抗体的间接ELISA检测方法。该方法与猪流行性乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒阳性血清均无交叉反应;该方法检测稀释800倍的C.abortus阳性血清仍呈阳性;批内和批间变异系数均小于10%。采用所建立的ELISA方法与间接血凝(IHA)方法分别对62份临床血清样品进行检测,阳性率分别为83.87%(52/62)和70.97%(44/62),符合率为87.09%(54/62)。由此表明,本实验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,适于C.abortus流行病学调查。
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- 关键词：主要外膜蛋白ELISA抗体检测
