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产异丁醇大肠杆菌工程菌的构建被引量：7: 2011年; 酮酸脱羧酶是异丁醇生物合成的关键酶,而大肠杆菌中没有此基因。将乳脂乳球菌NIZO B1157的2-酮酸脱羧酶基因kdcA克隆到非生产菌株大肠杆菌中,同时串联表达与前体物质酮酸相关的alsS、ilvC和ilvD基因,构建了串联表达质粒pSTV29-alsS-ilvC-ilvD-kdcA。大肠杆菌工程菌成功表达了4个基因,并能利用葡萄糖发酵产异丁醇,发酵24 h后最高产量为3 g/L。; 林丽华郭媛庞浩黄日波; 关键词：大肠杆菌异丁醇重组菌

我国甘薯生产燃料乙醇的工艺现状及脱水技术改进被引量：4: 2010年; 介绍了我国甘薯生产燃料乙醇的必要性及其优势,详细介绍了甘薯燃料乙醇的工艺现状,并针对现行工艺中脱水技术的不足,通过实验探索提出一套完全由甘薯构成的燃料乙醇制备过程,重点改进了原工艺的吸附脱水技术,提高了甘薯的综合利用率,为工业化生产甘薯燃料乙醇的绿色工艺提供新思路。; 张琳叶魏光涛童张法陈砺区瑞琨; 关键词：燃料乙醇甘薯脱水技术

生淀粉酶生产菌株Paenibacillus sp.的筛选和酶的纯化及酶学性质被引量：6: 2010年; 分离得到1株产生淀粉酶的菌株,通过扩增和测定16S rDNA序列并进行比对,发现是Paenibacillus属的细菌。液体摇瓶发酵结束后,其产生的生淀粉酶比酶活达108.5U/mL。通过饱和(NH4)2SO4沉淀、Sephacryl S-300层析的方法对其所产的生淀粉酶进行分离纯化,得到纯化的酶蛋白比酶活为5112.04U/mg,纯化倍数为14.1,相对分子质量约为1.0×105。该酶以木薯生淀粉为底物时,最适pH5.6,最适温度50℃。金属离子Ca2+、Mg2+对该酶具有激活作用,Zn2+、Cu2+、Fe2+、Ni2+、Mn2+、Co2+和EDTA2-对该酶均具有抑制作用。; 曾丽娟杨键陈英王青艳黄日波; 关键词：PAENIBACILLUS 生淀粉酶

一种不依赖钙离子的酸性α淀粉酶基因的克隆表达被引量：1: 2010年; 以产酸性淀粉酶菌株Bacillus sp.CN7的基因组DNA为模板,PCR扩增到α淀粉酶成熟肽基因,将该基因插入表达质粒pSE380中,构建重组质粒pSE380-cn7a。将重组质粒导入到Escherichia coli JM109中,IPTG诱导表达。重组酶经Sephacryl S300、Ni-NTA纯化后测定其酶学性质。重组酶CN7A的最适温度为65°C,最适pH为5.5?6.0,对可溶性淀粉的Km值为3.784g/L,最大反应速度为101.2mg/(L·min),该酶的热稳定性不依赖钙离子。; 杨键王青艳金辉秦艳王成华黄日波; 关键词：克隆表达 PKA

富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达被引量：3: 2010年; 利用反向-巢式PCR(IN-PCR)从富集土壤宏基因组DNA中克隆到一种α-淀粉酶基因的全序列,其基因登录号为GU045523,测序分析显示与来自Bacillussp.KR-8104耐酸淀粉酶不完整基因同源性为99%。将获得的α-淀粉酶成熟肽基因与表达载体pSE380连接,导入Escherichia coliJM109中,IPTG诱导表达。粗酶液经Ni-NTA、SephacrylS-200纯化后测定酶学性质:重组酶GXAA的最适作用pH为7.0,最适作用温度为75℃,对可溶性淀粉的Km值为11.6g/L。构建突变子E27G、A450T、E27G-A450T,其酶学性质与原始酶没有显著差别。; 杨键曾丽娟廖思明王青艳杜丽琴韦宇拓黄日波; 关键词：宏基因组侧翼序列 Α-淀粉酶

降解生淀粉真菌的筛选、鉴定及其产生淀粉酶的性质研究被引量：3: 2010年; 以生木薯粉为唯一碳源,对收集的土壤样品悬浮液进行培养、I2/KI溶液染色,经摇瓶复筛和菌株发酵上清液RSDE活力测定,筛选出10株RSDE活力较高的真菌;对RSDE活力最高的真菌菌株1-31进行形态学观察和ITS(Internaltranscribed spacer)序列分析,将其鉴定为青霉属。对青霉1-31的酶学性质进行测定,结果发现其RSDE对生木薯淀粉的最适作用pH和温度分别为5.0和55℃;分别以玉米和大米为底物时,其RSDE的生淀粉分解活力比(RDA)较高,为59.0%和58.8%;青霉1-31 RSDE对生木薯粉的吸附率约为37.0%。HPLC检测发现,以该菌株RSDE水解生木薯粉4 h,仅释放出葡萄糖,说明青霉1-31产生的RSDE主要为生淀粉糖化酶。电镜观察结果发现,经青霉1-31 RSDE处理,可使生木薯粉颗粒光滑完整的表面变得粗糙,形成无数小坑,说明青霉1-31 RSDE对生淀粉具有较强的水解作用。因此,青霉1-31 RSDE在各种生淀粉如木薯、玉米、大米和马铃薯生淀粉等加工业中具有一定的应用潜力。; 林海娟冼亮段承杰刘君梁冯家勋; 关键词：生淀粉酶青霉降解酶性质

原生质体复合诱变选育耐高温高产乙醇酵母菌株被引量：3: 2011年; 以酿酒酵母Ygx-5为出发菌株,对其原生质体进行紫外线(UV)与亚硝基胍(NTG)复合诱变,经初筛和复筛,选育出1株耐高温、高产乙醇菌株U-N2。在37℃培养条件下,菌株U-N2产乙醇浓度最高可达16.32%vol,比原菌株提高20.44%,比只用紫外线诱变后的菌株提高8.04%,比只用亚硝基胍诱变后的菌株提高6.27%。经过20次传代培养,乙醇产量稳定。; 申乃坤王青艳秦艳王成华廖思明朱婧黄日波; 关键词：燃料乙醇原生质体亚硝基胍复合诱变

纯溶剂在线性低密度聚乙烯膜中扩散的计算: 2012年; 为了评价和预测密封材料线性低密度聚乙烯(LLDPE)的防渗透性能,结合实验和数学模型2种手段,研究5种化工溶剂在LLDPE薄膜中的扩散性能.采用稳态渗透汽化实验和吸附溶胀实验分别获得各组分的渗透通量数据和平衡吸附量.引入Fujita自由体积模型阐述扩散系数,根据渗透通量实验数据拟合得到各组分的自由体积参数.结果表明,渗透通量的计算值与实验值基本一致.根据模型计算得到5种溶剂的扩散系数随温度变化的曲线.通过求解Fick第二定律的偏微分方程数值解,得到不同时刻5种溶剂在平板膜内部的质量浓度分布曲线.结果表明,LLDPE对5种溶剂的防渗透性能良好.; 邹昀童张法刘琨冯献社; 关键词：渗透汽化 FICK第二定律

酿酒酵母中的嗜热细菌木糖异构酶活性表达及木糖代谢研究被引量：5: 2009年; 将来自嗜热放线细菌Thermobif ida f usca的木糖异构酶(xylose isomerase,XI)基因xylA,连接于酵母表达载体pYES2的半乳糖诱导启动子(PGAL)下,得到重组质粒pYES2-xylA,用其转化酵母菌INVSc1,测定重组酵母菌株INVSc1-xylA的木糖异构酶活性,并对重组酵母菌株进行木糖葡萄糖共发酵试验,探讨在酿酒酵母中建立新的生产乙醇木糖代射途径。结果木糖异构酶在75℃,pH值6.8的酶活力最高,在酿酒酵母中成功地获得活性表达,并且SDS-PAGE电泳有明显的特异性表达产物带,单体分子量为43kD。INVSc1-xylA在木糖葡萄糖共发酵实验中消耗木糖和产生乙醇分别比对照菌提高53.8%和36%,提高了其生产乙醇的能力。; 王青艳杨登峰孙靓陆雁黄日波; 关键词：木糖异构酶酿酒酵母

淀粉结合域与α-淀粉酶的融合表达及其酶学性质被引量：1: 2010年; 利用RT-PCR从Rhizopus oryzaeGX-08总RNA中克隆到糖化酶的淀粉结合域(SBD)基因(sbd),将该基因片段插入α-淀粉酶(CN7A)基因cn7a的5′端构建融合表达质粒pSE-sbdcn7a。嵌合酶SBD-CN7A在Escherichia coliJM109表达,并经Ni-NTA、Sephacryl S300纯化。酶学性质研究表明:嵌合酶在最适作用条件方面与原始酶并无明显差别;在以生玉米粉为底物时,其比酶活提高了8.7倍,而以可溶性淀粉为底物时其比酶活是原始酶的1.8倍,Km也从3.784 g/L降低为2.234 g/L;嵌合酶在65℃下的半衰期从10 min缩短为4 min。结果表明,淀粉结合域SBD的融合赋予了α-淀粉酶CN7A水解生淀粉的能力。; 杨键金辉王青艳黄日波; 关键词：热稳定性

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