国家重点基础研究发展计划(2010CB134404)
- 作品数：6 被引量：45H指数：5
- 相关作者：张金文王蒂牛继平梁慧光马廷蕊更多>>
- 相关机构：甘肃农业大学甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室甘肃省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划甘肃省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 马铃薯中糖苷生物碱的提取研究被引量：9
- 2012年
- [目的]优选马铃薯中糖苷生物碱的提取方法和条件。[方法]以新鲜的马铃薯皮为样品,采用乙酸提取-氨水沉淀、超声波辅助酸水提取-氨水沉淀、甲醇提取-氨水沉淀、双溶剂法提取、多溶剂混合提取、酸醇提取-氨水沉淀及乙酸和亚硫酸钠提取-氨水沉淀7种方法对马铃薯中的糖苷生物碱进行提取,通过单因素试验考察提取温度、超声时间、酸浓度对提取效果的影响,优化马铃薯中糖苷生物碱的提取方法与条件。[结果]7种提取方法中,以超声波辅助酸水提取-氨水沉淀法的提取效果最好;最佳提取条件为温度30℃,超声时间20 min,酸度25%。[结论]不用有机溶剂而直接加一定浓度的酸并辅助以超声波振荡的提取方法具有操作简单、提取周期短、提取效果较好的特点。
- 薄丽丽孙晓彦林浩戴明婧牛继平张金文王蒂
- 关键词：马铃薯糖苷生物碱
- 马铃薯SGT3基因表达及其启动子功能分析被引量：7
- 2014年
- 鼠李糖转移酶(rhamnosyltransferase SGT3)是植物糖苷生物碱合成的关键酶,它主要调控α-茄碱和α-查茄碱从其β形式的转化。本文研究马铃薯栽培种SGT3基因的表达特点及其启动子的功能。实时定量PCR结果发现在红光照射24h后,SGT3的表达量是黑暗处理的26.8倍,说明红光显著诱导了SGT3的表达;为进一步分析该基因的光调控机理,本项研究克隆到SGT3上游长度为2449bp的启动子序列,通过分析发现该启动子的转录起始位点位于翻译起始位点上游-152bp,同时确定了该启动子核心序列及上游增强子、抑制子序列,受病原菌、损伤、干旱、ABA激素及一系列光调控的顺式元件。构建不同长度(349,572,979,1312和1870bp)的该启动子驱动报告基因GUS的植物表达载体并转化烟草。结果证明,不同长度的SGT3启动子都可以启动GUS表达,但没有CMV35S启动的GUS表达量高;其中在P572和P979的表达强度较高,这可能与该片段含有启动子的正调控元件(GATA BOX,5′UTRPY-RICH STRETCH)有关,GUS表达强度在P1312和P1870中明显减弱,预测到该区段存在抑制基因表达的负调控元件(WRKY710S);SGT3启动子的组织特异性实验表明GUS染色主要集中在烟草叶片的叶脉部分,茎中的表皮、韧皮部及木质部,但髓部几乎不表达,根中主要分布在根冠、分生区以及维管束组织中。上述结果为将来研究SGT3在糖苷生物碱合成过程中的调节功能提供了依据。
- 崔同霞白江平魏桂民赵旭王蒂张金文
- 关键词：基因表达启动子功能分析
- 外源NO和H_2O_2诱导不同颜色马铃薯花青素积累被引量：9
- 2012年
- 以不同块茎颜色马铃薯品种陇薯8号、陇薯7号、LC310-2和山东彩肉为材料,研究外源NO、H2O2、NO+H2O2处理对淀粉积累期马铃薯块茎花青素合成及相关酶活性的影响。结果表明:经外源NO和H2O2处理后,4个基因型马铃薯薯皮和薯肉花青素含量均升高,PAL、PPO和CHI活性增强;诱导效果为0.1mmol.L-1SNP(NO的供体)+0.25mmol.L-1H2O2>0.25mmol.L-1H2O2>0.1mmol.L-1SNP>清水(CK),说明NO和H2O2处理对马铃薯花青素合成具有一定的促进作用,且表现为加性效应。
- 马廷蕊张金文梁慧光柳永强
- 关键词：马铃薯H2O2花青素PALPPOCHI
- 马铃薯块茎糖基转移酶基因的克隆及其RNAi载体的构建被引量：3
- 2011年
- 为探讨鼠李糖基转移酶(rhamnosyltransferase,sgt3)基因与类固醇糖苷生物碱(steroidal glycoalkaloid,SGAs)合成关系,揭示sgt3基因在SGAs合成中的作用,本研究根据GenBank No:DQ266437保守区设计特异引物,通过RT-PCR技术获得马铃薯块茎sgt3相似基因;采用生物信息学相关软件分析,预测sgt3相似基因cDNA序列编码的蛋白质结构和功能,构建基于sgt3基因的植物干扰表达载体。结果表明,克隆的sgt3相似基因与报道的sgt3基因序列相似性达到99.54%,其ORF长为1500bp,编码505个氨基酸残基,具有UDPG糖基转移酶保守结构域及许多重要功能位点;三级结构预测表明,该氨基酸同糖基转移酶单体结构模型相似,为糖基转移酶家族成员,表明可能具有合成类固醇糖苷生物碱功能,基因序列已注册到GenBank,序列登录号为HM188447。以此为靶序列,构建由Actin启动子和CIPP启动子驱动的与sgt1和sgt2基因相似度高的含有sgt3基因序列的干扰表达载体,将为糖苷生物碱的合成、代谢的进一步研究及低糖苷生物碱转基因马铃薯品种的培育奠定基础。
- 王旺田张金文王蒂张俊莲司怀军陶士珩
- 关键词：马铃薯基因克隆RNAI载体
- NO和H_2O_2依赖Ca^(2+)/CaM信号调控马铃薯花青素积累被引量：8
- 2013年
- 以不同块茎颜色马铃薯品种陇薯8号、陇薯7号、LC310-2和山东彩肉为材料,研究外源NO、H2O2、NO+H2O2处理对马铃薯块茎花青素合成及其信号物质Ca2+-ATPase和CaM的影响。结果表明:外源NO和H2O2处理后,4个基因型马铃薯薯皮和薯肉花青素积累,Ca2+-ATPase活性升高,CaM含量增加,其效果为NO+H2O2>H2O2>NO>水(CK),并且花青素的积累量与Ca2+-ATPase活性和CaM含量均呈正相关,其平均决定系数达0.9194和0.8859。说明NO和H2O2对马铃薯花青素合成具有一定的促进作用,而细胞Ca2+/CaM信号发挥了NO和H2O2对马铃薯花青素合成诱导的信号调节。
- 马廷蕊张金文梁慧光柳永强王金虎
- 关键词：彩色马铃薯NOCA2+
- 马铃薯SGAs合成代谢途径末端SGT酶基因克隆及序列分析被引量：11
- 2012年
- 糖苷生物碱(SGAs)是一类存在于茄科植物和百合科植物的重要次生代谢物,与植物抗逆性和产品品质有密切关系,同时在医药上具有广泛的药理学活性。茄啶:糖基转移酶(SGT)为SGAs合成代谢途径末端关键酶,研究其基因结构及其编码的酶蛋白特性,对于调控植物体内SGAs合成及其通过微生物发酵生产SGTs有重要的作用和意义。通过生物信息学分析方法预测3个糖基转移酶cDNA编码的酶蛋白结构和特性。以马铃薯块茎表皮总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出3个糖基转移酶(SGT1、SGT2和SGT3)基因片段并克隆到pMDR19-T载体。阳性克隆经PCR鉴定后进行测序,序列分析结果表明,克隆到的sgt1、sgt2和sgt3三个同源的序列片段(1 467～1 518bp),编码488～505个氨基酸;所得序列与GenBank中注册的高等植物SGT酶基因核苷酸序列(U82367.2、DQ 218276.1和DQ 266437)的同源性均在99.12%以上,氨基酸同源性达到99%以上,3个基因都具有UDPG糖基转移酶保守结构域及许多重要功能位点;PI为5.52～5.62。三级结构预测表明,该氨基酸同糖基转移酶单体结构模型相似,都为糖基转移酶家族成员,具有合成类固醇糖苷生物碱的功能,基因序列已注册到Gen-Bank,序列注册号分别为:sgt1,JN695005;sgt2,JN695006;sgt3,HM188447。
- 牛继平张金文王旺田王蒂陆艳梅张俊莲
- 关键词：马铃薯糖苷生物碱
