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上海市青年科技启明星计划(11QA1405800)
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唐雪明
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杨奇
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唐雪明
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2013
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Cry2A杀虫蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化
2013年
通过PCR方法从克隆载体上扩增转基因水稻中的抗虫基因cry2A,经限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-30a(+)中,成功构建了蛋白表达载体pET-30a(+)/Cry2A,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.4mmol/L、诱导时间为6h、诱导温度为30℃的表达条件下,目的蛋白表达量最高,大部分以包涵体形式表达。将包涵体裂解并用Ni-NTA亲和柱纯化,所得纯化蛋白在复性缓冲液中复性,最终得到有活性的高纯度目的蛋白。
杨奇
韩芳婷
刘启文
蒋玲曦
谭芙蓉
吴潇
赵凯
王金斌
唐雪明
关键词:
转基因水稻
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