江苏省自然科学基金(BK2010576)
- 作品数：14 被引量：89H指数：4
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- 17-β雌二醇对SKOV3细胞HOXA10基因表达及甲基化的影响
- 2011年
- 目的探讨17-β雌二醇(17-βE2)对人卵巢癌细胞株SKOV3中HOXA10基因表达及基因启动子区CpG岛DNA甲基化的影响。方法体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,按实验目的分别加入1×10-6、1×10-7、1×10-8mol/L的17-βE2培养48h后,收集细胞,分别采用实时荧光定量RT-PCR反应和Westernblot检测HOXA10mRNA和蛋白表达;提取SKOV3细胞基因组DNA,纯化、修饰后用甲基化特异性聚合酶链反应检测HOXA10基因启动子区CpG岛DNA甲基化状态。结果与对照组相比,不同浓度的17-βE2可显著提高SKOV3细胞中HOXA10基因mRNA和蛋白表达(P<0.05)。同时17-βE2作用后HOXA10基因呈部分甲基化状态。结论 17-βE2可以逆转SKOV3细胞中HOXA10基因启动子区CpG岛DNA甲基化状态,使HOXA10基因的表达上调。
- 汤伟伟万贵平花蕾程文俊
- 关键词：17-Β雌二醇SKOV3细胞HOXA10基因DNA甲基化
- miR-135a对卵巢上皮性癌细胞中HOXA10基因表达及细胞增殖和凋亡的影响被引量：4
- 2013年
- 目的研究微小RNA-135a（miR-135a）对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系SKOV3细胞中HOXAIO基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法（1）应用生物信息学技术预测与miR-135a高度相关的靶基因（即HOXAIO基因）。（2）将miR-135a成熟体模拟物（mimics）、miR-135a成熟体抑制物（inhibitor）及阴性对照分别转染SKOV3细胞，采用逆转录（RT）-PCR技术和蛋白印迹法检测转染不同时间（分别为24、48和72h）后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA和蛋白的表达水平。（3）报告基因实验验证miR-135a对HOXAIO基因表达的调节作用，采用含miR-135a的质粒和含HOXAIO基因的重组质粒共同转染SKOV3细胞，以转染微小RNA（mirRNA）慢病毒质粒者为对照。（4）采用四甲基偶氮唑蓝（MTI＇）比色法检测转染不同时间（分别为24、48和72h）后SKOV3细胞的增殖能力[以吸光度（A）值表示]，蛋白印迹法检测转染48h后SKOV3细胞中凋亡相关蛋白[包括bel-2、bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（（3aspase-3）]的表达。结果（1）生物信息学技术预测，得出与miR-135a高度相关的靶基因为HOXAIO基因。（2）RT—PCR技术检测显示，随着转染时问的延长（分别为24、48和72h），mill-135amimics转染后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA的表达水平（分别为0．94±0．04、0．78±0．03、0．70±0．03）逐渐降低（P〈0．05）；miR-135ainhibitor转染后SKOV3细胞中HOXAIOmRNA的表达水平（分别为1．14±0．05、1．16±0．03、2．60±0．08）逐渐升高（P〈0．05）；且两者转染48及72h后，分别与阴性对照（为1．00）比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。蛋白印迹法检测显示，转染不同时间后SKOV3细胞中HOXAIO蛋白的表达水平与HOXAIOmRNA的变化一致。（3）报告基因实验显示，含miR一135a的质粒和含HOXAIO基因的重组质粒共同转染SKOV3细胞后，与对照比较，其荧光素酶活性下降了67．8％（P〈0．01）。（4）M
- 汤伟伟万贵平万一聪张林程文俊
- 关键词：微RNAS卵巢肿瘤细胞增殖
- miR-218在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义被引量：5
- 2014年
- 目的:研究miR-218在上皮性卵巢癌组织中的表达水平及其与临床病理特征之间的相关性,并进一步探讨miR-218在卵巢上皮性癌细胞株HEY中的表达和生物学功能。方法:采用实时定量PCR法分别检测25例卵巢良性肿瘤、54例上皮性卵巢癌以及卵巢上皮性癌细胞株中的miR-218表达水平,并结合临床病理特征进行分析。采用ROC曲线评价miR-218作为上皮性卵巢癌诊断截断点的可能性。转染miR-218 mimics、miR-218 inhibitor后,采用MTT法检测改变miR-218的表达对卵巢癌细胞增殖的作用。结果:上皮性卵巢癌组织中miR-218表达水平显著高于良性肿瘤组织(P<0.05)。miR-218表达与卵巢癌患者的FIGO分期有关,晚期(Ⅲ、Ⅳ期)高于早期(Ⅰ、Ⅱ期)(P<0.05);但与年龄、分化程度和淋巴结转移无关(P>0.05)。ROC曲线下面积为0.8054(95%CI为0.7140~0.8968),最佳截断点为0.0085。上调miR-218的表达水平可促进卵巢上皮性癌细胞株HEY的增殖能力。结论:miR-218表达的上调可能与上皮性卵巢癌的发生及进展有关。
- 马晶晶吴姗石莉姜旖程文俊
- 关键词：上皮性卵巢癌MIR-218细胞增殖
- 卵巢上皮性癌中肌切蛋白的表达及其临床意义被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨肌切蛋白(Scinderin)在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义。方法:运用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法和蛋白质印迹(Western blot)法分别检测34例卵巢上皮性癌、21例卵巢良性肿瘤和20例正常卵巢组织中肌切蛋白mRNA和蛋白的表达情况,并进行临床资料统计,分析肌切蛋白与卵巢上皮性癌临床病理参数间的关系。结果:卵巢上皮性癌组中肌切蛋白mRNA及蛋白表达量均显著高于良性卵巢肿瘤组和正常卵巢组(P<0.01),而在正常卵巢组与良性卵巢肿瘤组中,肌切蛋白mRNA及蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。肌切蛋白mRNA和蛋白表达与卵巢上皮性癌病理分级、淋巴结转移有关(P<0.01;P<0.05),而与患者年龄、肿瘤临床分期无相关性(P>0.05)。结论:肌切蛋白在卵巢上皮性癌中表达上调,且在低分化卵巢上皮性癌中表达高于中-高分化卵巢上皮性癌,有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者,提示肌切蛋白与卵巢上皮性癌患者的不良预后相关,可作为判断卵巢上皮性癌预后的生物学标志物。
- 吴姗马晶晶姜旖马小玲范文程文俊
- 关键词：卵巢上皮性癌蛋白质印迹
- 上皮性卵巢癌组织MEG3及其内含子miR-770-5p表达临床意义分析被引量：13
- 2015年
- 目的分析长链非编码RNA MEG3及其内含子miRNA-770-5p在上皮性卵巢癌中的表达及其意义,为探讨上皮性卵巢癌的发生机制提供新的思路和方向。方法收集2008-01-06-2013-08-29南京医科大学第一附属医院妇科收治并经病理确诊的卵巢良性肿瘤43例(对照组),上皮性卵巢癌62例(实验组)。应用实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测实验组和对照组中MEG3、miR-770-5p及其靶基因ARPC2的相对表达量,并利用Pearsonχ2相关分析法分别分析其相关性,采用χ2检验分析上皮性卵巢癌患者中MEG3的表达量与临床病理资料的关系。结果上皮性卵巢癌组织MEG3表达为0.091±0.012,低于卵巢良性肿瘤组的0.246±0.027,t=5.541,P<0.001;上皮性卵巢癌组织miR-770-5p表达为0.036±0.006,低于卵巢良性肿瘤组的0.251±0.042,t=6.077,P<0.001;上皮性卵巢癌组织靶基因ARPC2表达为0.299±0.034,高于对照组的0.060±0.012,t=5.639,P<0.001。MEG3与miR-770-5p之间的表达呈正相关,r=0.469,P=0.003;而miR-770-5p与靶基因ARPC2的表达呈负相关,r=-0.663,P<0.001。MEG3的表达与上皮性卵巢癌患者淋巴结转移有关,χ2=3.387,P=0.034;而与患者的年龄、临床病理分期、病理分级和组织学类型无关,P>0.05。结论 lncRNA MEG3与其内含子microRNA miR-770-5p在上皮性卵巢癌中表达下调而靶基因ARPC2上调,相互之间呈一定相关性,提示它们可能在上皮性卵巢癌的的发生与进展中起重要作用。
- 徐辉姿沈孝青陆佳万一聪杨一君周树林程文俊
- 关键词：长链非编码RNA内含子微小RNA
- MiR-200a在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义被引量：2
- 2012年
- 目的探讨miR-200a上皮性卵巢癌组织中的表达及与临床病理特征关系。方法采用Taqman茎环探针实时荧光定量PCR方法检测40例上皮性卵巢癌和30例良性上皮性卵巢肿瘤组织标本中miR-200a的表达,分析miR-200a的表达量与临床病理特征关系。结果 miR-200a在卵巢癌组织中的相对表达量显著高于良性卵巢肿瘤组织(P<0.01),在晚期卵巢癌组织中表达低于早期卵巢癌组织(P<0.05),在低分化卵巢癌中表达有下降趋势。miR-200a表达与病理类型及淋巴结转移无相关性。结论 miR-200a在上皮性卵巢癌组织中表达升高,在晚期卵巢癌中表达下降,提示其可能在卵巢癌的发生发展中起原癌基因的作用,并参与晚期卵巢癌的侵袭转移。
- 徐韶华程文俊许培箴
- 关键词：MICRORNA上皮性卵巢癌
- 己烯雌酚对OVCAR3细胞株HOXA10基因表达与甲基化影响及其机制的探讨被引量：1
- 2012年
- 目的:研究己烯雌酚(DES)对卵巢上皮性癌细胞株OVCAR3中HOXA10基因表达及启动子区甲基化状态的影响。方法:体外培养卵巢上皮性癌细胞株OVCAR3,分别加入5×10-6、5×10-7和5×10-8 mol/L的DES培养5d(120h)后收集细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印记技术检测HOXA10基因mRNA和蛋白的表达水平;运用甲基化特异性聚合酶链反应检测HOXA10基因启动子区的甲基化状态。结果:随着DES浓度的升高,OVCAR3细胞中HOXA10基因的表达存在升高的趋势,且各组间的表达差异有统计学意义,HOXA10基因mRNA表达(5×10-8 mol/L DES组与对照组比较,P=0.002;5×10-7 mol/L DES组与5×10-8 mol/L DES组比较,P=0.028;5×10-6 mol/L DES组与5×10-7 mol/L DES组比较,P=0.000 2)、HOXA10基因蛋白表达(5×10-8 mol/L DES组与对照组比较,P=0.032;5×10-7 mol/L DES组与5×10-8 mol/L DES组比较,P=0.049;5×10-6 mol/L DES组与5×10-7 mol/LDES组比较,P=0.009);且DES可诱导HOXA10基因启动子区的甲基化状态发生去甲基化改变。结论:DES可以上调卵巢上皮性癌细胞株OVCAR3细胞中HOXA10基因的表达,这与DES对HOXA10基因启动子区甲基化状态的影响有关。
- 万一聪张林姜旖马小玲程文俊
- 关键词：卵巢肿瘤己烯雌酚同源盒基因DNA甲基化
- 卵巢交界性肿瘤的诊断和治疗被引量：2
- 2013年
- 目的探讨临床卵巢交界性肿瘤的诊断和治疗。方法回顾性分析本院22例卵巢交界性肿瘤患者的临床诊断、治疗资料,通过术后病理切片检查,对比临床有效的检测方法,同时对患者采用的治疗方法进行汇总,特别是针对手术治疗的效果进行分析,研究临床有效率较高的治疗方法,并对患者的存活率进行记录。结果本组22例患者中,死亡3例,5年存活率为95.45%,10年存活率为86.36%。患者采用B超和影像学检查,确诊率较高,临床均为手术切除治疗,患者的治疗有效率较高,疗效显著。结论卵巢交界性肿瘤的临床治疗可能性较高,患者的存活率较高,在临床治疗中可以使用手术切除联合化疗治疗,提高患者的治疗效果。
- 徐剀程文俊
- 关键词：卵巢交界性肿瘤
- 子宫内膜异位症患者血清CCL28的表达及其对在位子宫内膜间质细胞EMT的影响
- 2022年
- 目的 探讨子宫内膜异位症(EM)患者血清C-C基序趋化因子配体28(CCL28)的表达及其对在位子宫内膜间质细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法 用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测30例EM患者(EM组)和子宫肌瘤患者(对照组)血清CCL28表达水平。用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清CCL28诊断EM的价值,计算曲线下面积(AUC)。从EM患者子宫内膜分离并培养原代间质细胞,稳定感染sh-RNA-CCL28慢病毒的细胞记为sh-CCL28组;感染sh-RNA阴性对照慢病毒的细胞记为sh-NC组。Western-blot检测EMT相关分子:E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、果蝇蜗牛同源蛋白(Snail);Transwell法检测细胞侵袭和迁移;Annexin-V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡。结果 EM组血清CCL28浓度高于对照组(P<0.05)。血清CCL28诊断EM的AUC为0.813,灵敏度和特异度分别为83.33%和73.33%。与sh-NC组相比,sh-CCL28组E-cadherin蛋白表达水平较高,而N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达水平较低(P<0.05)。与sh-NC组相比,sh-CCL28组细胞侵袭数和迁移数较低,而凋亡率较高(P<0.05)。结论 EM患者血清CCL28表达水平升高,对临床诊断有一定价值;CCL28通过调控EMT影响EM的发生发展。
- 成小霞郭玲董洪果
- 关键词：子宫内膜异位症子宫内膜间质细胞
- 己烯雌酚对HOSE细胞中HOXA10基因表达及DNA甲基化的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究己烯雌酚对人正常卵巢上皮细胞株HOSE中HOXA10基因表达及基因启动子区CpG岛甲基化的影响。方法用不同浓度的己烯雌酚(5×10-6、5×10-7、5×10-8 mol/L)作用于体外培养的人正常卵巢上皮细胞株HOSE。培养5d后收集细胞,应用实时荧光定量PCR和Western blot检测HOXA10基因mRNA和蛋白的表达;运用甲基化特异性PCR检测HOXA10基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果己烯雌酚作用后,HOSE细胞中HOXA10基因mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),并且HOXA10基因启动子区发生去甲基化改变。结论己烯雌酚可以上调人正常卵巢上皮细胞株HOSE中HOXA10基因的表达,与其对HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化的影响有关。
- 万一聪张林姜旖马小玲程文俊
- 关键词：己烯雌酚卵巢上皮性癌同源盒基因DNA甲基化
