广东省高等学校自然科学研究重点项目(Z02036)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 相关作者：庄东红欧阳永长胡忠李翔陈秋佳更多>>
- 相关机构：汕头大学中国科学院更多>>
- 发文基金：广东省高等学校自然科学研究重点项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 苦瓜MAP30基因功能性片段的克隆和表达
- 2007年
- 背景与目的:MAP30是一种具有抗肿瘤、抗HIV和抗病毒等功能的蛋白。通过克隆和表达该蛋白的核心片段,用于进一步研究基因功能和结构域之间的关系。材料与方法:设计了两对特异性的引物,通过PCR技术从苦瓜总DNA中分别扩增出两段含有成熟MAP30蛋白基因的功能性片段T8-S194和T8-N263,然后将目标基因克隆到原核表达载体pET-28a上,构建成带有C端6His-tag的融合表达载体,经测序鉴定后用CaCl2介导的化学转化法转化到E.coliRosettaTM(DE3)pLysS中。利用PCR筛选出阳性克隆,经IPTG诱导工程菌表达出重组蛋白。通过Western blot对重组蛋白进行分析。结果:含T8-S194和T8-N286基因片段的两个表达载体构建成功,它们的表达重组蛋白能与兔抗His-tag多克隆抗体发生特异性反应。结论:构建的两个含目的基因的表达载体均能在E.coliRosettaTM(DE3)pLysS中表达出预期的重组蛋白,为进一步研究这两个重组蛋白打下了基础。
- 庄东红陈秋佳欧阳永长
- 关键词：苦瓜克隆原核表达活性片段
- 苦瓜MAP30基因原核表达载体的构建和PCR快速检测重组子的研究被引量：9
- 2004年
- 根据已报道的序列,把苦瓜(Momordicacharantia)MAP30基因成功克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并对PCR快速检测阳性克隆进行了研究。结果表明,直接用菌落、菌液、酚氯仿处理过的菌液,以及提取的质粒进行PCR都可以成功地筛选阳性菌落。其中,酚氯仿处理过的菌液PCR与质粒PCR的结果最接近,而且比质粒PCR简单,因此可作为方便可靠的阳性克隆筛选的新方法。
- 庄东红欧阳永长胡忠
- 关键词：PCR苦瓜
- α-苦瓜素基因的克隆和原核表达被引量：3
- 2008年
- α-苦瓜素(Alpha-momorcharin)是一种多功能核糖体失活蛋白,具有抗肿瘤、抗HIV-1和抗菌活性,并同时具有免疫抑制活性。利用PCR(polymerase chain reaction)技术从苦瓜基因组中扩增出了成熟的α-苦瓜素蛋白基因,并亚克隆到表达载体pET28a(+)上,然后分别在BL21(DE3)和RosettaTM(DE3)pLysS中进行表达。结果表明只在RosettaTM(DE3)pLysS中,重组α-苦瓜素基因能成功地表达出33kD大小的重组蛋白,而且在18℃和22℃的温度下,经IPTG诱导后,能成功地表达出大量可溶性重组蛋白。利用重组蛋白的N末端带有的6×His标签,通过Ni-NTA柱纯化获得了α-苦瓜素重组蛋白。Western杂交实验表明,纯化后的重组蛋白可与鼠抗His-Tag单克隆抗体发生特异性反应。α-苦瓜素重组蛋白的获得为进一步系统研究和改造其功能与活性奠定了基础。
- 欧阳永长庄东红胡忠李翔
- 关键词：重组蛋白
- 大肠杆菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达
- 2007年
- 以大肠杆菌(Escherichia coli)W3350菌株总DNA为模板,根据已报道的几种生物的甘露醇-1-磷酸脱氢酶(mannitol-1-phosphate dehydrogenase)基因(mtlD)序列设计引物,通过PCR扩增到1条长约1.15 kb的特异片断,把该片断连接到pUCm-T载体上进行测序。序列分析结果表明,该基因编码区全长1149 bp,共编码382个氨基酸,与报道的mtlD基因修正序列完全一致。将该基因插入到原核表达载体pET28a(+),IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析,发现在约45 kD处明显比对照多出1条带,凝胶扫描后经Bandscan 5.0软件分析表明,该特异条带的蛋白含量占菌体可溶性总蛋白的72.9%。Western blot检测其为带组氨酸标签的融合蛋白,而质谱分析证实其为甘露醇-1-磷酸脱氢酶。转化子的耐盐能力比对照提高了约20%。该基因提交到GeneBank数据库,返回的接受号为DQ660889。
- 谢启鑫庄东红欧阳永长胡忠钟名其彭桂庄
- 关键词：大肠杆菌基因克隆原核表达
