国家自然科学基金(81272890)
- 作品数：8 被引量：17H指数：2
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- 相关机构：北京协和医院国家人口计生委科学技术研究所北京世纪坛医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 耐药性妊娠滋养细胞肿瘤治疗的研究进展被引量：8
- 2015年
- 妊娠滋养细胞疾病（gestational trophoblastic disease， GTD）是一组源于胎盘滋养细胞异常增殖的疾病，包括良性病变与恶性病变。良性病变即葡萄胎，包括完全性葡萄胎和部分性葡萄胎；而恶性病变又称为妊娠滋养细胞肿瘤（gestational trophoblastic neoplasm，GTN），包括侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌（绒癌）、胎盘部位滋养细胞肿瘤（placental site trophoblastic tumor，PSTT）和上皮样滋养细胞肿瘤（epithelial trophoblastic tumor，ETT）[1]。GTN发生于育龄期妇女，因其对化疗高度敏感，而且可以通过检测血清hCG水平来监测疾病的进展以及对治疗的反应，迄今几乎100%的低危型患者和80%～90%的高危型患者通过化疗达到治愈[2]，但是仍有一部分患者对一线化疗耐药或者病情缓解后复发。研究表明，无转移低危型、有转移低危型以及高危型GTN患者，对一线化疗耐药的发生率分别为10%～20%、30%～50%和20%～30%，从而需要接受补救性化疗[3]。目前，世界范围内已报道了多种补救性化疗方案，但是各种化疗方案的有效性和副反应仍需要进一步研究，本文就耐药性GTN治疗的研究进展作一综述。
- 肖长纪向阳
- 关键词：妊娠滋养细胞肿瘤耐药性GESTATIONAL胎盘部位滋养细胞肿瘤妊娠滋养细胞疾病上皮样滋养细胞肿瘤
- C1QBP基因在绒毛膜癌耐药细胞株中的表达及其与耐药的关系
- 2014年
- 目的 检测补体成分1Q亚成分结合蛋白（C1QBP）基因在绒毛膜癌（绒癌）耐药细胞株及其亲本细胞株中的表达差异,探讨以C1QBP基因为靶向的RNA干扰能否有效逆转绒癌耐药细胞株对相应化疗药物的耐药性.方法 （1）通过实时荧光定量PCR技术、蛋白印迹法和细胞免疫荧光法检测绒癌耐药细胞株,即氟脲嘧啶脱氧核苷（FUDR）耐药细胞株JeG-3/FUDR、甲氨蝶呤（MTX）耐药细胞株JeG-3/MTX、依托泊苷（VP-16）耐药细胞株JeG-3/VP、放线菌素D（ACTD,又称KSM）耐药细胞株JeG-3/KSM细胞,以及亲本细胞株JeG-3细胞中C1QBP mRNA和蛋白的表达及蛋白定位.（2）靶向构建C1QBP基因的短发夹状RNA（shRNA）,包装成C1QBP基因RNA干扰（RNAi）慢病毒表达载体,即C 1QBP-RNAi-LV,转染绒癌耐药细胞,实时荧光定量PCR技术及蛋白印迹法检测转染后绒癌耐药细胞株JeG-3/FUDR细胞和亲本细胞株JeG-3细胞中C1QBP mRNA和蛋白的表达,活细胞计数（CCK-8）法检测各绒癌耐药细胞的药物敏感性的变化.结果 （1）转染前绒癌耐药细胞株JeG-3/FUDR、JeG-3/MTX、JeG-3/VP、JeG-3/KSM细胞中C1QBP mRNA表达水平分别为2.520±0.680、1.770±0.230、1.940±0.090、1.740±0.350,均明显高于亲本细胞株JeG-3细胞（为1.000）,差异均有统计学意义（P＜0.05）.4种绒癌耐药细胞中C1QBP蛋白表达强度均高于亲本细胞株JeG-3细胞;绒癌耐药细胞和亲本细胞中均存在C1QBP蛋白的表达,均定位于细胞内的线粒体.（2）转染后绒癌耐药细胞株JeG-3/FUDR细胞中C1QBP mRNA表达水平下调了93.1％（P＜0.01）,C1QBP蛋白表达完全被抑制.（3）转染后绒癌耐药细胞株JeG-3/FUDR、JeG-3/MTX、JeG-3/VP和JeG-3/KSM细胞的耐药指数较其相应RNAi阴性对照分别下降了86.3％、93.9％、92.8％和89.9％,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 C1QBP基因在绒癌耐药细胞株中表达明显增高,沉默C1QBP基因表达可以有效逆转绒癌耐药细�
- 沈晓燕韩冰沈芸杨隽钧任彤沙桂华向阳
- 关键词：绒毛膜癌载体蛋白质类线粒体蛋白质类RNA干扰
- 活性氧介导P62蛋白激活参与甲氨蝶呤耐药绒癌发病机制研究
- 2014年
- 目的探讨甲氨蝶呤(MTX)耐药绒癌的发生机制。方法 2012年5月至2013年1月于北京协和医院以人绒毛膜上皮癌JEG-3细胞及本课题组前期构建的MTX耐药绒癌JEG-3/MTXR细胞为研究对象,采用免疫印迹、RTPCR法检测MTX处理后细胞内P62的变化。流式细胞仪检测MTX诱导后JEG-3/MTXR细胞内活性氧(ROS)变化,采用ROS清除剂Mn Tm Py P检测MTX作用后JEG-3/MTXR细胞内P62蛋白水平的变化。RNA干扰法沉默P62基因免疫印迹法和流式细胞仪检测MTX诱导后JEG-3/MTXR耐药细胞内PARP蛋白的表达和凋亡率的变化。结果 MTX可诱导耐药绒癌P62蛋白和m RNA表达水平呈时间依赖性上调。MTX可诱导耐药绒癌ROS表达水平升高,Mn Tm Py P降低P62蛋白的表达。P62-si RNA可促进JEG-3/MTXR细胞内MTX诱导的凋亡反应蛋白PARP的切割和激活,流式细胞仪检测RNA干扰联合药物组细胞凋亡率(14.4±1.02)%,高于单纯药物应用组(9.1±1.34)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ROS介导P62蛋白激活参与MTX耐药绒癌发生机制,为耐药绒癌临床靶向治疗提供新思路。
- 沈芸肖长纪于珊宫美轩赵静向阳
- 关键词：绒癌耐药氧化应激反应P62
- 复发性滋养细胞肿瘤预后因素分析被引量：3
- 2017年
- 目的对影响滋养细胞肿瘤复发患者预后的因素进行分析,为临床复发患者的治疗及预后评估提供参考。方法回顾性分析1995年1月至2013年12月在北京协和医院接受治疗、至少复发1次且在本院随诊的滋养细胞肿瘤患者。采用SPSS 13.0软件,对复发患者的预后影响因素,包括年龄、末次妊娠性质、转移部位、FIGO分期、评分、首次术前β-HCG水平、首次术前化疗种类、化疗疗程、术后病理等进行分析。结果共纳入86例患者,复发患者的总完全缓解率为84.9%(73/86);单因素分析结果表明,初次于外院复发(P=0.038)及首次复发时间≤3个月(P=0.045)是影响复发患者的不良预后因素;多因素Cox回归模型的预后分析结果表明,首次复发发生于外院(P=0.025)、年龄≥31岁(P=0.048)是复发患者的不良预后因素。结论大多数复发患者能够通过化疗、手术与放疗的联合治疗治愈,对于有不良预后因素的患者仍期待有新的治疗方案。
- 赵静任彤杨隽钧冯凤芝万希润向阳
- 关键词：滋养细胞肿瘤复发预后
- 内质网应激介导的凋亡耐受在甲氨蝶呤耐药绒癌发生机制中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的:初步探讨内质网应激介导的凋亡耐受在甲氨蝶呤耐药绒癌发生机制中的作用。方法:以人绒毛膜上皮癌JEG-3细胞及本课题组前期构建的甲氨蝶呤耐药绒癌细胞(JEG-3/MTXR)为研究对象。采用WST法评估甲氨蝶呤处理后JEG-3/MTXR和JEG-3亲本细胞的细胞活力,Western blot法测定两种细胞中caspase-9激活、GRP78和GADD153蛋白的表达。RNA干扰法沉默JEG/MTXR细胞中GADD153基因,Western blot法测定caspase-9蛋白激活的情况。结果:不同浓度梯度的甲氨蝶呤诱导后,JEG-3亲本细胞系的细胞生存率显著降低。相同浓度甲氨蝶呤作用后,JEG-3/MTXR细胞内切割caspase-9无增加,JEG-3亲本细胞内caspase-9激活并切割。JEG-3/MTXR和JEG-3细胞中GRP78表达水平呈时间依赖性上调;JEG-3/MTXR细胞中GADD153蛋白水平无显著上调,而JEG-3亲本细胞内出现显著上调。沉默GADD153基因可抑制MTX引起的切割caspase-9蛋白水平上调。结论:内质网应激介导的凋亡耐受可能参与甲氨蝶呤耐药绒癌发生机制。
- 沈芸向阳赵静肖长纪
- 关键词：耐药绒癌内质网应激甲氨蝶呤
- 绒癌耐药机制的研究现状被引量：2
- 2014年
- 绒毛膜癌(choriocarcinoma,简称绒癌)是能通过化疗治愈的首个妇科实体肿瘤,化疗是其主要的治疗方式。但是,仍有20%的患者化疗后发生耐药达不到治愈的效果。化疗耐药是一个极为复杂的过程,包括原发性耐药和获得性耐药。由于肿瘤细胞的遗传性和生化特性的变化较为复杂,化疗造成的最初损伤到癌细胞耐药之间存在复杂的调控系统,是多基因、多信号通路和多系统共同参与的过程。不同的个体产生耐药的机制不同,绒癌患者耐药后再进行个体化治疗是最佳的治疗模式。
- 赵静向阳
- 关键词：子宫肿瘤绒毛膜癌化疗原发性耐药获得性耐药
- 细胞自噬在甲氨蝶呤耐药绒癌中的保护性作用被引量：2
- 2013年
- 目的:通过检测耐药绒癌细胞内自噬的变化,以及评估抑制自噬或敲除自噬相关基因后细胞凋亡情况,探讨细胞自噬在耐药绒癌中的作用。方法:以人绒毛膜上皮癌JEG-3细胞及本课题组前期构建的甲氨蝶呤(MTX)耐药绒癌JEG-3/MTXR细胞为研究对象。采用透射电镜、免疫荧光法观察MTX处理后细胞内自噬的变化;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的表达变化。RNA干扰法沉默自噬相关基因LC3后,采用Western blot法和Annexin-Ⅴ/PI双染法流式细胞仪检测MTX作用后JEG-3/MTXR耐药绒癌细胞凋亡的变化。结果:透射电镜和荧光显微镜下均可观察到MTX处理后JEG-3、JEG-3/MTXR细胞内自噬小体的产生;IC30浓度MTX处理后,两种细胞内自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达水平上调。相同浓度MTX处理后,JEG-3细胞内LC3、Beclin-1表达下调。沉默自噬相关基因LC3后,沉默LC3联合MTX组的JEG-3/MTXR和JEG-3细胞内凋亡相关蛋白caspase-9表达上调,凋亡率显著增多。结论:MTX可诱导耐药绒癌产生保护性自噬。
- 沈芸赵静肖长纪向阳
- 关键词：绒癌耐药自噬甲氨蝶呤
- 转录因子c-Jun对甲氨蝶呤耐药绒毛膜癌细胞内自噬标志蛋白LC3的调节作用被引量：1
- 2014年
- 目的：初步探讨转录因子c-Jun对甲氨蝶呤耐药绒毛膜癌细胞内自噬标志蛋白--微管相关蛋白1轻链3（LC3）的调节作用。方法以人绒毛膜癌细胞株JEG-3及前期构建的甲氨蝶呤耐药绒毛膜癌细胞株JEG-3/MTXR为研究对象，采用蛋白印迹法检测甲氨蝶呤药物处理后细胞内磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）和磷酸化c-Jun（p-c-Jun）的表达变化，以及JNK抑制剂SP600125对p-c-Jun蛋白表达的影响。RNA干扰技术沉默c-Jun基因检测甲氨蝶呤处理后JEG-3/MTXR细胞内LC3 mRNA和蛋白的表达。染色质免疫共沉淀（ChIP）法结合实时荧光定量PCR技术测定甲氨蝶呤药物作用后JEG-3/MTXR细胞内c-Jun蛋白结合于LC3启动子上的相对富集量。结果（1）甲氨蝶呤作用后JEG-3/MTXR细胞内p-JNK和p-c-Jun蛋白的相对表达量呈时间依赖性上调，作用72 h时相对表达量分别为1.16±0.18、1.99±0.20，较0 h升高（分别为0.41±0.05、0.20±0.06），分别比较，差异均有统计学意义（P〈0.05）；SP600125抑制了甲氨蝶呤作用后JEG/MTXR细胞内p-c-Jun蛋白表达的上调，甲氨蝶呤作用后JEG/MTXR细胞内p-c-Jun蛋白的相对表达量为1.11±0.20，高于SP600125联合甲氨蝶呤者（0.30±0.04），两者比较，差异有统计学意义（P〈0.05）。（2）针对c-Jun基因的小分子干扰RNA （siRNA）--c-Jun-siRNA抑制了甲氨蝶呤诱导的JEG/MTXR细胞内LC3 mRNA和蛋白表达的上调，甲氨蝶呤联合c-Jun-siRNA作用后JEG-3/MTXR细胞内LC3 mRNA和蛋白的相对表达量分别为1.24±0.17、0.52±0.07，低于甲氨蝶呤联合无义siRNA者（分别为3.03±0.43、1.20±0.15），分别比较，差异有统计学意义（P〈0.05）。（3）甲氨蝶呤作用后JEG/MTXR细胞内c-Jun结合于LC3启动子的相对富集量是无甲氨蝶呤作用者的（2.95±0.35）倍。结论转录因子c-Jun对LC3的调节作用可能参与绒毛膜癌发生甲氨蝶呤耐药的机制。
- 沈芸向阳肖长纪赵静
- 关键词：绒毛膜癌甲氨蝶呤微管相关蛋白质类自噬
