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一种适用于产朊假丝酵母的基因敲除系统及其在gsh1基因敲除中的应用被引量：1: 2011年; 报道一种适用于产朊假丝酵母Candida utilis的基因敲除系统,利用该敲除系统获得gsh1基因敲除杂合突变株。根据不同种属酵母菌γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)蛋白质的保守序列,克隆C.utilis SZU 07-01的gsh1基因;以商品化质粒pPICZalpha A为基础,构建gsh1基因的敲除载体pPICZalpha A-kan 3,其中,kan基因的启动子TEF被替换为来自于C.utilis SZU 07-01的GAP启动子(pGAP:kan)。质粒电转化C.utilis,获得gsh1基因敲除杂合突变株C.utilis GSH-6。结合发酵培养得到的数据进行分析,突变株的γ-GCS酶活比出发菌株降低17.5%,GSH合成量降低61%,细胞干重降低18.5%。所构建敲除组件pGAP:kan的成功应用为从分子水平研究C.utilis中谷胱甘肽(GSH)的生理功能提供了一种新借鉴。; 张君丽卫功元董红军朱泰承李寅; 关键词：基因敲除产朊假丝酵母谷胱甘肽

基于能量代谢分析的S-腺苷蛋氨酸和谷胱甘肽联合高产方法被引量：5: 2012年; 采用能量代谢分析方法,以S-腺苷蛋氨酸和谷胱甘肽联产发酵过程中能量代谢的关键物质ATP的水平变化为指导,结合L-半胱氨酸的适时添加策略,实现了S-腺苷蛋氨酸和谷胱甘肽联产发酵的进一步高产。在ATP水平指导的L-半胱氨酸添加策略下,实现了胞内ATP的有效利用,且分批培养和流加培养时S-腺苷蛋氨酸和谷胱甘肽的联产量达到584.7mg.L-1和1004.4mg.L-1,分别比对照提高了27.1%和26.4%。该研究结果为类似耗能合成有用化学品的联产发酵及其高产提供了可行的发酵过程优化策略。; 王玉磊卫功元邵娜聂敏; 关键词：S-腺苷蛋氨酸谷胱甘肽 ATP 产朊假丝酵母

柠檬酸钠促进S-腺苷蛋氨酸和谷胱甘肽联合高产被引量：3: 2013年; 考察了柠檬酸钠对S-腺苷蛋氨酸(SAM)和谷胱甘肽(GSH)联产发酵的影响,发现柠檬酸钠有利于SAM和GSH的联合高产。采用响应面分析法对柠檬酸钠浓度及其添加时间进行优化,模型预测和验证实验结果均表明在联产发酵6 h时一次性添加10 g/L柠檬酸钠的效果最佳。通过对SAM和GSH联产发酵过程进行分析,发现柠檬酸钠能够显著提高胞内NADH和ATP的水平,为SAM和GSH的过量合成提供了足够的能量物质,也为类似耗能化合物的生物合成及其发酵高产提供了可行的优化策略。; 王玉磊朱健卫功元许宏庆汪成富; 关键词：S-腺苷蛋氨酸谷胱甘肽 ATP 柠檬酸钠

基于代谢通量分析的SAM和GSH联产溶氧控制策略被引量：2: 2013年; 为了提高S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和谷胱甘肽(GSH)的联产量,考察了溶氧条件对Candida utilis CCTCC M209298发酵联产SAM和GSH的影响。采用代谢通量分析方法对不同转速下SAM和GSH联产发酵过程中的物质和能量代谢进行分析,确定了较优的溶氧控制策略:前9 h的发酵恒定转速350 r min 1,9 h后控制溶氧不低于30%。在此策略下,C.utilis CCTCC M 209298分批发酵生产SAM和GSH的联产量为520.7 mg L 1。最后分别从发酵动力学、代谢通量分析以及呼吸商变化规律对该溶氧控制策略促进SAM和GSH联合高产的原因进行了定量解释。; 王大慧王玉磊卫功元邵娜周捷; 关键词：S-腺苷甲硫氨酸谷胱甘肽代谢通量分析

酸胁迫在提升富硒/GSH产朊假丝酵母性能中的作用被引量：4: 2013年; 为了提高富硒产朊假丝酵母胞内有机硒和谷胱甘肽(GSH)的含量,考察了不同pH环境对富硒过程中的酵母细胞生长、GSH合成以及有机硒转化的影响。结果发现弱酸胁迫有利于富硒/GSH产朊假丝酵母性能的提升,其中pH 3.5时最大胞内有机硒和GSH含量分别为1.13 mg/g和12.3 mg/g。通过对酵母胞外蛋氨酸浓度、胞内pH值以及NADH/NAD+、ATP/ADP比率进行分析,部分解释了弱酸胁迫提升富硒/GSH产朊假丝酵母性能的原因。为进一步提高产朊假丝酵母的营养功能提供了可行的思路。; 王大慧许宏庆汪成富卫功元; 关键词：富硒酵母酸胁迫有机硒辅因子

谷胱甘肽生物合成过程中酸胁迫的作用及其机制被引量：8: 2011年; 以产朊假丝酵母Candida utilis SZU 07-01产谷胱甘肽(GSH)为研究对象,分析比较了恒定pH和不控制pH条件下GSH的分批发酵过程,确定pH3.5和pH1.5分别为弱酸胁迫和强酸胁迫条件。通过对C.utilisSZU 07-01恒化培养过程进行分析,选择合适的酸胁迫时间分别为弱酸胁迫6h和强酸胁迫2h。采用分批补料培养方式,比较了不同酸胁迫条件下的GSH生物合成情况,发现长时间弱酸胁迫比短时间强酸胁迫和不胁迫更有利于GSH的过量合成。最后,分别从分批发酵动力学、胞内辅因子(NADH、ATP)以及各关键代谢物的代谢通量变化规律等角度对弱酸胁迫促进GSH过量合成的机理进行了定量分析。; 董颖颖卫功元张君丽陈学东; 关键词：谷胱甘肽酸胁迫产朊假丝酵母

基于香蕉皮水解液的谷胱甘肽生物合成被引量：2: 2012年; 以香蕉皮为原料,研究了可发酵性糖的制备及其用于谷胱甘肽的生物合成,结果发现产朊假丝酵母利用香蕉皮酸解液发酵生产谷胱甘肽是可行的。通过单因素实验和均匀设计法对影响稀硫酸水解香蕉皮粉末的关键因素进行了优化,分别以还原糖得率和谷胱甘肽得率为目标建立了二次多项式数学模型。模型的验证结果表明,最大还原糖得率和谷胱甘肽得率需要不同的酸解条件。在各自最佳的酸解条件下,最大还原糖得率和最大谷胱甘肽得率分别为287.6mg/g和5.40mg/g,该结果为合理利用木质纤维素类生物质原料合成有用化学品的研究提供了借鉴。; 陈学东王大慧董颖颖卫功元; 关键词：香蕉皮稀酸水解可发酵性糖谷胱甘肽均匀设计

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国家自然科学基金(20906065)