吉林省自然科学基金(201115230)
- 作品数：21 被引量：46H指数：4
- 相关作者：张守发贾立军薛书江钱年超黄国明更多>>
- 相关机构：延边大学吉林省畜牧兽医科学研究院更多>>
- 发文基金：吉林省自然科学基金国家自然科学基金吉林省青年科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪附红细胞体OxaA基因的表达及间接ELISA方法的建立
- 附红细胞体病(Eperythrozoonsis)是由附红细胞体寄生于人和多种动物的红细胞表面、血浆及骨髓内引起的一种以贫血、黄疸、发热等为主要临床特征的人兽共患传染病。对于猪附红细胞体病暂时没有较好的手段控制,而且已知的...
- 刘明明贾立军张守发
- 关键词：猪附红细胞体ELISA原核表达
- 文献传递
- 牛瑟氏泰勒虫与牛卵形巴贝斯虫多重PCR检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 根据GenBank上登录的牛瑟氏泰勒虫内转录间隔子基因(ITS基因)和牛卵形巴贝斯虫CCTη基因序列,设计合成了2对特异性引物。通过对反应条件进行优化,建立了同时检测牛瑟氏泰勒虫和牛卵形巴贝斯虫的多重PCR方法。结果显示,用该多重PCR方法可同时扩增出2条与试验设计相符的1 020bp(牛瑟氏泰勒虫)和537bp(牛卵形巴贝斯虫)的特异性条带,对牛瑟氏泰勒虫和牛卵形巴贝斯虫的最低检出限分别为10pg/μL和1pg/μL。用该方法对采自吉林省珲春市的23份临床样本进行检测,结果牛瑟氏泰勒虫的阳性率为69%,牛卵形巴贝斯虫的阳性率为52%,混合感染率为52%。表明,建立的多重PCR方法可用于临床诊断。
- 王轶男钱年超黄国明胡诗悦薛书江贾立军张守发
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫多重PCR
- 牛源犬新孢子虫NcSAG1基因重组腺病毒株的构建及动物免疫试验被引量：1
- 2012年
- 【目的】构建表达牛源犬新孢子虫NcSAG1基因的重组腺病毒株,并接种Balb/c小鼠,评价重组腺病毒株对Balb/c小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平。【方法】PCR扩增牛源犬新孢子虫NcSAG1基因,构建pMD18-T-NcSAG1克隆质粒和pCR259-NcSAG1重组腺病毒穿梭质粒;将鉴定正确的pCR259-NcSAG1重组腺病毒穿梭质粒依次转化HighQ-1 Transpose-Ad 294和HighQ-1感受态细胞,构建Transpose-Ad-NcSAG1重组腺病毒表达质粒;PacI酶切线性化后,脂质体介导转染QBI-HEK 293细胞包装重组腺病毒Ad5-NcSAG1,应用PCR和Westernblotting技术检测Ad5-NcSAG1及其表达蛋白产物。测定Ad5-NcSAG1重组腺病毒滴度后,接种Balb/c小鼠,测定小鼠血清中IgG特异性抗体和细胞因子IFN-γ、IL-4水平,以此评价重组腺病毒株的免疫应答效果。【结果】扩增的牛源犬新孢子虫NcSAG1基因大小为982bp,与GenBank中发表的NcSAG1(AF132217)核苷酸序列的同源性为99.2%;经PCR和Western blotting检测,重组腺病毒Ad5-NcSAG1在QBI-HEK 293细胞中包装成功,表达蛋白的分子量为33kD,具有较好的反应原性;测得重组腺病毒Ad5-NcSAG1滴度为1010TCID50/mL,Ad5-NcSAG1接种Balb/c小鼠后,能够诱导产生高水平的IgG特异性抗体和IFN-γ、IL-4细胞因子。说明Ad5-NcSAG1重组腺病毒对Balb/c小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答。【结论】成功构建了牛源犬新孢子虫NcSAG1基因的重组腺病毒株,该毒株能够诱导Balb/c小鼠产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,为犬新孢子虫新型疫苗的临床试验奠定了基础。
- 贾立军张守发
- 关键词：犬新孢子虫重组腺病毒动物免疫
- 牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及原核表达
- 为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的生物学特性。本试验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫MAG1基因,将PCR产物连接到pMD18-T Simple载体,构建pMD18-T-MAG1克隆质粒,PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析后...
- 焦石贾立军薛书江刘明明黄国明张守发
- 文献传递
- 牛卵形巴贝斯虫巢式PCR诊断方法的建立及初步应用
- 根据GenBank上发表的牛卵形巴贝斯虫CCTη基因序列设计合成2对巢式PCR引物,建立牛卵形巴贝斯虫巢式PCR诊断方法,对该方法的最佳反应条件进行了筛选,并进行了特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的巢式P...
- 黄国明贾立军薛书江张守发
- 文献传递
- 牛卵形巴贝斯虫PCR检测方法的建立及初步应用被引量：4
- 2012年
- 为建立牛卵形巴贝斯虫(B.ovata)快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的B.ovata CCTη基因序列设计引物,建立了PCR检测方法。对该方法的最佳反应条件进行优化,并进行特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的PCR方法扩增B.ovata CCTη基因片段大小为1 008 bp,与参考株序列同源性为100%。该方法对牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、牛瑟氏泰勒虫基因组DNA扩增结果均为阴性。最低可以检测样品中34个拷贝的DNA。通过对49份临床样本的检测,该方法比姬姆萨染色镜检阳性率高8.2%。本实验为B.ovata的诊断提供了一种特异、敏感的检测技术。
- 黄国明贾立军薛书江李闯焦石张守发
- 关键词：PCR
- 牛卵形巴贝斯虫伴侣素CCT_η基因的克隆与生物信息学分析被引量：4
- 2012年
- 对牛卵形巴贝斯虫延边株的伴侣素CCTη基因进行分子克隆,并利用生物信息学软件对CCTη基因进行了同源性、系统进化树、编码蛋白等电点、信号肽、跨膜区、糖基化位点及疏水性分析。结果显示,克隆的CCTη基因由1 008个核苷酸组成,其中编码335个氨基酸。与GenBank上发表的牛卵形巴贝斯虫CCTη基因序列(AB367928.1)同源性100%。CCTη基因编码蛋白等电点为7.32,不存在信号肽结构、跨膜区及糖基化位点。疏水性最大值3.38,最小值-3.79。本研究从CCTη基因方面近一步证实了该分离株的分子分类。
- 黄国明薛书江贾立军李闯张守发
- 表达牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒的构建及免疫原性分析
- PCR扩增牛源犬新孢子虫NcSRS2基因,构建克隆质粒pMD18-T-NcSRS2、重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcSRS2及表达质粒Transpose-Ad-NcSRS2,脂质体介导转染QBI-HEK293细胞,包...
- 贾立军于龙政张守发
- 文献传递
- 吉林省延边地区羊泰勒虫病的分子流行病学调查被引量：4
- 2013年
- 为了解羊泰勒虫病在吉林省延边地区的流行情况,本研究采用PCR方法和血液涂片染色镜检法对吉林省延边地区延吉市、龙井市、和龙市、珲春市4个地区采集的93份羊血液样品进行检测,并对不同地区、饲养方式、地理条件以及不同年龄间羊泰勒虫病的感染情况进行比较分析。结果显示,PCR方法检测样品的阳性率为31.18%,显著高于血涂片染色镜检法19.35%的阳性率。经统计学分析,不同地区和不同品种,羊泰勒虫感染率差异不显著(p>0.05);而不同年龄阶段和不同饲养方式,羊泰勒虫的感染率差异显著(p<0.05)。调查结果表明,吉林省延边地区是羊泰勒虫病的流行地区。
- 王轶男胡诗悦钱年超薛书江贾立军张守发
- 关键词：羊泰勒虫病PCR分子流行病学调查
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及真核共表达
- 本试验根据发表的犬新孢子虫MAG1基因序列(EF580924.1)和Bov IFN-γ基因序列(M29867.1),设计两对引物。分别以犬新孢子虫基因组DNA和pet28a-IFN-γ重组质粒为模板,通过重叠延伸拼接聚合...
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 文献传递
