江苏省“135”重点人才基金(RC2003019)
- 作品数：12 被引量：30H指数：4
- 相关作者：杨向军蒋文平李红霞宋建平刘志华更多>>
- 相关机构：苏州大学无锡市人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 幼鼠和成年大鼠心室肌细胞起搏电流的改变
- 2008年
- 目的:运用膜片钳全细胞技术和实时定量聚合酶链式反应(PCR),探讨幼鼠和成年大鼠心室肌细胞起搏电流(If)及超极化激活的环核苷酸门控通道(HCN)亚型的改变。方法:分离3d的幼鼠和成年大鼠的心室肌细胞;测定HCN1、HCN2、HCN3和HCN4 mRNA的表达;记录If并研究其特性。结果:在新生大鼠心室肌细胞记录到If并得到电流密度-电压曲线,其激活电压约为-75mV;实时定量PCR检测HCN1、HCN2、HCN3和HCN4 mRNA在总HCN mRNA的表达中所占比例分别为0.23%±0.01%、83.58%±0.04%、0.79%±0.01%和15.44%±0.01%。在成年大鼠心室肌细胞也记录到超极化激活、并可以被4mmol/LCsCl阻断的If,其激活电压约为-115mV;HCN1、HCN2、HCN3和HCN4 mRNA在总HCN mRNA中所占比例分别为0.72%±0.02%、91.58%±0.08%、0.27%±0.02%和7.12%±0.02%。HCN2∶HCN4为(13.06±0.21)∶1。结论:随着年龄的增长,大鼠心室肌细胞HCN2所占比例增加;If值减小,激活电压变负。
- 李红霞杨向军赵欣王如兴董宁征韩莲花周亚峰蒋彬蒋文平
- 关键词：年龄心室肌细胞起搏电流HCN
- 心脏电子起搏器时代与生物起搏替代的前沿话题(英文)被引量：1
- 2008年
- 学术背景:植入电子起搏器是目前治疗症状性缓慢心律失常的主要方法,然而它存在许多缺点。能否利用分子生物学原理发展生物起搏器成为大家关注的热点。通过转染编码If电流的超极化激活环核苷酸门控通道基因,过度表达超极化激活环核苷酸门控通道,增加心脏舒张期内向电流,从而在窦房结被抑制时提供起搏作用,这种利用基因治疗和细胞治疗构建的生物起搏在不久的将来可能会成为电子起搏器最为理想的替代方法。目的:总结超极化激活环核苷酸门控通道基因构建生物起搏的研究进展。检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1979-01/2007-06的相关文献,检索词"hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel;biological pacemaker",并限定文章语言种类为English。共检索到157篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①与生物起搏及超极化激活环核苷酸门控通道基因密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:重复性研究。文献评价:文献的来源主要是超极化激活环核苷酸门控通道基因的基础实验。所选用的36篇文献中,10篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。资料综合:①在4种异构体中超极化激活环核苷酸门控通道1,2,4是心脏中的主要部分,超极化激活环核苷酸门控通道3只在胚胎起搏细胞中有低水平表达。起搏活性小的区域(如心室肌),超极化激活环核苷酸门控通道2的表达占优势;而起搏活性高的区域超极化激活环核苷酸门控通道4的表达占优势。此外,超极化激活环核苷酸门控通道2在整个发育阶段,是心室的主要异构体,超极化激活环核苷酸门控通道2:超极化激活环核苷酸门控通道4的相当表达量在乳鼠为5:1,成年鼠为13:1。②超极化激活环核苷酸门控通道通道缺陷可导致病窦综合征。③到目前为止,转染编码If电流�
- 周亚峰杨向军
- 关键词：生物起搏
- 罗格列酮对伴有糖尿病冠状动脉粥样硬化性心脏病患者纤溶系统的影响:预防支架术后再狭窄的可行性
- 2007年
- 目的:观察罗格列酮对伴有糖尿病的冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者纤溶系统的影响,由此对罗格列酮防止支架术后再狭窄机制作初步探讨。方法:选择2006-02/12于苏州大学附属第一医院就诊的伴有2型糖尿病的冠心病患者78例,均知情同意。①实验分组及方法:按随机数字表法分为两组(n=39),常规治疗组对其基础疾病进行治疗,包括常规针对冠心病和糖尿病治疗;罗格列酮组在此基础上加用罗格列酮口服,4mg/d。②实验评估:两组观察对象均在入院时及治疗3个月后分别抽取外周血,分离血浆,检测一氧化氮、组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂1含量。测定一氧化氮采用硝酸还原酶法,测定组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制物1采用酶联免疫法。结果:78例患者全部进入结果分析,无脱落。①罗格列酮组患者外周血浆一氧化氮含量升高的幅度显著高于常规治疗组(P<0.01)。②罗格列酮组患者外周血浆组织型纤溶酶原激活物含量升高的幅度显著高于常规治疗组(P<0.01)。③罗格列酮组患者外周血纤溶酶原激活物抑制物1含量降低的幅度显著高于常规治疗组(P<0.01)。结论:对于伴有糖尿病的冠心病患者,在常规治疗基础上加用罗格列酮能促进纤溶系统的激活,防止血栓的形成,有效防止支架术后再狭窄。
- 周亚峰杨向军李红霞鲁燕蒋文平
- 关键词：降血糖药纤溶酶原激活物抑制物1医用植入体
- 缓激肽对内皮细胞分泌t-PA的影响
- 2007年
- 目的探讨缓激肽(BK)对纤溶系统的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞株(ECV304),分BK刺激组,培养基中加BK至终浓度为0.01、0.1、1、10μmol/L;L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)干预组,加BK(1μmol/L)后再加L-NAME至终浓度为0.1、0.2、0.5、1.0mmol/L;BK2受体拮抗剂(HOE140)干预组,加BK(1μmol/L)后再加HOE140至终浓度为1、10、100、1000nmol/L;分别测定上清中组织纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、一氧化氮(NO)的含量和一氧化氮合酶(NOS)的活性。结果BK(0.1、1、10μmol/L)刺激组t-PA(ng/ml)分别为62.154±1.287、71.275±1.008、79.415±1.089,NO(μmol/L)含量分别为42.412±0.301、49.353±0.311、55.470±0.949,与对照组相比差异显著(P<0.05),而PAI-1(ng/ml)和NOS(U/ml)的活性无明显差异(P>0.05)。L-NAME干预组t-PA分别为52.401±1.121、51.903±1.202、50.126±1.401和49.362±1.209,NO含量分别为39.121±0.346、38.041±0.423、37.423±0.512和38.125±0.412,NOS活性分别为1.498±0.113、1.597±0.105、1.485±0.121和1.496±0.091,三者与空白对照组相比差异显著(P<0.05),而PAI-1含量无明显差异(P>0.05)。1000nmol/LHOE140干预后t-PA、NO含量与BK(1μmol/L)对照组相比差异显著(P<0.05),而两组PAI-1含量和NOS的活性无明显差异(P>0.05)。结论BK通过与BK2受体结合促进内皮细胞分泌t-PA,其作用是通过NO增多实现的。
- 李红霞杨向军蒋彬程绪杰陈弹宋建平刘志华蒋文平
- 关键词：缓激肽组织纤溶酶原激活物一氧化氮
- 大鼠骨髓基质干细胞起搏电流基因的表达及转染人HCN2的表达及鉴定被引量：10
- 2006年
- 目的研究骨髓基质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)起搏电流基因的表达及转染人超极化激活的环化核苷酸门控通道(hyperpolarization-activated cyclic-nucleotide gated,HCN)亚型2后起搏电流的特点。方法通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chainreaction,real-time PCR)的方法,检测 MSCs 本身起搏电流基因的表达。用脂质体转染的方法,将重组有编码起搏电流基因的质粒 pcDNA3-hHCN2导入 MSCs 中,用全细胞膜片钳技术记录起搏电流(Ⅰ_(hHCN2));用 real-time PCR 和 Western blot 印迹检测目的基因 hHCN2的 mRNA 和蛋白表达。结果MSCs 起搏电流基因 mHCN1、mHCN2、mHCN3、mHCN4在总 HCN 的表达中所占比例分别为(0.08±0.01)%、(77.16±0.03)%、(0.24±0.01)%、(22.53±0.02)%。全细胞膜片钳技术记录到Ⅰ_(hHCN2)得到电流密度一电压曲线,其激活电压约为-80 mV,此电流可以被4 mmol/L的 Cs^+阻断。real-timePCR 检测有 hHCN2 mRNA 的高表达,Western blot 印迹检测有其蛋白的表达。结论 (1)MSCs 起搏电流基因表达以 mHCN2和 mHCN4为主;(2)通过脂质体转染法使 MSCs 成功表达Ⅰ_(hNCN2)起搏电流,为抗心律失常基因治疗的研究奠定了基础。
- 李红霞杨向军赵欣蒋彬程绪杰陈弹韩莲花宋建平刘志华蒋文平
- 关键词：干细胞基因转移技术基因疗法
- 胺碘酮对乳鼠心室肌细胞起搏电流及其基因表达的影响被引量：6
- 2007年
- 目的运用膜片钳全细胞技术和实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitativepolymerase chain reaction,real-time PCR),研究胺碘酮对乳鼠心室肌细胞起搏电流(funny current,I_f)及其基因表达的影响。方法分离培养乳鼠心室肌细胞,记录 I_f 并测定超极化激活的环核苷酸门控通道(hyperpolarization-activated cation channel,HCN)亚型1、HCN2、HCN3和 HCN4;分别用0.01、0.1、1、10、100 μmol/L 的胺碘酮刺激细胞3 h 和 10μmol/L胺碘酮分别刺激细胞0、0.5、1、3、6 h,观察胺碘酮对 I_f 和 HCN 的影响。结果 (1)心室肌细胞中,HCN1～4在总 HCN 的表达中所占比例分别为(0.23±0.01)%、(83.58±0.04)%、(0.79±0.01)%和(15.44±0.01)%。(2)不同浓度胺碘酮使I_f 电流密度分别降低(3.1±0.9)%、(9.7±2.4)%、(36.7±5.8)%、(80.3±1.8)%和(85.9±3.1)%;HCN2表达减少(2.1±0.8)%、(8.9±3.6)%、(30.1±4.2)%、(78.3±3.6)%和(81.1±1.9)%;HCN4减少(0.5±0.2)%、(2.1±2.6)%、(8.8±3.2)%、(60.1±4.6)%和(59.6±6.5)%。(3)刺激不同时间后,I_f 分别降低(1.1±0.1)%、(12.6±2.3)%、(80.6±2.2)%和(80.1±2.1)%;HCN2减少(1.0±0.1)%、(9.8±3.9)%、(82.9±4.6)%和(83.9±1.7)%;HCN4减少(0.1±0.1)%、(1.9±1.1)%、(59.4±7.8)%和(60.9±3.1)%;对 HCN1和 HCN3的影响差异无统计学意义。结论胺碘酮呈浓度和时间依赖性降低乳鼠心室肌细胞 HCN2和 HCN4的表达并抑制 I_f,这有利于其抗室性心律失常的治疗。
- 李红霞杨向军韩莲花周亚峰赵欣蒋彬董宁征宋建平刘志华蒋文平
- 关键词：胺碘酮心室电生理学
- 氨氯地平对大鼠心室肌细胞动作电位及细胞内钙离子浓度的影响
- 2008年
- 目的探讨不同旋体氨氯地平(Aml)对Spraque-Dawley大鼠心室肌细胞动作电位(AP)及细胞内钙离子浓度的影响。方法采用酶消化法获得大鼠耐钙心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术分别记录加入0.1、0.5、1、5和10μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后大鼠心室肌细胞AP的变化。并用荧光探针Fura-2/AM测定细胞内钙离子浓度,比较1、5、10、50和100μmol/L左旋、右旋和混旋Aml对细胞内钙离子浓度的影响。结果①加入0.1、0.5、1、5和10μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后,AP最大上升速率、AP幅度和超射无明显变化(P>0.05)。②加入0.1、0.5、1、5和10μmol/L左旋后,50%的AP时程(APD50)分别为(36.2±8.2)、(33.9±7.7)、(30.2±6.8)、(22.6±5.1)和(15.1±3.4)ms(P<0.05);加入混旋Aml后,APD50分别为(39.2±9.2)、(36.7±7.9)、(33.8±7.2)、(25.4±5.9)和(21.7±5.2)ms(P<0.05);加入右旋Aml后,APD50分别为(45.1±11.3)、(46.2±10.8)、(44.9±7.3)、(44.8±8.2)和(45.7±9.4)ms(P>0.05)。③左旋Aml和混旋Aml可降低细胞内钙离子浓度,不同浓度右旋Aml对细胞内钙离子浓度无影响。结论左旋Aml和混旋Aml对L-型钙通道有阻滞作用,从而缩短APD,而右旋Aml对L-型钙离子通道无阻滞作用,因而对APD无影响。
- 来利红王如兴刘志华杨向军宋建平蒋彬李红霞蒋文平
- 关键词：动作电位氨氯地平动作电位时程细胞内钙离子浓度
- 二十二碳六稀酸对大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK_(Ca)单通道的作用
- 2009年
- 目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠冠状动脉平滑肌细胞(CASMCs)大电导钙激活性钾通道(BKCa)的影响。方法采用酶消化法获得大鼠CASMCs,用膜片钳技术以单通道内膜向外模式记录在跨膜电位60 mV下,加入0、10、20、30、40、50、60、70和80μmol/L DHA后,大鼠CASMCs的BKCa单通道开放概率(Po)、电流幅度值(Am)、平均开放时间(To)、平均关闭时间(Tc)的变化。结果在跨膜电位60 mV时,当DHA浓度>10μmol/L时,BKCa通道的Po增大,且呈浓度依赖性,Po从(0.072±0.003)(0μmol/L DHA,n=6)增至(0.606±0.089)(80μmol/L DHA,n=10)(P<0.05),EC50是(36.11±0.08)μmol/L;当DHA浓度<10μmol/L时,Po增加不明显;加入不同浓度的DHA时,对通道Am及To的作用不明显,通道Tc明显缩短,Tc由(492.91±42.12)ms(0μmol/L DHA,n=6)缩短至(72.39±6.97)ms(80μmol/L DHA,n=10)(P<0.05)。结论DHA能直接激活BKCa通道而产生舒张血管、增加血流量的效应。
- 来利红李红霞蒋彬蒋文平杨向军刘志华宋建平韩莲花
- 关键词：二十二碳六烯酸冠状动脉平滑肌细胞
- 乳鼠心室肌起搏电流的特点及其基因的表达被引量：4
- 2006年
- 目的研究乳鼠心室肌细胞起搏电流（If）的特点，并运用实时定量聚合酶链式反应（PCR）分析乳鼠心室肌If基因的表达。方法通过酶消化法分离乳鼠心室肌细胞，用光镜、透射电镜、免疫组化鉴定心肌细胞；用全细胞膜片钳技术记录If并研究其特性；采用SYBR—Green I染料进行实时定量PCR，测定乳鼠心室肌If基因即超极化激活的环核苷酸门控通道（mHCN）亚型2和mHCN4的表达。结果光电显微镜下见搏动频率50～100次／分的细胞团；透射电镜看到丰富的线粒体、肌丝明显；用抗肌动蛋白d—aetin的单克隆抗体鉴定心肌细胞，95％以上呈现阳性。全细胞膜片钳记录到心室肌细胞的If，并得到电流密度-电压曲线，其激活电压约为-75mV；实时定量PCR检测mHCN2：mHCN4为（5．15±0．19）：1。结论乳鼠心室肌细胞有超极化激活、可被Cs^阻断的If，其基因表达以mHCN2为主。
- 李红霞杨向军赵欣韩莲花程绪杰陈弹宋建平刘志华蒋文平
- 关键词：心血管病学乳鼠心室肌细胞起搏电流基因
- 内皮素及其受体拮抗剂对新生大鼠心室肌细胞起搏电流及其基因表达的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:运用膜片钳全细胞技术和实时定量聚合酶链式反应(PCR),研究内皮素-1(ET-1)及其受体拮抗剂对新生大鼠心室肌起搏电流(If)及其基因表达的影响。方法:分离1-3d新生大鼠的心室肌细胞;测定超极化激活的环核苷酸门控通道(HCN)亚型1、HCN2、HCN3和HCN4的表达情况;记录If并研究其特性。其次分别用不同浓度(0、1、10、100nmol/L)ET-1刺激细胞3h,用100nmol/LET-1刺激细胞不同时间(0、0.5、1、3、6h),用100nmol/LET-1加1000nmol/LETA拮抗剂(BE-18257B)或ETB拮抗剂(IRL-1038)刺激心肌细胞3h,观察ET-1对If和HCN的影响。结果:HCN1、HCN2、HCN3和HCN4在总HCN的表达中所占比例分别为(0.23±0.01)%、(83.58±0.04)%、(0.79±0.01)%、(15.44±0.01)%。全细胞膜片钳记录到超极化激活、4mmol/LCsCl可阻断If;10、100nmol/LET-1刺激3h后,HCN2分别增加0.1、2倍,HCN4增加0.1、0.5倍;相同浓度ET-1刺激不同时间后,HCN2增加0.3、1、5、5.1倍,HCN4增加0.1、0.6、2、2.1倍,而ET-1对HCN1和HCN3无显著影响;加BE-18257B后HCN2和HCN4表达明显降低,If减小;而IRL-1038对HCN表达和If无显著影响。结论:(1)新生大鼠心室肌HCN的表达以HCN2和HCN4为主,并有超极化激活的If;(2)ET-1使其HCN2和HCN4表达增加,If增大,其作用主要通过ETA受体实现。
- 李红霞韩莲花杨向军赵欣董宁征蒋彬宋建平刘志华蒋文平
- 关键词：内皮缩血管肽类心室肌细胞起搏电流
