国家自然科学基金(31272635) 作品数:8 被引量:56 H指数:4 相关作者: 杜晓东 焦钰 王庆恒 邓岳文 黄荣莲 更多>> 相关机构: 广东海洋大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省科技计划工业攻关项目 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
马氏珠母贝磺基转移酶PmCHST9基因的分子特征与表达分析 被引量:18 2015年 糖胺聚糖在抗病毒、消炎和抗氧化等免疫反应发挥重要作用。磺基转移酶(sulfotransferase)是糖胺聚糖生物合成的关键酶,Carbohydrate sulfotransferase 9(CHST9)可以将磺酸基从3'-磷酸腺苷酰-5'磷酸硫酸盐(PAPS)转移到半乳糖残基非还原末端的4位碳上。为研究CHST9在马氏珠母贝免疫调节中的作用,本研究克隆得到马氏珠母贝CHST9(Pinctada martensii CHST9,Pm CHST9)c DNA全长序列并检测其在不同组织中的表达模式。利用RACE技术,得出Pm CHST9序列全长1 388 bp,其中5'UTR为122 bp,3'UTR为192 bp,开放阅读框(ORF)为1 074 bp,编码357个氨基酸;Pm CHST9氨基酸序列分子量为42 889.2 Da,等电点为9.28,脂溶性系数为81.32,总平均亲水性为-0.493;氨基酸序列分析得出Pm CHST9具有典型的磺基转移酶-2结构域和一个跨膜结构域;多序列比对结果显示Pm CHST9与其它物种的CHST9同源性较低;荧光定量PCR检测结果表明Pm CHST9在鳃中表达量最高,其次是足和肝胰腺。综上所述,Pm CHST9可能参与马氏珠母贝的免疫调节作用,为进一步阐述Pm CHST9在马氏珠母贝中的免疫机制提供基础资料。 郝瑞娟 郑哲 王庆恒 王庆恒 焦钰 邓岳文关键词:马氏珠母贝 分子特征 马氏珠母贝TLR2基因cDNA的分子特征及组织表达分析 被引量:6 2014年 TLR2(toll like receptor 2)是TLR模式识别受体家族的重要成员之一,参与有机体的免疫识别。研究采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得了马氏珠母贝(Pinctada martensii)TLR2基因(PmTLR2)cDNA的全长序列并对其序列特征进行分析;同时检测了PmTLR2基因的mRNA在马氏珠母贝六个组织中的表达。结果表明:PmTLR2基因的cDNA全长2614 bp,包含41 bp的5’UTR,299 bp的3’UTR,23 bp的polyA,开放阅读框为2274 bp,编码758个氨基酸残基。多序列比对显示PmTLR2与牡蛎TLR2的序列相似性最高,为51%;Smart软件分析显示PmTLR2的蛋白序列中含有8个亮氨酸重复序列(Leucine rich repeats,LRRs),1个C端亮氨酸富集区(Leucine-rich repeat C-terminal,LRR-CT),1个N端亮氨酸富集区(Leucine-rich repeat N-terminal,LRR-NT),1个(Toll/IL-1R)同源结构域(TIR);荧光定量PCR分析表明PmTLR2在马氏珠母贝肝胰脏、性腺、血淋巴、鳃、外套膜和闭壳肌六个组织中均有表达,鳃中表达量最高。本研究为进一步阐述PmTLR2在马氏珠母贝免疫应答中的作用机制提供理论基础。 师尚丽 杜晓东 焦钰 黄荣莲 王庆恒 邓岳文关键词:马氏珠母贝 基因克隆 荧光定量PCR miR-210在马氏珠母贝外套膜矿化机制中的结构和功能预测 被引量:3 2016年 为进一步探究Pm-miR-210在马氏珠母贝贝壳形成的作用,利用miR-RACE技术验证Pm-miR-210的成熟体序列并进行序列分析,通过生物信息学分析来获得Pm-miR-210的前体序列,并进行组织定量和靶位点预测。结果表明,Pm-miR-210的miR-RACE结果与高通量测序结果一致,利用转录组数据库与Pm-miR-210成熟体序列比对,获得的前体序列长度为80 bp并具有典型的颈环结构。多序列比对结果显示,Pm-miR-210成熟体序列的种子区域在不同物种间具有极高的保守性。荧光定量结果得出,Pm-miR-210在外套膜边缘膜和中央膜中均有表达,但表达量差异不具统计学意义(P>0.05)。靶向预测分析结果显示,钙调蛋白(calmodulin)、钙调磷酸酶-A亚基(calcineurin A subunit)、N19以及Shematrin-3为Pm-miR-210的候选靶基因。 潘晓艳 郑哲 田荣荣 焦钰 杜晓东关键词:马氏珠母贝 马氏珠母贝SRF基因的分子特征及组织特异性表达 被引量:11 2015年 血清反应因子(SRF)是一个高度保守的转录因子,在细胞增殖、细胞凋亡以及免疫反应中发挥重要作用。为了探究血清反应因子在马氏珠母贝中的生物学功能,本研究运用c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到马氏珠母贝SRF基因(Pm SRF)c DNA的全长序列,并且应用实时荧光定量PCR技术对Pm SRF基因在马氏珠母贝不同组织中的表达进行检测。结果显示,Pm SRF基因序列全长1 758 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 440 bp,编码479个氨基酸,5'UTR为65 bp,3'UTR为253 bp,包含29 bp的poly A。预测其相对分子量为50 534.6 Da,理论等电点为7.71。多序列比对结果发现物种间SRF具有较高的保守性。SMART软件分析显示Pm SRF具有典型的MADS结构域。荧光定量PCR数据分析表明,Pm SRF基因在马氏珠母贝闭壳肌、肝胰腺、血细胞、外套膜、性腺、鳃六种组织中均有表达,其中在鳃中表达量最高。本研究可为进一步探究Pm SRF在贝类中的生物学功能提供重要的理论基础和参考价值。 田荣荣 田群莉 杜晓东 焦钰 黄荣莲 王庆恒 邓岳文关键词:马氏珠母贝 SRF 荧光定量PCR 蛋白质组学在贝类研究中的应用 被引量:2 2014年 随着人类基因组计划的完成,功能基因组学的研究日益蓬勃发展。作为功能基因组学的重要支柱,蛋白质组学的研究旨在阐明基因组所表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能。伴随着研究的不断深入,蛋白质组学技术已涉及水产经济动物如鱼、虾、贝的研究。尽管在水产动物的研究中运用蛋白质组学技术较晚,但进展迅速。目前对于贝类相关蛋白质组学的研究尚未有一系统总结。因此,基于贝类蛋白质组学中双向电泳体系的构建和优化、生物矿化、发育与免疫和环境毒理学的相关研究做一综述。 王志新 梁海鹰 杜晓东 朱家萍关键词:蛋白质组学 马氏珠母贝CyPB基因的克隆与表达分析 被引量:3 2015年 为了探究亲环蛋白B(Cy PB)在马氏珠母贝中的作用机制,运用c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到马氏珠母贝Cy PB基因(Pm Cy PB)c DNA的全长序列,并且应用实时荧光定量PCR技术对Pm Cy PB基因在马氏珠母贝不同组织中的表达进行检测。结果显示,Pm Cy PB基因序列全长1266 bp,其中开放阅读框(ORF)为678 bp,编码225个氨基酸,5′-UTR为62 bp,3′-UTR为526 bp。预测其相对分子量为24829.3,理论等电点5.77。多序列比对结果显示Pm Cy PB基因与其他物种的Cy PB具有较高的保守性。SMART软件对Pm Cy PB进行蛋白质序列分析,发现它包含亲环蛋白家族典型的肽脯氨酰顺反异构酶的结构域。实时荧光定量PCR数据分析表明,该Pm Cy PB基因在马氏珠母贝闭壳肌、肝胰腺、血细胞、外套膜、足、性腺、鳃这7种组织中均有表达,在外套膜表达量最高,其次是鳃。结果可为进一步阐述Pm Cy PB在马氏珠母贝中的免疫防御机制提供一定的理论基础。 田荣荣 闫芳 杜晓东 焦钰 黄荣莲 王庆恒 邓岳文关键词:马氏珠母贝 CY PB 基因克隆 荧光定量 马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)PmHEX基因的分子克隆及表达分析 2018年 β-N-乙酰-己糖胺酶(beta-N-acetylhexosaminidase/beta-Hexosaminidase,HEX)是一种糖苷水解酶,在几丁质降解、N-糖基化修饰、糖复合物代谢等过程发挥重要作用。为了探究PmHEX在马氏珠母贝贝壳形成中的作用,本研究利用RACE技术克隆获得马氏珠母贝PmHEX(Pinctada fucata martensii HEX,PmHEX)cDNA全长序列并通过qRT-PCR检测其在不同组织的表达模式。结果表明,PmHEX序列全长3 812 bp,其中5'UTR为22 bp,3'UTR为364 bp,开放阅读框(ORF)为3 426 bp,编码1 141个氨基酸;预测其相对分子量为125.92 kD,理论等电点为9.06;SMART软件分析PmHEX蛋白质序列,发现它具有典型的GH20和GH20b结构域和一个碳水化合物结合结构域;多序列比对显示PmHEX与其它物种的HEX具有较高的保守性,与珠母贝HEX序列相似度高达54%;q RT-PCR表达分析显示PmHEX在外套膜各区表达量较高,且在边缘区的表达量显著高于其他组织。综上所述,PmHEX可能参与马氏珠母贝贝壳的形成过程。 范闪闪 郑哲 郑哲 黄荣莲 焦钰 邓岳文 黄荣莲关键词:马氏珠母贝 克隆 马氏珠母贝热休克蛋白HSP60基因的克隆与表达分析 被引量:31 2013年 运用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆马氏珠母贝(Pinctada martensii)热休克蛋白HSP60基因cDNA全序列。序列全长2495 bp,开放阅读框(ORF)1734 bp,编码577个氨基酸,预测的分子量约为61.79 ku,理论等电点为5.49。5'非翻译区(5'UTR)长150 bp,3'非翻译区(3'UTR)长611 bp。同源性比对分析结果,马氏珠母贝HSP60基因与与太平洋长牡蛎(Crassostrea gigas)和光滑双脐螺(Biomphalaria glabrata)的同源性较高,达到75%。氨基酸序列分析显示,马氏珠母贝HSP60氨基酸序列具有典型的mt-HSP60特征序列、C-末端典型的GGM重复基序和一个ATP结合结构域。荧光定量数据分析发现,该基因在闭壳肌、外套膜、血淋巴、肝胰腺、性腺、鳃等6个组织中具有表达,在肝胰腺中表达量最高,鳃中次之,而在血液和闭壳肌中仅有少量表达;在脂多糖刺激后,该基因表达水平上调,12 h后达到最大值,之后又逐渐下调,均高于对照组,差异具统计学意义(P<0.05)。 王志新 梁海鹰 杜晓东 黄荣莲 邓岳文 王庆恒 焦钰关键词:马氏珠母贝 HSP60 基因克隆