国家自然科学基金(30490240)
- 作品数：13 被引量：33H指数：3
- 相关作者：沈倍奋冯健男黎燕吴玉章乔春霞更多>>
- 相关机构：军事医学科学院第三军医大学中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肿瘤坏死因子α拮抗剂的研究进展被引量：8
- 2005年
- 肿瘤坏死因子 α(TNF α)的过量表达与很多疾病密切相关 ,应用TNF α的拮抗剂降低这些疾病中的TNF α水平 ,将成为一种有效的治疗措施。已开发的TNF α拮抗剂主要包括TNFR与IgG的Fc段形成的融合蛋白和抗TNF α的单抗两大类 ,利用抗体嵌合技术、CDR区移植和噬菌体展示技术对抗TNF α的单抗进行了人源化 ,并开展了对类风湿性关节炎和结肠Crohn病等免疫性疾病的临床试验研究。本文就这些TNF α拮抗剂的研究进展作一综述。
- 秦卫松沈倍奋
- 关键词：TNF-Α拮抗剂
- 人IgE Cε3-Cε4蛋白的表达、复性、纯化及初步鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的获得IgE Fc段的Cε3-Cε4重组蛋白(E34)。方法以RT-PCR技术扩增IgE Cε3-Cε4(E34)cDNA片段,构建原核表达载体。以其转化大肠杆菌BL-21,诱导表达主要以包涵体形式存在的目的蛋白。经复性、纯化后,用Wes-tern blot和ELISA法初步鉴定所获E34蛋白与抗人IgE mAb的结合能力。结果对克隆的E34基因片段测序表明,与已报道的序列相一致。获得的可溶性E34蛋白经SDS-PAGE鉴定显示,其相对分子质量(Mr)同预期的结果相一致。Westernblot和ELISA法进一步证实,E34蛋白能够被鼠抗IgE mAb特异性识别。结论成功地构建了pET28a(+)-E34表达载体,并获得能被抗IgE mAb特异性识别的可溶性蛋白E34,为下一步的工作打下了基础。
- 乔春霞林周胡美茹刘睿秦卫松冯健男沈倍奋
- 关键词：IGE复性纯化
- 应用噬菌体随机肽库技术筛选SARS-CoVS蛋白模拟表位被引量：2
- 2005年
- 目的筛选SARS病毒(Severe acutere spiratorysyndromeas sociated coronavirus,SARSCoV)结构蛋白S(Spike)特异性的模拟表位,为抗SARS疫苗研究提供基础。方法以抗SARS病毒S蛋白的单克隆抗体为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机12肽库进行5轮“吸附洗脱扩增”的筛选,随机挑选30个克隆,经噬菌体酶联免疫吸附(ELISA)法和交叉反应实验鉴定阳性克隆,再进行DNA序列分析和竞争抑制结合实验,以确定SARS病毒S蛋白的模拟表位。结果经噬菌体富集后,从随机挑选的30个克隆中得到了29个编码8种12肽的阳性克隆,8条肽与S蛋白的320～350氨基酸序列有较高同源性,确定YF、W、E和K氨基酸残基为模拟表位的骨架结构。结论用噬菌体12肽库成功筛选到了SARS病毒S蛋白的模拟表位,为基于S蛋白的肽疫苗研制提供了基础。
- 张小萍王靖雪魏静万瑛吴玉章
- 关键词：SARS病毒S蛋白模拟表位噬菌体肽库
- 抗CD20嵌合抗体的构建与表达被引量：7
- 2006年
- 目的构建抗CD20嵌合抗体的真核表达载体并实现在真核细胞中的表达。方法采用RT-PCR,从分泌鼠源抗人CD20抗体的杂交瘤细胞系1-28中钓取其轻、重链基因,连接至T载体,进行序列测定。还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离抗CD20单克隆抗体(mAb)1-28的轻、重链蛋白,切取轻链及重链条带,质谱测定氨基酸序列,Biolynx和pepeseq软件分析可信度。对比所测DNA序列与蛋白序列,确定所钓取基因的正确性。将mAb1-28轻重链可变区基因,连接至表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体C1-28的轻链真核表达载体C1-28L及重链真核表达载体C1-28H。PCR、酶切及序列测定以确定连入基因的正确性。脂质体介导法将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,RT-PCR检测mRNA水平的表达,夹心ELISA法检测蛋白表达量,Westernblot检测目的蛋白的大小。结果钓取到mAb1-28基因。mAb部分蛋白序列测定结果与根据所钓取基因推出的蛋白序列相对应。成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达,表达量可达257mg/L,其相对分子质量(Mr)与人IgG的Mr一致。结论为后续研究嵌合抗CD20抗体对非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一定的依据。
- 王玉刚黄英谷欣于鸣冯健男孙瑛勋黎燕沈倍奋
- 关键词：杂交瘤质谱分析嵌合抗体
- 用于肿瘤治疗的抗体及其改造策略被引量：2
- 2007年
- 沈倍奋
- 关键词：抗体药物抗肿瘤分子改造靶向性
- 蓖麻毒素A链与底物作用的结构基础及其解毒剂的研究进展被引量：3
- 2006年
- 蓖麻毒素是从植物蓖麻籽中分离得到的一种Ⅱ型核糖体失活蛋白,其A链(RTA)为效应链,具有N-糖苷酶活性,通过催化28SrRNA在S/R结构域第4324位脱去一个保守的腺嘌呤,使核糖体60S亚基失活,从而阻断蛋白质合成途径,引起细胞死亡。RTA因其高细胞毒性,常常用于制备免疫毒素药物,尤其在恶性肿瘤的生物治疗上具有诱人的应用前景;或可能被用作恐怖袭击的生物战剂。本文对RTA与底物相互作用的结构信息及其解毒剂进行综述。
- 郭雷鸣冯健男（审校）黎燕
- 关键词：蓖麻毒素A链解毒剂
- 骨髓瘤抗原Sp17 HLA-A*0201限制性CTL表位预测及初步鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的鉴定骨髓瘤抗原Sp17的HLA-A*0201限制性CTL表位。方法采用超基序和量化基序法预测Sp17的HLA-A*0201限制性CTL表位;用T2细胞亲和力实验和稳定性实验对该表位进行初步鉴定。结果超基序和量化基序法预测得出Sp17抗原的4个CTL表位(LLEGLTREI(19-27)I、LREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)、KEKEEVAAV(111-119)),亲和力实验结果表明LLEGLTREI(19-27)I、LREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)有较高亲和力,而KEKEEVAAV(111-119)肽亲和力较低;稳定性实验表明ILREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)与HLA-A*0201分子结合稳定性较好。结论ILREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)有可能是骨髓瘤抗原Sp17 HLA-A*0201限制性CTL表位。
- 杨玓姜曼李凡邓一静倪兵吴玉章
- 关键词：肿瘤抗原CTL表位
- Ran HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及初步鉴定
- 2006年
- 目的寻找并鉴定肿瘤相关抗原Ran来源的HLA-A2.1限制性CTL表位,为临床开展基于Ran表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法应用超基序和量化基序相结合的方法初步预测Ran的HLA-A2.1限制性CTL表位,利用其与T2细胞亲和力实验以及与T2细胞结合稳定性试验初步验证预测结果。结果应用超基序和量化基序相结合的方法得到4个候选表位IMFDVTSRV(88-96),TLGVEVHPL(42-50),YVATLGVEV(39-47)和VLCGNKVDI(118-126),亲和力试验结果显示IMFDVTSRV,TL-GVEVHPL和YVATLGVEV有较高的的亲和力而VLCGNKVDI无明显亲和力,结合稳定性试验显示在这4个候选肽中IMFD-VTSRV的结合稳定性最好。结论IMFDVTSRV最有可能是肿瘤抗原Ran的HLA-A2.1限制性CTL表位。
- 李凡姜曼杨玓邓一静倪兵吴玉章
- 关键词：RAN肿瘤相关抗原细胞毒性T淋巴细胞表位
- IgE表位分析及其拮抗剂的分子设计研究进展
- 2005年
- IgE类型的抗体是过敏性疾病的始动因素,抗IgE抗体能特异性地识别并结合游离IgE分子,下调IgE分子水平,人源化抗IgE单克隆抗体的出现更是为过敏性疾病带来了新的治疗方法。临床研究治疗哮喘、过敏性鼻炎以及食物过敏症等疾病中获得的大量数据更显示了其良好的疗效。与传统临床治疗手段相比,人源化抗IgE抗体具有副作用小,安全性高等优点。此外,治疗过敏性疾病的拮抗分子的研究也十分盛行。在分析IgE分子功能表位的基础上进行适当的分子设计可获得潜在的治疗过敏性疾病的拮抗剂如抗IgE抗体类似多肽、IgE类似肽以及其他抑制性小分子等。
- 乔春霞冯健男沈倍奋
- 关键词：免疫球蛋白E过敏反应表位分析拮抗剂分子设计
- 抗血小板糖蛋白IIb/IIIa Fab抗体的原核表达及其生物活性
- 2004年
- 目的 :研制抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIaFab抗体。方法 :通过间接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验 ,选取鼠源抗血小板糖蛋白IIb/IIIa单克隆抗体 (mAbP14 0 )。从分泌该mAb的杂交瘤细胞株 (P14 0 )中 ,克隆到抗体轻链基因和重链Fd段基因 ,构建原核表达重组质粒p3MH/P14 0к Fd ,并在XLI Blu菌株中进行表达。采用钴亲和层析法对P14 0Fab抗体进行纯化 ,用SDS PAGE、ELISA和Westernblot等方法 ,对P14 0Fab抗体进行检测 ,并通过血小板聚集抑制试验 ,观察P14 0Fab抗体的抗栓活性。结果 :SDS PAGE和Westernblot表明 ,纯化的P14 0Fab抗体的相对分子质量 (Mr)约为 4 70 0 0。ELISA的结果显示 ,P14 0Fab抗体可与人血小板特异性结合。在体外ADP诱导的血小板聚集试验中 ,P14 0Fab抗体对血小板聚集的抑制作用成剂量依赖性 ,IC50 的平均值为 16 .85mg/L。结论
- 杨永昌赖春宁王琰沈倍奋黎燕
- 关键词：FAB抗体抗栓膜糖蛋白SDS-PAGE免疫荧光试验
