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基于EST数据库的葡萄APETALA2基因cDNA克隆及其表达分析被引量：38: 2010年; APETALA2(AP2)是拟南芥生长发育特别是花器官发育过程中重要的调控基因。利用生物信息学方法以拟南芥APETALA2基因cDNA序列作为模板,对葡萄EST数据库进行同源检索筛选,电子克隆出葡萄AP2基因(Vv-AP2)cDNA序列。以香悦葡萄花cDNA为模板,根据电子克隆的葡萄AP2基因cDNA序列设计特异引物,分别利用RACE技术和特异PCR技术获得该基因3’末端和5’末端,序列拼接后获得葡萄的APETALA2基因的cDNA全长。该cDNA的全长为2 208 bp,命名为Vv-AP2。Vv-AP2核苷酸序列有一个1 536 bp完整的开放读码框(ORF),其5’与3’末端非翻译区分别为268 bp和376 bp。其中,3’末端含有28 bp的Ploy+(A)。该基因在GenBank基因数据库的注册号为FJ809943。氨基酸推导结果表明该cDNA共编码了511个氨基酸,具备完全保守的核定位信号序列(KKSR)以及2个高度保守的重复序列即AP2结构域。分别采用半定量RT-PCR和SYBR Green I实时定量RT-PCR初步分析了Vv-AP2在葡萄叶、茎、花序、花等不同器官中的表达水平。其中,Vv-AP2在花序和花中的表达量明显高于叶和茎。; 王晨刘洪房经贵宋长年曹雪杨光章镇; 关键词：葡萄基因克隆

葡萄9个重要花发育相关基因在藤稔葡萄夏芽成花过程中的表达分析被引量：12: 2010年; 利用荧光定量PCR技术对9个葡萄花发育相关基因在藤稔葡萄夏芽成花过程中的表达进行分析。所研究的基因包括:Vitis vinifera AGAMOUS(VvAG)、Vitis vinifera APETALA3(VvAP3)、Vitis vinifera FLOWERING LOCUSC(VvFLC)、Vitis vinifera FRUITFUL(VvFUL)、Vitis vinifera FLOWERING LOCUS T(VvFT)、Vitis vinifera APETALA2(VvAP2)和Vitis vinifera SUPPRESSOR OF OVER EXPRESSION OF CO1(VvSOC1)、Vitis vinifera APETALA1(VvAP1)以及Vitis vinifera LEAFY(VvLFY)。结果表明,经摘心处理的夏芽能够进行花芽分化及花芽形成,而未经处理的对照组夏芽未形成花芽;9个基因在处理与对照夏芽及发育枝茎尖中的表达存在一定的差异,其在处理样品中的表达与拟南芥中同源基因的表达基本相符。该研究对于深入了解葡萄花发育的分子机理,相关基因在转基因中的利用以及其表达的合理调控等具有重要的理论指导意义。; 杨光岳林旭王晨谭洪花曹雪房经贵; 关键词：葡萄基因成花过程

葡萄EST-SSRs标记的开发及其在品种遗传多样性分析中的应用: EST-SSR标记具有开发方法简单及成本低廉等优点。利用EST-SSR构建图谱,可直接将与目标性状相关的EST标记或候选基因定位在不同的遗传图谱上,进一步为标记辅助育种、基因图位克隆、重要基因在染色体上或连锁图上的分布特...; 郭磊上官凌飞于华平李晓颖宋长年房经贵; 关键词：葡萄 EST SSR; 文献传递

葡萄7个重要花发育相关基因序列特征的分析被引量：11: 2010年; 根据Genbank上发表的7个葡萄花发育相关基因(VvAG、VvAP3、VvFLC、VvFT、VvSOC1、VvAP1、VvFUL)的序列信息,设计了7对特异引物,并采用PCR方法对‘香悦’葡萄中的同源基因进行了扩增,将获得的各基因片段克隆至pMD18-T载体后转化E.coliDH5α,经PCR鉴定后进行了序列测定。将得到的7个基因的编码框序列及推导出的氨基酸序列与Gen-Bank中公布的相应序列进行同源性比较,并构建系统进化树。从本研究发现不同葡萄品种的花发育基因存在核苷酸与氨基酸序列上的差异,表现在某些碱基发生转换与颠换以及氨基酸类型的变化。分析与多种植物同源基因的进化关系表明,7个葡萄花发育相关基因分别与不同树种的同源基因表现出较高的相似性,在进化上具有一定的随机性。; 杨光曹雪房经贵宋长年陶建敏王晨初建青; 关键词：葡萄花发育基因克隆

夏黑葡萄花及果实全长cDNA文库的构建及鉴定被引量：9: 2010年; 构建葡萄花果全长cDNA文库是开展葡萄花及果实发育的分子机理研究的重要工作基础,有助于重要相关基因的克隆、功能分析、调控及其利用。以生产上广泛栽培、性状优良且极具代表性的夏黑葡萄为试材,应用优化的CreatorSMART cDNA Construction Kit技术,构建了夏黑葡萄花和果实的全长cDNA文库。文库的滴度为1.2×106pfu/mL,库容为6.0×106pfu/mL。从文库中随机挑取30个克隆进行菌落PCR鉴定的结果显示:插入片段大小为1.0～3.0kb,重组率为99%。研究结果表明,该葡萄全长cDNA文库具备较高的质量。; 王晨王文艳初建青杨光郭磊房经贵; 关键词：葡萄果实 RNA提取 CDNA文库

果树果实中的糖代谢被引量：37: 2009年; 糖分是果树果实的重要组成成分。有关果实中糖代谢的研究一直是果树研究的重点,并且取得了一定的进展。为更好地认识果树果实中糖代谢的研究以及提供调控糖代谢提高果实品质的理论依据,文章综述了果实发育过程中糖的种类及含量、糖进入果实的途径及运输,果实糖代谢的相关反应,果实糖代谢的方式、糖代谢相关酶的活性与糖积累的关系以及果实中糖代谢的调控等。; 王晨房经贵王涛谭洪花; 关键词：果树果实糖代谢

RAPD标记用于葡萄、苹果等7种果树的品种鉴定的研究被引量：30: 2009年; 针对RAPD技术的特点及其实际应用中易出现稳定性的问题,本研究以葡萄、梅、杏、桃、李、苹果、梨七种果树的不同品种为试材,对RAPD技术在鉴定果树品种中的科学性进行了技术上的验证与分析。结果表明:理想的反应条件能够保证RAPD技术具有很好的稳定性,是适用于鉴定果树品种的简易与理想的DNA分子标记技术。不同长度的引物的RAPD技术在几种果树品种鉴定中体现出谱带清晰度以及数量等方面不同的特点。其中,碱基数为9、10与11的引物在杏、桃、李和梅上的多态性较高且谱带清晰,苹果、梨和葡萄更适合应用11个碱基的引物。; 于华平房经贵张美勇杨光曹雪谭洪花; 关键词：RAPD 果树

葡萄与葡萄酒的营养成分被引量：45: 2009年; 该文有针对性地介绍了葡萄与葡萄酒具有的营养成分及营养医疗保健价值,以期为人们了解和食用葡萄与葡萄酒提供参考。; 王晨房经贵刘洪谭洪花; 关键词：葡萄葡萄酒营养成分

适于葡萄不同组织RNA提取方法的筛选被引量：54: 2010年; 比较了CTAB法、改良CTAB法、Trizol法、SDS-苯酚法和改良SDS法5种RNA提取方法提取葡萄叶片、花序、茎尖、卷须和果实组织RNA的效果。并进一步从总RNA中分离出了高质量的低分子量RNA(LMWRNA),建立了葡萄LMWRNA提取的方法。改进后的改良SDS法能够克服果实中RNA提取难度大的问题,能够从果实中提取到质量和产量都很高的RNA。结果表明,改良SDS法适用于葡萄叶片、花序、茎尖、卷须组织中总RNA的提取,改进的改良SDS法是从果实中提得LMWRNA较佳选择。在总RNA提取的基础上建立的葡萄LMWRNA提取方法能够达到研究的要求。; 张彦苹王晨于华平蔡斌华房经贵; 关键词：葡萄总RNA RT-PCR

葡萄SPL9和SPL10基因全长cDNA克隆、亚细胞定位和表达分析被引量：12: 2011年; 从‘夏黑’葡萄(Vitisvinifera×V.labrusca ‘Summer Black’)中克隆了SBP(Squamosa promoter binding protein)类重要转录因子基因SPL9和SPL10全长cDNA序列,在GenBank的登录号分别是HM018600和HM018601,序列分析表明二者均具备完全保守的核定位信号序列(KKSR)、SBP结构域以及葡萄microRNA156a(Vv-miR156a)的靶序列。进一步构建Vv-SPL9和Vv-SPL10亚细胞定位表达载体,对其是否具有核定位功能进行了研究,并利用半定量、荧光定量RT-PCR研究了这两个基因与Vv-miR156a在葡萄不同组织的表达情况。结果表明:转录因子SPL9和SPL10均定位于细胞核中,而且两个基因在葡萄各个组织中均有表达,但表达量存在差异,两者均在小果中的表达量最高。Vv-miR156a的积累水平与这两个基因在各个组织中的表达呈现一定的消长关系,并且在小果中最为明显。; 曹雪王晨房经贵杨光于华平宋长年; 关键词：葡萄亚细胞定位荧光定量RT-PCR

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中国博士后科学基金(20080440161)

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