国家自然科学基金(39870875)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
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- 相关机构：免疫学研究室解放军第307医院军事医学科学院附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组人IL-6D24-PE40外毒素融合蛋白的构建及其生物学效应被引量：4
- 2001年
- 目的 构建重组人白细胞介素 6 绿脓杆菌外毒素融合蛋白IL 6D2 4 PE40 ,以选择性杀伤高表达IL 6受体 (IL 6R)的肿瘤细胞和白血病细胞。方法 采用重叠延伸的基因融合技术将N 末端缺失 2 4个氨基酸的重组人白细胞介素 6 (IL 6D2 4)cDNA与缺失细胞结合区的绿脓杆菌外毒素PE40基因进行融合 ,构建IL 6D2 4 PE40融合基因。利用HB10 1/pBV2 2 0表达系统 ,实现了IL 6D2 4 PE40融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达 ,经MonoQ柱进行层析纯化 ,采用MTS法检测细胞毒活性。结果 IL 6D2 4 PE40融合蛋白在大肠杆菌中的表达水平达到 40 %～ 6 0 %。包涵体蛋白经分离、复性及纯化得到纯度 >95 %的融合蛋白。Westernblot证明 ,纯化的融合蛋白与IL 6抗体及PEA抗体均发生特异性结合。细胞毒活性检测证实 ,IL 6D2 4 PE40融合蛋白能高度特异地选择性杀伤高表达IL 6R的U937细胞 ,ID50 约为 2 5 0ng/ml,而对不表达IL 6R的CEM细胞无杀伤作用。结论 IL 6D2 4 PE40融合蛋白能够选择性杀伤高表达IL 6R的靶细胞 ,有希望成为导向治疗高表达IL 6 /IL
- 郑黎燕奚永志孔繁华金荔陈兴国屠敏刘楠
- 关键词：基因克隆生物学效应
- 白细胞介素6受体的β亚单位基因和蛋白在人白血病细胞中的表达被引量：2
- 2000年
- 刘爽奚永志郭斯启刘楠屠敏金荔陈兴国孔繁华
- 关键词：白血病蛋白
- 白细胞介素-6在人白血病细胞中的转录与自分泌被引量：7
- 2000年
- 目的 探讨白细胞介素 6 (IL 6 )基因在不同类型白血病细胞中的构成表达以及白血病细胞是否自泌IL 6 ,为更好地利用IL 6 /IL 6R系统介导重组白细胞介素 6 假单胞菌外毒素融合蛋白(IL 6 PE40 )靶向治疗白血病提供可靠依据。方法 采用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)半定量技术、序列分析及ELISA方法检测白血病细胞系U937、HL6 0、KG1、TF1、K5 6 2、HuT2 8、CEM及Raji中IL 6mRNA的表达以及IL 6的自泌含量。结果 IL 6mRNA在粒、红、单以及淋系白血病细胞系中的相对表达丰度甚低 ,仅在 0 0 3～ 0 0 7之间 ,而慢性粒细胞白血病K5 6 2却高表达 ,其丰度达 1 2 5 ;所检测的8种白血病细胞在自泌IL 6水平上也存在着显著差异 ,按分泌含量的不同拟可将各型白血病细胞分为高、中、低三型。结论 不同类型的白血病细胞其IL 6基因的构成性表达和自泌IL 6的水平是明显不同的 ,大量自泌的IL 6有可能会对重组IL 6 PE40的靶向性结合产生竞争性抑制 ,从而影响其特异性杀伤白血病细胞的效果。
- 刘爽奚永志郭斯启刘楠屠敏孔繁华
- 关键词：白血病白细胞介素6
