国家高技术研究发展计划(2006AA10Z182)
- 作品数：2 被引量：11H指数：2
- 相关作者：王华芳范源伟王天祥严晓丹更多>>
- 相关机构：北京林业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划引进国际先进农业科技计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 胡杨转基因体系的建立被引量：7
- 2009年
- 胡杨(Populus euphratica)是唯一能在沙漠里生长的高大乔木树种,建立其转基因体系可为胡杨抗逆分子机制与应用技术研究提供基本方法。通过研究农杆菌介导的胡杨转GUS基因的技术体系得出以下结论:(1)胡杨再生植株体系,叶片在附加1.0μmol·L-16-BA和5.0μmol·L-1NAA的1/2MS培养基上不定芽诱导率较高;(2)转基因体系,胡杨叶片在含100μmol·L-1乙酰丁香酮的OD600值为0.4-0.6的根癌农杆菌菌液中浸染15分钟,共培养2天,GUS基因转化效率较高;(3)转基因植株抗生素筛选,转GUS基因胡杨叶片用300mg·L-1头孢霉素抑制农杆菌生长,在含9mg·L-1G418的培养基上诱导不定芽以获得转基因的抗性植株。
- 范源伟刘挨枝王华芳
- 关键词：根癌农杆菌GUS基因抗逆
- 胡杨根、茎、叶、愈伤组织总RNA提取的研究被引量：4
- 2008年
- 胡杨根、茎、叶、愈伤组织等器官和组织的总RNA高质量提取是进行以胡杨RNA为基础的分子生物学研究的基础。以2 a生胡杨实生苗根系为材料,用CTAB-PVP提取缓冲液裂解细胞并变性蛋白,经氯仿/异戊醇(24∶1,v/v)抽提后,用3种不同的沉淀方法获得胡杨根系总RNA,电泳和定量测试等分析提取质量。结果表明,LiCl沉淀法结合70%乙醇洗涤沉淀两次获得的的胡杨根系总RNA,条带清晰、亮度高,且没有明显的DNA污染;actin基因片段设计引物对胡杨根系总RNA进行RT-PCR扩增,扩增片段与预期大小一致,表明该RNA可用于逆转录合成cDNA,提取物RNA中的Li+残留对逆转录酶活性的抑制作用不明显;该方法用以提取2 a生胡杨实生苗茎、叶及愈伤组织总RNA,均获得高质量总RNA。CTAB-PVP-LiCl(附70%乙醇洗涤RNA沉淀2次)的方法可用于胡杨根、茎、叶和愈伤组织总RNA的提取。
- 严晓丹王天祥刘挨枝王华芳
- 关键词：根系RNA提取
