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多年生白木香茎干不同部位总RNA提取方法的改良被引量：1: 2016年; 运用"通体结香"技术诱导处理10年生白木香,以处理15 d结香后的茎干白木层(H)、过渡层及结香层(A+T)为材料,对艾德莱EASY-spin plus RN38试剂盒RNA提取过程进行改良,并对比分析改良前后2种方法提取RNA质量的差异。结果表明:改良法提取的总RNA质量、纯度和完整性等均较RN38试剂盒好,其中28S和18S条带清晰无杂质污染,无降解,A260/A280接近2.0,RIN值大于6。说明改良后的方法适用于多年生白木香不同结香部位总RNA的提取,能满足转录组数据分析。; 侯晓婉刘培卫孙佩文孟慧张争; 关键词：白木香总RNA提取茎干

三年生白木香机械伤害转录组学研究被引量：20: 2012年; 国产沉香为瑞香科(Thymelaeaceae)植物白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg)含有树脂的木材。白木香树体只有在受到伤害等胁迫,才在伤口周围的木材内产生倍半萜等沉香类物质,但是伤害如何诱导沉香倍半萜生物合成途径至今尚未揭示。为揭示伤害诱导白木香结香的分子机制,本研究应用RNA测序技术对机械伤害后的白木香木质部转录组进行测序,研究其基因表达谱,挖掘其功能基因。本研究共获得40 295条表达序列标签(express sequence tags,EST),平均长度305 bp。经序列合并拼接,获得22 095条单基因簇(unigene)。通过核苷酸和蛋白质序列等方面的同源性分析,表明其中61.6%(13 611条)与其他生物的已知基因具有不同程度的同源性。通过功能分类研究(GeneOntology)和代谢途径分析(KEGG)获得参与沉香倍半萜合成的序列26条(编码7个关键酶)。这些基因的发现为研究沉香倍半萜化合物的生物合成途径及伤害诱导沉香形成的分子机制提供了基础数据。; 张争高志晖魏建和徐艳红李滢杨云孟慧隋春汪孟曦; 关键词：国产沉香白木香

白木香肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)基因的克隆及表达分析被引量：10: 2014年; 对国产沉香的基原植物白木香Aquilaria sinensis肉桂酸-4-羟基化酶基因C4H编码区进行克隆,并对其进行生物信息学分析和表达分析。根据已报道的白木香伤害转录组高通量测序结果分析获得1条具有肉桂酸羟化酶酶保守结构域的C4H基因序列,采用RT-PCR技术克隆得到白木香C4H基因编码区序列,并对C4H蛋白进行生物信息学分析。另外,采用qRT-PCR方法对C4H基因在伤害胁迫下的表达模式进行分析。序列分析表明,所克隆的C4H基因编码区开放阅读框(opening reading frame,ORF)长为1 515 bp,编码514个氨基酸,GenBank登录号为KF134783。qRT-PCR实验证明C4H基因受不同伤害处理的诱导,分别在8,20 h达到最高表达水平。白木香C4H基因的编码区序列的分离克隆为进一步研究C4H蛋白在白木香中黄酮及芳香族类化合物合成途径中的功能及表达调控奠定基础。; 梁良韩晓敏张争郭庆梅徐艳红刘娟廖永翠; 关键词：白木香芳香族化合物

白木香倍半萜合酶基因AsSS4的克隆、原核表达与功能鉴定被引量：3: 2014年; 通过RT-PCR方法从伤害处理的白木香树木质部中克隆得到沉香倍半萜合酶4(sesquiterpene synthase 4,As SS4)基因的全长开放读码框,该基因全长读码框为1 698 bp,编码包含565个氨基酸的蛋白质。将As SS4基因与原核表达载体p ET28a相连构建重组载体p ET28a-As SS4,把重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S中,用IPTG诱导重组菌,经SDS-PAGE电泳分析,获得分子质量约为64 k D的重组As SS4蛋白。利用镍凝胶亲和色谱法获得纯度较高的As SS4蛋白,以法尼基焦磷酸(FPP)为底物进行蛋白酶促反应,共催化产生5种倍半萜类成分:cyclohexane,1-ethenyl-1-methyl-2,4-bis(1-methylethenyl)-、β-elemene、α-guaiene、α-caryophyllene和δ-guaiene。本研究首次证实了白木香倍半萜合酶As SS4基因的功能,为揭示伤害诱导沉香倍半萜形成的分子机制奠定了理论基础。; 梁良郭庆梅张争徐艳红韩晓敏刘娟; 关键词：白木香原核表达基因功能

可可毛色二孢菌对白木香产生倍半萜诱导作用被引量：14: 2014年; 为了明确可可毛色二孢菌Lasiodiplodia theobromae对白木香产生倍半萜的诱导作用。采用气质联用(GC-MS)对可可毛色二孢菌PDA发酵液进行检测,发酵液中检测到茉莉酸类化合物(jasmonates,JAs)。利用固相微萃取-气质联用(SPME-GC-MS)检测发酵液处理后白木香愈伤中沉香倍半萜成分,发现其能够诱导白木香愈伤产生α-愈创木烯(α-guaiene),δ-愈创木烯(δ-guaiene),α-蛇麻烯(α-humulene)3种沉香倍半萜。推测可可毛色二孢菌可产生茉莉酸类物质,其作为伤害信号分子诱导白木香产生倍半萜。; 韩晓敏梁良张争李秀锦杨云孟慧高志晖徐艳红; 关键词：茉莉酸类物质白木香

白木香枝枯病病原菌的鉴定被引量：11: 2013年; 目的:明确白木香枝枯病的病原菌,确定其是否能够诱导白木香产生沉香。方法:通过形态特征观察、rDNA-ITS序列测定分析、柯赫氏法则验证确定病原菌及其分类地位。结果:分析结果表明,侵染白木香Aquilaria sinensis的病原菌为可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae,该菌可诱导沉香产生。结论:首次明确白木香枝枯病的病原菌为可可毛色二孢,为利用真菌诱导白木香结香研究提供理论基础。; 张争杨云魏建和陈旭玉孟慧汪孟曦

白木香茎中内源茉莉酸类和倍半萜类物质对机械伤害的响应被引量：14: 2013年; 为揭示伤害信号——茉莉酸类(JAs)对倍半萜可能的调控作用,以 3 年生白木香[Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg]树苗为试材进行机械伤害和外施茉莉酸甲酯(MeJA)处理,测定其茎中内源 JAs和倍半萜含量。结果表明,机械伤害处理 1 h 后,内源 JAs 含量显著增加,随后迅速下降;伤害处理 24 h后又有小幅升高。伤害处理诱导白木香产生 3 种倍半萜(δ–愈创木烯、α–愈创木烯和α–葎草烯)且含量随着伤害时间延长而增多。外源 MeJA 处理也能够诱导产生相同种类的倍半萜且诱导强度大于伤害处理。伤害早期(1 h)内源 JAs 含量升高和伤害后期(48 h)倍半萜含量增多是植物启动相应的防御反应和抵御伤害胁迫的重要机制。; 张争杨云魏建和孟慧汪孟曦韩晓敏隋春; 关键词：白木香茉莉酸类机械伤害

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国家教育部博士点基金(20091106120009)