上海市教育发展基金会“曙光计划”项目(10SG22)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
- 相关作者：戴尅戎张晓玲童文学张宁苏靖更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院上海交通大学中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：上海市教育发展基金会“曙光计划”项目国际科技合作与交流专项项目上海市科委国际合作基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 新型纳米非病毒基因输送体系PCL-PEG-chitosan的构建与特性
- 2013年
- 目的优化新型纳米非病毒载体聚己内酯(PCL)-聚乙二醇(PEG)-壳聚糖(chitosan)(PCL-PEG-chitosan)在体外与质粒的复合条件,并进行转染活性测定。方法在体外利用凝胶电泳方法确定非病毒载体与携带绿色荧光蛋白基因的质粒(pEGFP)复合的最小氮磷比。利用动态光散射粒径测量仪确定复合物在不同氮磷比、不同缓冲溶液体系下粒径的变化情况。将pEGFP与PCL-PEG-chitosan进行复合后转染293T细胞,荧光显微镜观察转染效率。结果凝胶电泳结果显示,非病毒载体PCL-PEG-chitosan与pEGFP复合的最小氮磷比为4:1,PCL-chitosan与pEGFP复合的最小氮磷比也为4:1,chitosan与pEGFP复合的最小氮磷比为1:1。动态光散射实验结果显示:非病毒载体PCL-PEG-chitosan与pEGFP复合而成的复合物的粒径随着氮磷比的增大而减小;在醋酸盐缓冲体系与DMEM缓冲体系中,复合物的粒径基本一致,相对稳定。荧光显微镜观察发现,经过接枝改性的纳米载体PCL-PEG-chitosan的转染效率有所提高。结论 PCL修饰可减弱chitosan对pEGFP的复合能力,提高最低复合氮磷比。经PCL和PEG修饰的纳米载体PCL-PEG-chitosan的细胞转染活性有所提高,但尚需进一步改进。
- 王斌金才益童海骏戴尅戎张晓玲
- 关键词：DNA转染氮磷比
- 新型低相对分子质量聚乙烯亚胺耦联载体(PEI-Bu)对大鼠原代骨髓间充质干细胞的基因转染效率及毒性评价被引量：1
- 2013年
- 目的构建新型低相对分子质量聚乙烯亚胺(PEI)耦联载体,评估其对原代大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的细胞毒性及转染效率。方法利用可降解的氨基甲酸酯化学键耦联相对分子质量为800的PEI制备低相对分子质量的PEI(PEI 800)衍生物纳米非病毒载体,命名为PEI-Bu;进一步对PEI-Bu压缩DNA的能力、体外降解效率及对原代BMSCs的细胞毒性和基因转染效率进行生物学评价。结果 PEI-Bu能有效压缩质粒DNA并形成稳定的复合物,所形成的复合物粒径约50 nm。与实验室常用的已商品化的相对分子质量为25 000的PEI(PEI 25 000)相比,PEI-Bu对大鼠原代BMSCs的细胞毒性较小,且基因转染效率更高。结论作为一种新型的非病毒纳米载体,PEI-Bu能有效转染BMSCs,且安全性较高,具有进一步研发的价值。
- 向晟楠苏靖童文学王传东张宁戴尅戎张晓玲
- 关键词：聚乙烯亚胺骨髓间充质干细胞基因转染效率
- 大鼠关节软骨干细胞的分离培养及其特性的鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的分离培养大鼠关节软骨干细胞(ACSCs)并鉴定其特性。方法运用纤连蛋白黏附法从大鼠关节软骨细胞中分选出ACSCs,流式细胞技术分别鉴定干细胞阳性表面抗原(阳性标志物CD90与CD44)和阴性表面抗原(阴性标志物CD45、CD31与CD34)在ACSCs中的表达水平,单克隆形成实验鉴定ACSCs的单克隆形成能力,成骨、成脂及成软骨诱导鉴定ACSCs的多向分化潜能。结果纤连蛋白可以特异性地分选出ACSCs。ACSCs高表达CD90与CD44,几乎不表达CD45、CD31与CD34。经过7d培养,单个ACSC可以形成大于32个细胞的单克隆细胞团。ACSCs具备很强的成骨、成脂和成软骨分化能力。结论大鼠关节软骨内存在ACSCs,ACSCs具有比较典型的干细胞特征。
- 童文学向晟楠张宁张宁张晓玲
- 关键词：软骨纤连蛋白软骨再生
- MSCs成骨分化中BMP2对成骨转录因子SATB2表达的调控作用被引量：5
- 2011年
- 目的探索间充质干细胞(MSCs)成骨分化中骨形态发生蛋白2(BMP2)对成骨转录因子SATB2表达的调控作用。方法体外培养小鼠间充质细胞系C2C12,腺病毒介导的BMP2(Adv-BMP2)诱导其向成骨细胞分化,建立并验证C2C12细胞成骨分化细胞模型。Real-Time PCR和Western blotting分别检测C2C12细胞成骨分化过程中经不同浓度Adv-BMP2处理不同时间时SATB2 mRNA和SATB2蛋白表达;以经相应浓度Adv-β-Gal处理细胞作对照。结果经150 pfu/cell Adv-BMP2处理C2C12细胞5 d后,成骨细胞标志基因Ⅰ型胶原、骨唾液酸蛋白和骨钙素表达以及碱性磷酸酶活性均显著增加,MSCs成骨分化模型构建成功。150 pfu/cell Adv-BMP2诱导C2C12细胞成骨分化过程中,SATB2 mRNA和SATB蛋白表达随分化进程而增加;Adv-BMP2浓度为0～225 pfu/cell时,SATB2表达随Adv-BMP2浓度升高而增加。结论 BMP2可调控SATB2的表达,从而影响MSCs成骨分化。
- 左炽健剌婷张宁戴尅戎张晓玲
- 关键词：骨形态发生蛋白2基因表达
