江苏省高校自然科学研究项目(08KJD3120008)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 抗VWF-A3区特异性单抗SZ-123单链抗体的构建和表达
- 2011年
- 目的以能与vWF-A3区特异结合的单克隆抗体SZ-123为模板,构建其单链抗体,为深入研究vWF-A3结构与功能的关系提供有力的工具。方法通过逆转录及多聚酶链反应,扩增并克隆单抗SZ-123的可变区基因VH、VL,经测序后加入连接肽,构建成SZ-123单链抗体(SZ-123 ScFV),并在大肠杆菌中进行表达。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot方法验证SZ-123 ScFV的免疫原性。结果 VH、VL可变区基因符合小鼠抗体可变区特征,SZ-123 ScFV基因拼接正确。表达产物除少量为分泌型外,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体蛋白的20%。经过变性和复性后,获得具有生物活性的高纯度单链抗体片段。结论成功表达了SZ-123单链抗体,该小分子抗体具有特异结合vWF-A3区的能力。
- 王菲菲赵益明江淼姚拾秀李雪美阮长耿
- 关键词：原核表达
