国家自然科学基金(81272992)
- 作品数：16 被引量：16H指数：2
- 相关作者：孙建方王小坡宋昊温斯健张韡更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院北京协和医学院中国医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 黑素瘤生物标志物的研究进展
- 2014年
- 黑素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤,其发生率和致死率在世界范围内逐年上升.达卡巴嗪仍是治疗无手术适应证的转移性黑素瘤的标准治疗药物.由于缺少对治疗反应的预测因子,黑素瘤患者个体治疗方案的选择存在很大的随机性.激活癌基因的突变是重要的黑素瘤标志物,它们可以预测激酶抑制剂的治疗反应并可能是独立的预后判断因子;表观遗传的改变（DNA甲基化、染色质重塑和非编码RNA）也可能成为有价值的黑素瘤生物标志物.免疫学研究发现,Toll样受体的浸润程度可以作为判断黑素瘤预后的一个标志物.这些生物标志物的发现,为黑素瘤的个体化治疗、治疗反应和预后的判断提供了新的可能.
- 温斯健孙建方
- 关键词：黑色素瘤免疫遗传学表观
- shRNA介导黑素瘤A375细胞Cbl—b基因沉默前后蛋白质组学分析被引量：2
- 2018年
- 目的分析shRNA介导黑素瘤A375细胞Cbl—b基因沉默前后差异表达蛋白。方法使用非标记定量蛋白质组学技术鉴定分别用Cbl—bshRNA慢病毒载体（Cbl—bshRNA组）和对照慢病毒载体（对照组）转染的A375细胞的差异表达蛋白。采用生物信息学方法对筛选的差异蛋白进行基因本体富集及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。Western印迹验证差异蛋白（EphA2、GSK313）表达和Cbl—bshRNA沉默后两组p-AKT表达。采用SPSS23．0软件进行统计分析，两组间蛋白丰度比较采用两样本￡检验。基因本体及KEGG富集分析结果采用Fisher精确概率法检验。结果共鉴定3449种蛋白，筛选出Cbl—bshRNA组和对照组差异表达蛋白74个。与对照组相比，Cbl．bshRNA组52个蛋白表达上调，22个下调。差异蛋白基因本体富集分析发现前5位显著富集生物学过程为整合素介导细胞黏附、单一生物代谢过程、整合素介导细胞黏附调节、蛋白质靶向线粒体调节、核酸代谢过程；前5位显著富集分子功能为DNA结合、2，2铁硫簇合物结合、信号受体活性、钙黏蛋白结合、细胞黏附分子结合；前5位显著富集的细胞组分为核小体、DNA包装复合体、光感器连接纤维、DNA一蛋白质复合体、胞外区部分。京都基因与基因组百科全书通路富集分析发现，前5位与黑素瘤相关的显著富集通路包括叶酸生物合成、轴突导向、细胞外基质受体相互作用、黏合连接、Writ信号通路。Western印迹检测显示，Cbl—bshRNA组EphA2相对表达水平降低（O．369，以对照组表达水平为1计算），GSK3t3表达增加（3．524），该结果与蛋白质组学检测结果一致；p-AKT相对表达水平降低（0．453）。结论Cbl—b可能通过多种生物学通路参与黑素瘤发病；EphA2／P13K／AKT信号通路可能是Cbl．b参与黑素瘤形成的重要机制之一。
- 王小坡倪娜娜熊竞舒宋昊姜祎群陈浩曾学思孙建方
- 关键词：黑素瘤蛋白质组学
- 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1在黑素瘤组织中的表达及其基因启动子甲基化水平研究被引量：2
- 2016年
- 目的：检测组氨酸三聚体核苷结合蛋白1（HINT1）在黑素瘤中的表达和HINT1基因启动子甲基化状态，探讨HINT1启动子甲基化与临床病理参数的关系。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测56例黑素瘤及瘤旁组织和51例色素痣组织中HINT1基因启动子区甲基化水平，免疫组化法检测56例黑素瘤和51例色素痣组织中HINT1蛋白的表达。结果 MSP显示，黑素瘤组织、瘤旁组织及色素痣组织中HINT1基因启动子区甲基化率分别为76.8%（43/56）、33.9%（19/56）和35.3%（18/51），黑素瘤组HINT1基因启动子区甲基化率明显高于瘤旁组织组和色素痣组，且差异有统计学意义（χ2=20.810、18.749，均P〈0.05），瘤旁组织组与色素痣组间差异无统计学意义（χ2=0.022，P〉0.05）。免疫组化显示，56例黑素瘤和51例色素痣组织中分别有12例（21.4%）和42例（82.4%）HINT1蛋白阳性表达，两组阳性率差异有统计学意义（χ2=39.633，P〈0.01）。12例HINT1蛋白阳性的黑素瘤组织中，有6例HINT1基因启动子甲基化，而在44例HINT1蛋白阴性的癌组织中HINT1启动子甲基化率高达84.1%（37/44），两组差异有统计学意义（χ2=6.147，P=0.013）。56例黑素瘤中，HINT1基因启动子区甲基化率在Clark分级Ⅰ~Ⅱ级组（59.1%，13/22）与Ⅲ~Ⅴ级组（88.2%，30/34）间差异有统计学意义（χ2=6.365，P=0.012）。结论 HINT1在黑素瘤组织中低表达，其机制可能与启动子区发生高甲基化有关；HINT1启动子区高甲基化可能参与黑素瘤的发生及发展。
- 温斯健倪娜娜张韡宋昊王小坡邵雪宝李阿梅程伟孙建方
- 关键词：黑色素瘤甲基化
- 兄弟分患色素异常性皮肤淀粉样变和皮肤异色病样淀粉样变病被引量：4
- 2015年
- 例1男，33岁。全身皮肤色素异常25年。8岁时无明显诱因躯干、四肢皮肤颜色加深，散在米粒大色素脱失斑，后逐渐增多，泛发面颈部、躯干、四肢。未曾发生水疱，无光敏感，无自觉症状。既往体健，
- 王光平孙建方
- 关键词：皮肤淀粉样变淀粉样变病色素异常性皮肤色素异常色素脱失斑
- Ovostatin 2 knockdown significantly inhibits the growth,migration,and tumorigenicity of cutaneous malignant melanoma cells
- We previously identified ovostatin 2 as a new candidate gene of cutaneous malignant melanoma in a Chinese popu...
- Ying-Xue HuangHao SongXue-Bao ShaoXue-Si ZengXiu-Lian XuJinliang QiJian-Fang Sun
- 关键词：A375MELANOMA
- 文献传递
- CCL18在恶性黑素瘤中的表达及其与血管内皮生长因子、Ki67表达的相关性研究被引量：1
- 2016年
- 目的：探讨趋化因子配体18（CCL18）在恶性黑素瘤（恶黑）组织中的表达和临床意义，与血管内皮生长因子（VEGF）、Ki67表达的相关性。方法用免疫组化方法检测58例恶黑石蜡标本中CCL18、VEGF及细胞增殖核抗原Ki67的表达，同时检测20例色素痣石蜡标本中CCL18的表达水平。对CCL18的表达与恶黑临床病理及VEGF、Ki67的表达进行相关性分析。用免疫荧光方法验证CCL18在恶黑组织中的表达。结果 CCL18在恶黑组阳性率为84.48%（49/58），而在色素痣组均无表达，差异有统计学意义（χ^2=45.46，P〈0.01）。CCL18在恶黑的表达与肿瘤Clark分级、Breslow厚度呈正相关（rs值分别为0.609、0.644，均P〈0.01）；在有无溃疡以及有无淋巴结转移组间差异有统计学意义（均P〈0.05）。CCL18的表达在不同性别、年龄、肢端/非肢端恶黑患者组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。恶黑中CCL18阳性表达水平与VEGF表达水平呈正相关（rs=0.727，P〈0.05），与Ki67表达水平无相关（P〉0.05）。免疫荧光显示，恶黑组织中肿瘤细胞胞质表达CCL18。结论 CCL18在恶黑组织中高表达，与肿瘤侵袭、转移有一定关系。
- 宋昊王白鹤邵雪宝程伟熊竞舒王小坡王建曾学思徐秀莲孙建方
- 关键词：病理过程血管内皮生长因子类KI-67抗原
- PKCI-1／HINT1表达质粒的构建及其对黑素瘤A375细胞凋亡及自噬影响的初步研究
- 2016年
- 目的 构建人PKCI-1/HINT1基因的真核表达质粒,研究其在人黑素瘤A375细胞株中的表达并检测其对A375细胞凋亡及自噬的影响.方法 以人黑素瘤细胞A375的总RNA为模板,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增PKCI-1/HINT1基因序列,将PKCI-1/HINT1基因克隆到真核表达载体PCDNA3.1（＋）中,构建PCDNA3.1（＋）-PKCI-1/HINT1重组体.将PCDNA3.1（＋）-PKCI-1/HINT1表达载体瞬时转染黑素瘤A375细胞,RT-PCR及Western印迹检测PKCI-1/HINT1在细胞内的表达,并以PCDNA3.1（＋）空载体转染细胞作为相应对照组.噻唑蓝（MTT）检测PKCI-1/HINT1转染后细胞的增殖变化,Hoechest 33258染色检测细胞凋亡,采用绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3（GFP-LC3）标记结合激光共聚焦显微镜法检测PKCI-1/HINT1对细胞自噬的的影响,并通过Western印迹检测PKCI-1/HINT1对细胞内caspase 3及自噬相关蛋白beclin1蛋白表达的影响.结果 PCDNA3.1 （＋）-PKCI-1/HINT1真核表达载体经酶切及测序鉴定构建成功,并能够在细胞内有效表达.MTT检测发现PKCI-1/HINT1能够明显抑制A375细胞的增殖,与PCDNA3.1（＋）对照组相比,在48 h,72 h及96 hPCDNA3.1 （＋）-PKCI-1/HINT1组活细胞数分别减少17.0％,25.6％、29.4％,差异有统计学意义（均P＜0.05）.Hoechest 33258染色显示PKCI-1/HINT1可促进A375细胞内凋亡小体形成.激光共聚焦显微镜发现PKCI-1/HINT1的过表达可使A375细胞内GFP-LC3B的点状聚集增加.Western印迹发现,PKCI-1/HINT1可促进细胞内caspase 3及beclin1蛋白表达.结论 成功构建真核表达载体PCDNA3.1 （＋）-PKCI-1/HINT1并在细胞内有效表达PKCI-1/HINT1.PKCI-1/HINT1的高表达可以抑制A375细胞增殖,促进其凋亡,同时可引发A375细胞的自噬过程.
- 倪娜娜温斯健张韡姜祎群孙建方
- 关键词：黑色素瘤细胞系自噬
- 肉芽肿性皮肤松弛症六例临床及病理研究
- 2017年
- 目的探讨6例肉芽肿性皮肤松弛症（GSS）的临床和病理特点。方法收集6例GSS患者的临床和病理学资料。结果6例均为男性，皮损为松弛斑块甚至垂悬状肿块，5例发生于皱褶部位（或为主），1例仅发生于右胸部。1例合并蕈样肉芽肿。组织病理均可见真皮内非干酪性肉芽肿，伴中等大小的淋巴样细胞、多核巨细胞浸润。1例见淋巴样细胞异形改变，余5例异形不明显。1例伴有亲表皮现象。免疫组化均见CD4^＋T细胞为主的单克隆增生。4例行弹性纤维染色见弹性纤维卷曲、断裂甚至消失，2例见多核巨细胞吞噬弹性纤维现象。2例行T细胞受体（TCR）基因重排，均为1单克隆增生。2例患者采用浅层x线照射或电子束照射，皮损变小后手术切除，未再复发。其余4例患者采用干扰素α-2b肌内注射、0．02％氮芥外用等，症状有改善。结论GSS进展缓慢，不推荐过度治疗。局限于皱褶部位的GSS推荐手术治疗。
- 王光平王小坡陈浩张韡姜祎群曾学思徐秀莲孙建方
- 关键词：皮肤松弛症蕈样肉芽肿皮肤表现病理学
- miR-128 targets the CCL18 gene in cutaneous malignant melanoma progression
- The CC chemokine ligand 18（CCL18） protein is a CC chemokine that takes an important part in normal and inflamm...
- Hao SongNa-Na NiXiao-Wei ZhouJing-Shu XiongYing YangXiao-Po WangBai-He WangXue-Si ZengXiu-Lian XuJinliang QiJian-Fang Sun
- 关键词：MALIGNANCY
- 文献传递
- 泛素连接酶Cbl-b在黑素瘤组织和细胞系A375、M14、MV3中的表达及意义被引量：2
- 2016年
- 目的：探讨泛素连接酶Cbl-b在皮肤黑素瘤组织及黑素瘤细胞系A375、M14、MV3中的表达及意义。方法收集69份黑素瘤、30份色素痣组织，采用免疫组化法检测Cbl-b蛋白表达水平。实时荧光定量PCR、免疫印迹法分别检测黑素瘤细胞系A375、M14、MV3及黑素细胞中Cbl-b mRNA及蛋白表达水平。结果69份皮肤黑素瘤标本中，52份（75.36%）表达Cbl-b；30份色素痣标本中，4份（13.33%）表达Cbl-b，两组Cbl-b蛋白表达水平差异有统计学意义（χ2=32.745，P〈0.01）。黑素瘤组织中Cbl-b表达水平与肿瘤进展程度、Clark分级和Breslow厚度均呈正相关（rs分别为0.569、0.654、0.727，均P〈0.01）。实时荧光定量PCR显示，A375、M14、MV3细胞Cbl-b mRNA表达差异有统计学意义（F=176.537，P〈0.01）。免疫印迹法显示，A375细胞Cbl-b蛋白表达水平最高，黑素细胞最低。结论 Cbl-b蛋白在皮肤黑素瘤组织及其细胞株中均高表达。
- 王小坡温斯健粟倩雅宋昊倪娜娜姜祎群陈浩孙建方
- 关键词：肿瘤侵润肿瘤分级CBL-B
