国家自然科学基金(81273526)
- 作品数：25 被引量：107H指数：5
- 相关作者：李俊黄成孟晓明徐涛陈昭琳更多>>
- 相关机构：安徽医科大学芜湖市第二人民医院皖南医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Kv1.3在LPS诱导的小鼠急性肝损伤模型中表达变化被引量：4
- 2016年
- 目的探讨脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝损伤模型中钾离子通道蛋白Kvl.3的表达水平。方法选取C57BL/6小鼠,建立LPS诱导的急性肝损伤模型,采用组织病理学检查,观察肝损伤病变,相关试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,免疫组化、荧光实时定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot检测Kv1.3表达变化;选取原位灌流的方法分离原代肝脏枯否细胞(KCs),检测Kv1.3的表达变化。体外培养RAW264.7细胞,使用LPS刺激,进一步检测Kv1.3的表达变化;使用Kv1.3特异性阻断剂玛格毒素(MgTx)预处理RAW264.7细胞,再加LPS刺激,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞因子的表达变化。结果组织病理学检查证实急性肝损伤模型建立成功,模型组的ALT和AST含量均高于正常组(P<0.01),模型组组织和原代肝脏KCs中Kv1.3表达均低于正常组(P<0.01),体外实验LPS刺激RAW264.7细胞后,Kv1.3表达降低(P<0.05);Kv1.3特异性阻断剂MgTx减少LPS诱导的细胞因子的分泌。结论 Kv1.3在急性肝损伤模型中的表达降低,阻断Kv1.3能减少LPS诱导巨噬细胞炎症因子的分泌,Kv1.3可能在治疗肝脏疾病过程中发挥着重要的作用。
- 周群吴宝明孟晓明黄成李俊
- 关键词：离子通道急性肝损伤枯否细胞
- 川芎嗪对肝星状细胞凋亡的影响及机制研究被引量：4
- 2017年
- 目的研究川芎嗪对大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡的影响及可能机制,为肝纤维化的治疗提供新的方法。方法以血小板衍生生长因子(PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞系HSC-T6,建立体外肝纤维化细胞模型,在此基础上,给予川芎嗪30μmol/L刺激HSC-T6,作用24 h后,Western blot法检测相关蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Hoechst 33258染色法观察各组HSC的凋亡形态。结果Western blot法结果表明,与PDGF组比较,川芎嗪组ERS标志性蛋白GRP78表达增多,并且ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12表达增强,Bcl-2/Bax比例明显下调,pERK/ERK水平降低。流式细胞仪检测结果表明川芎嗪组较PDGF组HSC凋亡率增强,同时Hoechst 33258染色结果表明川芎嗪组HSC呈现典型的核固缩等凋亡形态变化。结论川芎嗪可以诱导PDGF活化的HSC发生凋亡,其可能与ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12的表达上调、ERK1/2磷酸化水平降低,进而下调Bcl-2/Bax比例,发生相关凋亡。
- 黎峰黄成李俊
- 关键词：川芎嗪肝纤维化肝星状细胞内质网应激凋亡
- 来氟米特对大鼠自身免疫性葡萄膜炎的作用
- 2015年
- 目的 探讨来氟米特对大鼠自身免疫性葡萄膜炎（EAU）的保护作用.方法 实验研究.建立大鼠光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）诱导的自身免疫性葡萄膜炎动物模型,按随机数字表法完全随机设计分组为正常组、模型组、来氟米特给药组（3、6、12 mg/kg）、环孢霉素阳性对照组（10 mg/kg）,每组6～8只.于造模第2天开始灌胃给药,每日1次,共13d.裂隙灯显微镜观察大鼠EAU的症状,造模后第14天制备大鼠眼球切片,以HE染色法进行组织病理学观察,参照Agarwal的标准对EAU各组大鼠进行临床症状和病理学分级进行评分,免疫组织化学染色（SP法）,检测各组大鼠眼组织中IL-17的表达,应用ELISA检测血清中IL-17和干扰素（IFN）-γ含量,使用流式细胞仪检测各组大鼠脾脏CD4＋ Th17细胞亚群纯度,使用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组大鼠眼组织IL-17 mRNA和IFN-γmRNA表达水平.计量资料的数据以均数±标准（差（（x）±s）表示,组间比较采用t检验.等级资料间比较采用非参数检验,多重比较用Bonferroni方法进行校正.结果 在来氟米特给药组的大鼠中,14d时EAU发病的临床评分均低于模型组,并呈剂量依赖性.与模型组比较[3（3,4）],来氟米特低剂量组[1.5（1,2）]临床评分明显减低,差异有统计学意义（P=0.0006,P＜α＇,α＇=0.05/15],病理学检查显示模型组大鼠眼部表现为重度炎症细胞浸润及视网膜全层破坏、受损,病理评分3（3,4）;中剂量组病理评分2（1,3）,明显低于模型组,差异有统计学意义（P=0.0014＜α＇,α＇=0.05/15）.免疫组织化学检查显示模型组虹膜、睫状体和视网膜部位可见IL-17蛋白表达,来氟米特各剂量组眼部IL-17蛋白表达明显减少.流式细胞检测发现,与正常组相比,模型组大鼠脾脏Th17细胞亚群比例显著升高（8.5％±1.3％vs.0.5％±0.2％;t=8.057,P=0.000＜α＇,α＇=0.05/15）,EAU大鼠口服不同�
- 房城伯周德喜占书箱何勇林珍黄成李俊
- 关键词：葡萄膜炎自身免疫疾病TH17细胞
- 栀子苷衍生物五乙酰栀子酸对人肝细胞损伤的保护作用被引量：6
- 2014年
- 目的探讨栀子苷衍生物五乙酰栀子酸对L-O2型肝细胞化学损伤的保护作用及其机制。方法培养L-O2型肝细胞,采用CCl4和H2O2体外诱导L-O2,检测培养上清液中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平,检测上清液中丙二醛(MDA)的含量、过氧化物歧化酶(SOD)的活力及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果五乙酰栀子酸(10、50、100μg/ml)不仅可明显降低由CCl4所致肝细胞培养上清液中AST、ALT、LDH水平及MDA含量的升高,显著提高SOD的活力及GSH-Px的活性;而且还可使H2O2所致肝细胞培养上清液中升高的AST、ALT、LDH及MDA的含量明显降低,提高SOD的活力及GSH-Px的活性。结论栀子苷衍生物五乙酰栀子酸体外肝细胞损伤有显著的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用有关。
- 程畅黄成王雅蕊张磊汤文建李俊
- 关键词：栀子苷保肝抗氧化作用
- 栀子苷对PDGF诱导的HSC-T6增殖活化的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨栀子苷抑制血小板衍生生长因子(PDGF)介导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖活化的作用及其可能机制。方法培养HSC-T6,体外给予不同浓度(20、50、100、200、400μg/ml)的栀子苷,通过MTT法检测细胞的活力;选取20、50、100μg/ml的栀子苷,PDGF刺激后,采用MTT、实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测细胞增殖和细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;进一步采用Western blot法检测栀子苷对MAPK通路蛋白P-ERK、P-p38和Akt/mT OR/p70S6K通路蛋白的表达。结果栀子苷可以抑制PDGF诱导的HSC-T6的增殖和减少活化标志物α-SMA的表达,并且明显抑制Akt、mT OR和p70S6K的磷酸化水平,但是对ERK、p38活化水平无显著影响。结论栀子苷可以抑制PDGF诱导的HSC-T6的增殖与活化,可能起到抗纤维化的作用,这一作用的产生可能与Akt/mT OR/p70S6K通路有关。
- 孔令娜占书箱黄成马陶陶林翔李俊
- 关键词：栀子苷
- 8-异丙胺亚甲基橙皮素(IPHP)在Caco-2细胞模型上跨膜转运的研究被引量：3
- 2015年
- 目的利用Caco-2细胞模型研究8-异丙胺亚甲基橙皮素(IPHP)在小肠吸收转运的机制。方法在Caco-2细胞模型上进行IPHP的跨膜转运实验,探讨药物浓度、p H、温度、P-gp抑制剂维拉帕米、MRP2抑制剂MK-571和丙磺舒对IPHP在体外细胞模型上跨膜转运的影响。结果 IPHP在Caco-2细胞模型上的转运具有一定的浓度依赖性,IPHP不同浓度从A侧到B侧的渗透系数Papp(AP-BL)(×10-5)分别为:(2.21±0.200)、(3.56±0.306)、(3.81±0.179)、(4.23±0.229)、(4.17±0.262)cm·s-1,B侧到A侧的渗透系数Papp(BL-AP)(×10-5)分别为:(3.57±0.209)、(4.51±0.113)、(4.97±0.229)、(5.24±0.550)、(5.07±0.557)cm·s-1,外排率分别为:1.61、1.26、1.3、1.23、1.21。温度和p H对其转运均有影响,而P-gp抑制剂对于IPHP的转运没有明显的影响,MRP2抑制剂在一定程度上增加了IPHP的转运量(P<0.05)。结论 IPHP在Caco-2细胞模型上的转运方式主要是被动扩散,且其转运不受P-gp外排蛋白影响,而外排蛋白MRP2可能参与了IPHP的外排转运。
- 胡婷婷黄成孟晓明陈昭琳沈陈林李俊
- 关键词：CACO-2细胞
- TSC1在肝纤维化中的表达及基因甲基化被引量：1
- 2016年
- 目的通过检测在大鼠肝纤维化模型及转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的大鼠肝星形细胞(HSC)T6中结节性硬化症(TSC)相关蛋白错构素(hamartin)的表达,并检测HSC T6细胞TSC1基因启动子甲基化状态,探讨肝纤维化疾病治疗的新靶点。方法构建大鼠肝纤维化模型,培养HSC T6细胞。利用Western blot法检测hamartin蛋白表达,利用焦磷酸测序检测TSC1启动子甲基化。结果与正常对照组比较,肝纤维化模型组TSC1蛋白表达量较小(P<0.01),且TSC1基因启动子甲基化程度较高。结论 TSC1可能与肝纤维化形成有一定关联。
- 陈晨黄成孟晓明李俊
- 关键词：肝纤维化甲基化
- 环耙明对M1型巨噬细胞分泌iNOS的影响被引量：1
- 2016年
- 目的研究环耙明在巨噬细胞极化过程中的作用。方法用100 ng/ml脂多糖(LPS)和20 ng/ml干扰素γ(IFN-γ)处理RAW264.7 24 h刺激成M1型巨噬细胞,用20ng/ml白介素-4(IL-4)处理RAW264.7 24 h刺激成M2型巨噬细胞,用荧光定量PCR(QPCR)法检测各分型中一氧化氮合成酶(iN OS)、CD86、精氨酸酶-1(Arg-1)、CD206、GLi1、ptch1 mRNA水平的表达;用QPCR法、Western blot法、免疫荧光法检测加入环耙明后对M1型巨噬细胞分泌iN OS的影响。结果 M1型巨噬细胞高分泌iN OS、CD86、M2型巨噬细胞高分泌Arg-1、CD206(P<0.01);40 nmol/L环耙明刺激后,M1型巨噬细胞中ptch1 mRNA水平的表达明显增强且在100 nmol/L时达到最大值(P<0.01);经环耙明1 000nmol/L刺激后有效降低了iN OS的mRNA和蛋白水平,可能提示环耙明会促进巨噬细胞向M2型巨噬细胞分化。结论环耙明能够明显地降低M1型巨噬细胞中iN OS的分泌。
- 叶家宝李俊徐晓军黄成孟晓明
- 关键词：巨噬细胞一氧化氮合成酶
- 丹参酮Ⅰ对HepG2细胞胰岛素抵抗作用及机制的研究被引量：14
- 2016年
- 目的探讨丹参酮Ⅰ对Hep G2细胞胰岛素抵抗的作用及分子机制。方法高浓度胰岛素诱导建立胰岛素抵抗Hep G2细胞模型;MTT法确定丹参酮Ⅰ的给药浓度;葡萄糖氧化酶法检测丹参酮Ⅰ对胰岛素抵抗Hep G2细胞葡萄糖消耗量的影响;Western blot法测定蛋白络氨酸磷酸酶1B(PTP1B)、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(P-AKT)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(AKT)蛋白表达情况。结果以10-7mol/L胰岛素诱导24 h成功建立了胰岛素抵抗Hep G2细胞模型;MTT筛选出了78、156、312 ng/ml丹参酮Ⅰ给药浓度;丹参酮Ⅰ呈浓度依赖地增加胰岛素抵抗Hep G2细胞葡萄糖消耗量;Western blot法结果显示,与正常组比较,模型组PTP1B表达升高、P-AKT表达降低。与模型组比较,丹参酮Ⅰ给药组PTP1B的表达浓度依赖性地降低、P-AKT的表达浓度依赖性地升高。结论丹参酮Ⅰ能改善胰岛素抵抗Hep G2细胞,其机制可能是通过抑制PTP1B的表达,进而促进了P-AKT/AKT信号通路的活化。
- 蔡双朋李俊黄成孟晓明陈培杰
- 关键词：2型糖尿病胰岛素抵抗HEPG2
- 夏枯草总三萜调控ERK、TGF-β1/Smad通路对肝纤维化大鼠的保护作用研究被引量：22
- 2015年
- 目的研究夏枯草总三萜(TTP)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠的保护作用及其分子机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、TTP(25、50、100 mg·kg-1)组和阳性对照组(秋水仙碱0.1 mg·kg-1),除正常组外,其余各组分别于大鼠背部皮下注射CCl40.1 ml·(100 g)-1,每周2次,连续12周,自造模第5周起开始给药,各给药组分别给予相应的药物,正常组、模型组给予等体积的溶媒,每天1次。实验结束后,比色法测定血清中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;放免法测定透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)含量;同时取固定部位肝组织,苏木精伊红染色(HE)、Masson染色观察肝纤维化程度;制备100 g·L-1肝匀浆,进行丙二醛(MDA)、超(过)氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、羟脯氨酸(Hyp)含量测定;RT-PCR法检测α-SMA、Procollagen I、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA表达;Western blot法检测pERK蛋白表达。结果与模型组相比,TTP(25、50、100 mg·kg-1)给药组不仅能降低肝纤维化大鼠ALT、AST、HA、CⅣ、PCⅢ、Hyp水平,改善肝脏病变程度,降低MDA水平,增强SOD以及GSH-Px活性,还可抑制肝组织中α-SMA、Procollagen I、Smad2、Smad3及p-ERK表达,升高Smad7表达。结论夏枯草总三萜对CCl4诱导的肝纤维化大鼠具有较好的保护作用,其机制可能与下调p-ERK表达,调控TGF-β1/Smad信号通路有关。
- 章圣朋何勇徐涛黄成谢加力邓子煜李俊
- 关键词：肝纤维化脂质过氧化TGF-Β1/SMAD信号通路
