天津市高等学校科技发展基金计划项目(20060720)
- 作品数：11 被引量：10H指数：2
- 相关作者：金天明孙颖谷禹李留安高静更多>>
- 相关机构：天津农学院吉林大学天津市北辰区畜牧水产局更多>>
- 发文基金：天津市高等学校科技发展基金计划项目国家自然科学基金天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 利用E.coli-App穿梭载体构建温控双基因裂解载体pMC-WK被引量：3
- 2011年
- 采用PCR方法从噬菌体PhiX174基因组中扩增出裂解蛋白E基因,从金黄色葡萄球菌基因组中扩增出核酸酶A基因(SN),通过15个柔性氨基酸linker将双基因串联,插入PBV220表达载体,构建温控双基因裂解系统(DLS)。PCR扩增DLS,将其与E.coli-App穿梭载体pMC-Express相连,构建重组穿梭载体pMC-WK。裂解试验表明,E-15aalinker-SN裂解较E裂解迅速而彻底,菌体裂解率达到99.999 4%;经PCR扩增出的DLS具有裂解活性。本试验成功构建了温控双基因裂解载体pMC-WK,为App菌影疫苗的研究奠定了基础。
- 孙颖金天明冯立文袁洁
- 关键词：穿梭载体
- TRAIL和HN基因融合表达重组腺病毒的构建及其对DT40细胞的抑瘤作用
- 2012年
- 分析携TRAIL和HN基因的重组腺病毒在DT40细胞中的表达规律及杀伤肿瘤细胞的生物学效应。通过RT-PCR分别从鸡外周血淋巴细胞和新城疫病毒(NDV)LaSota株中扩增出TRAIL和HN基因,通过定点突变和重叠延伸拼接法实现TRAIL和HN基因的2A连接,将获得的目的基因克隆到pShuttle-CMV穿梭载体中,与pAdeasy-1载体在BJ5183细菌内同源重组,构建了包含目的基因的重组腺病毒质粒pAd-TRAIL和pAd-TRAIL-2A-HN,将质粒线性化后转染AD293细胞,包装后的重组腺病毒,经RT-PCR检测、荧光显微镜观察和病毒滴度测定后,将获得的重组腺病毒体外转染禽淋巴白血病DT40细胞,通过RT-PCR和Western blotting检测重组腺病毒的感染性和外源基因的表达情况,采用流式细胞仪检测重组腺病毒对DT40细胞生长的影响以及Ad-TRAIL和Ad-TRAIL-2A-HN对DT40细胞的凋亡作用。PacⅠ酶切证实同源重组成功;RT-PCR、荧光显微镜检测证实重组腺病毒质粒成功导入AD293细胞中且具有良好的感染性,滴度为1.9×1010PFU/mL;Western blot检测结果显示,TRAIL-linker-HN基因能够在DT40细胞中稳定表达并对DT40细胞产生细胞毒作用,且诱导细胞的凋亡率为29.52%,表明TRAIL-linker-HN具有双基因抑瘤的协同效应。
- 高静孙颖金天明
- 关键词：重组腺病毒抑瘤作用
- 副猪嗜血杆菌病的PCR诊断与病理组织学观察被引量：1
- 2015年
- 为了诊断副猪嗜血杆菌病和研究其病理组织学变化,采集疑似副猪嗜血杆菌病病猪的主要病变组织器官,进行细菌分离和PCR检测,并观察各器官的病理组织学变化。结果表明:分离的菌株和副猪嗜血杆菌标准菌株均扩增出650 bp左右的特异性目的条带,且分离菌株与标准菌株的序列同源性高达99%,诊断为副猪嗜血杆菌感染。病理组织学观察可见肺脏组织出血,肺泡间质增宽,心脏和肝脏严重出血、瘀血和充血,肾小球萎缩和淀粉变性,炎性细胞浸润。说明副猪嗜血杆菌对猪各组织器官均有不同程度的损伤,尤以肺脏病变最为严重。
- 张东超弓建芳谷禹王金萍李留安金天明
- 关键词：副猪嗜血杆菌病细菌分离PCR检测病理组织学观察
- 副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验研究被引量：1
- 2014年
- 副猪嗜血杆菌病是一种猪的传染病,主要引起断奶仔猪和保育猪发病。试验对天津某规模化猪场疑似副猪嗜血杆菌病猪采集病变明显的组织进行细菌分离培养、显微镜镜检、生化试验等实验室诊断,结合病猪的临床症状和病理变化特点,判定该细菌分离株为副猪嗜血杆菌。药敏试验结果显示,该株副猪嗜血杆菌对头孢噻呋、阿米卡星等药物高度敏感。
- 谷禹张东超弓建芳徐继鹏金天明李留安高丰
- 关键词：副猪嗜血杆菌药敏试验
- 脂多糖诱导小鼠肾小管上皮细胞和肺泡巨噬细胞IL-12和TNF-α表达的研究
- 2010年
- 为了研究脂多糖（LPS）诱导小鼠肾小管上皮细胞和肺泡巨噬细胞IL-12和TNF—α表达的关系，试验采用不同浓度LPS以不同时间体外刺激肾小管上皮细胞（TEC）和肺泡巨噬细胞（AM），用ELISA法分别检测上清液中IL—12和TNF—α的分泌量。结果表明：用2μg／mLLPS刺激TEC，其分泌IL—12的量于24小时达到峰值（P〈0．01）；随着LPS浓度的增加，TEC分泌IL-12的量逐渐增大，当LPS浓度增加到20μg／mL时IL-12的分泌量达到峰值。用10μg／mLLPS刺激AM，AM分泌TNF—α的量于2小时达到峰值（P〈0．01），随后逐渐下降；随着LPS浓度的变化，TNF—α分泌水平有明显不同。说明在一定的剂量范围内，IL-12和TNF—α的分泌量与LPS呈剂量及时间依赖关系，但随着LPS刺激时间及浓度的增加，IL-12和TNF—α的分泌量逐渐减少；不同浓度的LPS与细胞因子的产生效价有相关性。
- 金天明谷禹沈彤张义马国文高原王思珍李向阳刘楷王学礼
- 关键词：脂多糖肾小管上皮细胞肺泡巨噬细胞IL-12
- 禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗的研制被引量：2
- 2009年
- 利用禽巴氏杆菌C48-1、C48-2强毒株、禽大肠杆菌O78和O1血清型强毒株及克雷伯菌临床分离株制苗,通过疫苗对鸡的免疫效力试验、疫苗最小免疫剂量试验、疫苗产生坚强免疫力时间的测定、疫苗免疫期的测定和疫苗保存期的测定等,研制出禽霍乱、大肠杆菌病和克雷伯菌病多价蜂胶三联灭活疫苗。结果该三联灭活疫苗安全可靠,免疫原性良好,最小免疫剂量为0.5 mL/只,免疫7 d后产生坚强保护力,疫苗对上述疾病的保护率为100%,免疫期为6个月,4℃条件下保存期为9个月。
- 金天明谷禹马文芝周淑云李富桂郭亮张建斌
- 关键词：禽霍乱大肠杆菌病蜂胶三联灭活疫苗
- 装载温控双基因裂解质粒的App菌影检测方法研究
- 2013年
- 为了提高对前期试验中制备的胸膜肺炎放线杆菌(App)菌影的检测效率,试验通过形态学鉴定、电镜扫描、PCR鉴定和间接ELISA法对App及其菌影进行检测。结果表明:PCR检测方法特异性显著,可检测AppⅠ、pMC-WK AppⅠ及其裂解情况,具有准确、灵敏、容易操作等优点。说明将菌影的形态学检查、电镜扫描、PCR和血清学检测相结合,可准确检验试验中不同阶段的App及其菌影。
- 魏延宏徐良李媛孙颖刘颖孙铭君宋桂敏金天明
- 关键词：间接ELISA
- App菌影温控双基因裂解系统的构建
- 猪传染性胸膜肺炎是严重危害现代化养猪业的三大呼吸道疾病之一.免疫猪仍可呈带菌状态或慢性感染.研究发现菌影疫苗可有效抵御App定殖,所得抗体可与来自不同血清型菌株的抗原起反应,是一种非常具开发潜力的疫苗形式.本试验通过将裂...
- 孙颖金天明
- 文献传递
- 利用双基因裂解系统制备大肠杆菌菌影的裂解效果评价被引量：2
- 2013年
- 为了比较两种裂解系统对大肠杆菌菌影的裂解差异,试验以利用双基因裂解系统制备的pBV220 DH5α、pBV-E DH5α、pBV-E-15aalinker-SN DH5α为研究对象,以pBV220 DH5α转化菌为阴性对照,并用分光光度法检测高温诱导裂解后的活细菌数。结果表明:经42℃升温诱导后菌体发生裂解,基因E-15aalinker-SN的裂解效率优于裂解基因E;在裂解过程中,Ca2+和Mg2+的添加对E蛋白的裂解作用产生干扰,诱导90 min后加入二价阳离子可以减轻干扰作用,但未见二价阳离子对于菌影形成具有促进作用。
- 徐良李媛魏延宏孙颖金天明
- 关键词：大肠杆菌
- 菌影及其递送载体的研究与应用被引量：1
- 2009年
- 介绍了菌影制备、裂解效果测定与装载的方法和菌影的作用,阐述了菌影及其导向系统的应用前景。
- 孙颖金天明
- 关键词：疫苗
