上海市科学技术发展基金(994119016)
- 作品数：14 被引量：121H指数：7
- 相关作者：王兴鹏董育玮谢传高吴丽颖张汝玲更多>>
- 相关机构：上海市第一人民医院浙江大学医学院附属第二医院上海交通大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- COX-2反义寡核苷酸对胰腺癌PC-3细胞株COX-2 mRNA和蛋白表达的影响被引量：9
- 2004年
- 目的 探讨环氧合酶 (COX) 2反义寡核苷酸 (ODNs)对胰腺癌PC 3细胞株COX 2mRNA和蛋白表达的影响 ,并进一步阐明COX 2反义ODNs基因治疗胰腺癌的可行性。方法 设计和合成COX 2反义ODNs,体外转染胰腺癌PC 3细胞 ,然后通过荧光显微镜、RT PCR及Westernblotting证实转染效果。结果 转染COX 2反义ODNs后 ,PC 3细胞COX 2mRNA和蛋白表达均下降 ,且体现出一定的剂量和时间依赖性关系。结论 COX 2反义ODNs转染胰腺癌PC 3细胞株后 ,可下调细胞中COX 2mRNA和蛋白表达 ,COX 2反义ODNs有可能达到胰腺癌基因治疗的效果。
- 谢传高王兴鹏杜勤蔡建庭钱可大
- 关键词：胰腺癌PC-3细胞株COX-2MRNA蛋白基因治疗
- 过氧化物酶增殖物活化受体-γ在胰腺癌新生血管生成中的调节作用及其可能机制被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨过氧化物酶增殖物活化受体 γ(PPAR γ)对胰腺癌血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的调节作用 ,以及对胰腺癌新生血管生成的抑制作用 ,旨在进一步揭示PPAR γ抑制胰腺癌生长的机制。方法 体外培养胰腺癌细胞株SW 1990 ,给予PPAR γ配体 15 脱氧 前列腺素J2 (15d PGJ2 )及维甲类受体 (RXR)α配体 9 顺式 维甲酸 (9 cis RA) ,经不同浓度及不同时间作用后 ,用RT PCR方法检测其对SW 1990细胞VEGF表达的调节作用。建立裸鼠SW 1990细胞移植瘤 ,分为对照组和罗格列酮组各 15只 ,将罗格列酮配成 10 μmol·kg-1·d-1予治疗组饮用。采用半定量RT PCR方法检测PPAR γ激动剂罗格列酮对裸鼠移植瘤组织VEGF表达的影响。应用免疫组化染色标记移植瘤新生血管壁Ⅳ型胶原 ,计算肿瘤组织微血管密度 (MVD)。结果 RT PCR及免疫细胞化学结果显示SW 1990细胞系存在PPAR γmRNA和蛋白的表达。RT PCR揭示 ,随着 15d PGJ2 、9 cis RA及其联合作用浓度的提高以及作用时间的延长 ,SW 1990细胞分泌的VEGF受到抑制 ,且呈时间和剂量依赖性。在裸鼠移植瘤的体内实验中 ,对照组肿瘤组织MVD为 31.4 4± 6 .0 6 ,罗格列酮处理组为 10 .6 7± 3.0 7,两组间差异有显著性 (P <0 .0 1)。半定量RT
- 董育玮王兴鹏吴恺吴丽颖张汝玲
- 关键词：胰腺癌新生血管血管生成
- 前列腺素E_2在环氧合酶-2促胰腺癌新生血管生成中的介导作用被引量：7
- 2003年
- 目的 探讨环氧合酶 2 (COX 2 )促进胰腺癌新生血管生成过程中前列腺素E2 (PGE2 )的介导作用 ,进一步揭示COX 2促进胰腺癌生长的机制。方法 体外培养胰腺癌细胞株PC 3,分别应用酶联免疫吸附 (ELISA)和放射免疫 (RIA)等方法 ,检测选择性COX 2抑制剂Celebrex对胰腺癌PC 3细胞血管内皮生长因子 (VEGF)和PGE2 表达的调节作用 ,并观察外源性PGE2 对Celebrex调节VEGF表达的干预。建立裸鼠PC 3细胞移植瘤 ,Western印迹检测Celebrex对胰腺癌组织VEGF表达的影响 ,RIA测定Celebrex对胰腺癌组织PGE2 变化的调节。结果 随着Celebrex作用浓度的提高以及作用时间的延长 ,PC 3细胞分泌的VEGF和PGE2 受到抑制 ,呈时间和剂量依赖性。外源性PGE2 显著上调Cele brex作用后PC 3细胞VEGF蛋白表达 ,呈剂量依赖性 ,体内实验表明 ,Celebrex可显著抑制移植瘤组织VEGF和PGE2 的表达。结论 COX 2参与了PC 3细胞VEGF分泌的调节 ,进而促进胰腺癌新生血管形成 ,而PGE2 则在该过程中起着重要的介导作用。
- 王兴鹏谢传高董育玮张汝玲吴丽颖吴凯
- 关键词：前列腺素E2环氧合酶-2胰腺癌血管生成介导作用
- 过氧化物酶增殖物活化受体γ活化对胰腺癌细胞凋亡的诱导作用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ)在诱导胰腺癌细胞凋亡中的调节作用。方法胰腺癌细胞系SW1990经10μmol/L PPARγ配体15-脱氧-前列腺素J2(15d-PGJ2)、20μmol/L维甲酸受体α(RXRα)配体9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)及其两者联合作用培养48 h后,应用电子显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞仪研究细胞凋亡比例的变化。30只雌性裸鼠皮下接种1×107个SW1990细胞,2周后待肿瘤可触及时,将其随机分为对照组和治疗组(予罗格列酮)。11周后处死裸鼠并取下移植瘤,采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的生物素缺口末端标记法(TUNEL)评估移植瘤中凋亡细胞的情况,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2凋亡相关基因家族成员bcl-2、bcl-xl、bak、bax以及凋亡抑制基因Survivin的表达。结果电子显微镜结果显示15d-PGJ2、9-cis-RA及其两者联合作用均可导致SW1990细胞发生形态学变化。可见细胞核和胞质内容物密集皱缩,核内染色质凝集成块并边集,形成1个或数个沿核膜的月芽小体。在联合应用组中还可观察到凋亡小体的存在。流式细胞术检测提示对照组凋亡比率为0.95%,15d-PGJ2、9-cis-RA及其联合应用可引起SW1990细胞凋亡比率增加,15d-PGJ2组为8.05%,9-cis-RA组为8.36%,联合作用组为6.86%。TUNEL染色显示治疗组移植瘤组织中凋亡指数(AI)为15.25±4.57,明显高于对照组的6.25±2.62(P<0.05)。RT-PCR揭示在SW1990移植瘤中,促凋亡基因bak、bax表达上调,抗凋亡基因bcl-xl、Suvivin下调,抗凋亡基因bcl-2几乎不表达。结论PPARγ的活化可诱导SW1990胰腺癌细胞凋亡。其机制可能是通过上调促凋亡基因bak、bax及下调抗凋亡基因bcl-xl、Suvivin表达而实现的。
- 董育玮王兴鹏吴恺张汝玲吴丽颖
- 关键词：PPARΓ凋亡胰腺癌
- 过氧化物酶体增殖因子活化受体γ在胰腺癌中的表达及其意义被引量：11
- 2002年
- 目的 研究过氧化物酶体增殖因子活化受体 (PPAR)在胰腺癌中的表达 ,探讨其可能意义。方法 分别应用免疫组织 (细胞 )化学和逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)检测正常胰腺组织、2 4例胰腺癌组织和胰腺癌细胞株PC 3及PANC 1中PPARα、δ、γ表达。结果 RT PCR显示正常胰腺组织PPAR各亚型mRNA均无表达 ,而胰腺癌组织和胰腺癌细胞株PPARγmRNA高表达 ,PPARα和PPARδmRNA则无表达。免疫组织 (细胞 )化学显示胰腺癌组织及细胞株PPAR(呈高表达 ,在胰腺癌组织表达总阳性率为 79.1 7%。结论 本文初步观察到核内受体PPARγ在人胰腺癌组织及人胰腺癌细胞株中表达上调。
- 王兴鹏徐选福王冰娴吴凯谢传高董育玮
- 关键词：过氧化物酶体增殖因子活化受体Γ胰腺癌基因表达
- 显性失活IκBα质粒对胰腺癌PC-3细胞株核因子-κB和环氧合酶-2表达的影响被引量：2
- 2005年
- 目的:观察显性失活IκBα质粒转染胰腺癌PC-3细胞株后,对细胞核因子-κB(NF-κB)和环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法:免疫组织化学证实NF-κB和COX-2在胰腺癌PC-3细胞株中的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)检测PC-3细胞转染显性失活IκBα质粒后,细胞中NF-κB和COX-2表达的变化。结果:胰腺癌PC-3细胞株中存在NF-κB和COX-2的表达,转染显性失活IκBα质粒后,细胞中NF-κB和COX-2表达均下调,且体现出一定的时间依赖性关系。结论:胰腺癌PC-3细胞株中存在NF-κB和COX-2的阳性表达。显性失活的IκBα质粒可抑制细胞中NF-κB和COX-2的表达。
- 谢传高魏树梅徐选福王兴鹏
- 关键词：质粒环氧合酶-2
- 选择性环氧合酶2-抑制剂Celebrex对胰腺癌新生血管生成的影响被引量：5
- 2004年
- 探讨选择性环氧合酶 2 (COX 2 )抑制剂Celebrex对裸鼠胰腺癌PC 3细胞移植瘤生长和肿瘤组织新生血管生成的影响 ,为Celebrex的临床应用提供依据。本文采用体外观测Celebrex对移植瘤生长的影响 ,并选用Ⅳ型胶原作为肿瘤微血管标记物 ,测定移植瘤中微血管密度 (MVD)。结果显示 ,治疗组移植瘤生长曲线较对照组明显低平 ,对照组移植瘤近似体积为 0 4 38cm3 ,治疗组为 0 2 12cm3 (抑瘤率为 5 1 6 % ,P <0 0 5 )。对照组肿瘤组织MVD为 6 3 87± 13 6 7,治疗组 32 2 5± 12 99,两组间差异有非常显著性 (P <0 0 1)。表明COX 2可能参与了肿瘤新生血管的生成 ,选择性COX 2抑制剂Celebrex则具有抑制肿瘤生长和对抗肿瘤新生血管生成的作用。
- 谢传高王兴鹏徐选福蔡建庭钱可大
- 关键词：移植瘤新生血管生成胰腺癌选择性环氧合酶-2抑制剂
- 环氧合酶2对胰腺癌新生血管生成的调节作用及其机制被引量：26
- 2002年
- 目的 探讨环氧合酶 2 (COX 2 )在胰腺癌新生血管生成中的调节作用及其作用机制。方法 应用免疫组织化学染色研究人胰腺癌组织COX 2、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达 ;同时标记肿瘤新生血管内皮细胞vWF和血管壁Ⅳ型胶原 ,计算肿瘤组织微血管密度 (MVD)。建立裸鼠胰腺癌细胞株PC 3移植瘤 ,观察选择性COX 2抑制剂Celebrex对肿瘤组织MVD的影响 ,并应用免疫组织化学染色和逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)研究裸鼠移植瘤组织VEGF表达变化。结果 COX 2在人胰腺癌组织中表达阳性率为 87 5 % ,VEGF阳性率为 5 8 3%。COX 2强阳性组MVD平均值显著高于COX 2弱阳性 +阴性组 ,P <0 0 1。VEGF阳性组MVD平均值高于VEGF阴性组 ,但无统计学差异 ,P >0 0 5 ;Pearson相关性检验结果表明COX 2与vWF和Ⅳ胶原标记的MVD均有明显的相关性 (相关系数分别为 0 5 99和 0 6 ) ,P <0 0 5。在裸鼠移植瘤的体内实验中 ,与对照组MVD(6 3 89± 13 6 7)相比 ,Celebrex处理组MVD为 32 2 5± 12 99,两者差异显著 ,P <0 0 1。免疫组织化学染色和RT PCR结果表明Celebrex处理组肿瘤组织VEGF表达较对照组明显下调。结论 COX 2与胰腺癌新生血管生成密切相关 ,其高表达促进了胰腺癌新生血管生成 ;
- 王兴鹏徐选福谢传高王冰娴吴凯董育玮吴丽颖张汝玲
- 关键词：胰腺癌胰腺肿瘤环氧合酶2免疫组织化学新生血管生成血管内皮细胞生长因子
- 过氧化物酶增殖物活化受体γ在胰腺癌生长中的调节作用被引量：9
- 2003年
- 目的 探讨过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ)在人胰腺癌生长中的调节作用。方法 应用逆转录 (RT) PCR检测胰腺癌细胞系SW 1990中PPARγ和维甲酸受体α(RXRα)的表达。培养细胞经PPARγ配体 15 脱氧 前列腺素J2 (15d PGJ2 )及RXRα配体 9 顺式 维甲酸 (9 cis RA)作用后 ,用四唑氮蓝还原法测定细胞活力 ,并评价药物的抗增殖效果。建立裸鼠胰腺癌移植瘤模型 ,并予以PPARγ激动剂罗格列酮体内干预 ,75d后处死裸鼠 ,测量移植瘤的大小 ,计算抑瘤率。应用免疫组化观察移植瘤组织中增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达。结果 RT PCR结果显示SW1990细胞系存在PPARγ和RXRαmRNA表达。 15d PGJ2 和 9 cis RA及其联合应用对胰腺癌细胞的增殖具有抑制作用 ,且作用呈剂量依赖性。 9 cis RA对 15d PGJ2 抑制胰腺癌细胞增殖具有协同效应。罗格列酮治疗组裸鼠移植瘤的平均体积和重量均显著低于对照组 ,抑瘤率达 80 7%。免疫组化显示治疗组和对照组移植瘤组织中均表达PCNA ,但治疗组的阳性表达强度和表达区域均呈下降趋势。结论 PPARγ的活化在体内外均对胰腺癌的生长呈负向调节作用 ,提示PPARγ可能是胰腺癌治疗的一个新分子靶点。RXRα的激活可协同增强PPARγ激动剂的抗增殖作用。
- 董育玮王兴鹏吴恺吴丽颖张汝玲
- 关键词：胰腺癌RT-PCR维甲酸受体Α细胞增殖免疫组织化学
- 环氧合酶2反义寡核苷酸对胰腺癌新生血管生成的抑制作用被引量：6
- 2003年
- 目的 研究环氧合酶 2反义寡核苷酸 (COX 2AS ODN)对胰腺癌新生血管生成的抑制作用 ,探讨前列腺素E2 (PGE2 )在胰腺癌新生血管生成中的调节作用。方法 设计、合成特异性靶向COX 2AS ODN。人胰腺癌PC 3细胞进行体外培养 ,转染COX 2AS ODN后 0、12、2 4、4 0、和 72h以荧光显微镜观察细胞情况。第二批PC 3细胞用于研究量 效关系 ,分为 5组 :对照组、Lipo组 (接种Lopofectin脂质体 )、C1组 ( 1μgCOX 2AS ODN +Lipo/孔 )、C2组 ( 2 μgCOX 2AS ODN +Lipo/孔 )、和C3组 ( 3μgCOX 2AS ODN +Lipo/孔 )。第三批PC 3细胞用于研究时 效关系 ,接种 3μgCOX 2AS ODN +Lipo/孔后观察 0、12、2 4、4 8、和 72h。用RT PCR观察COX 2mRNA的表达。以Western印迹观察分别加入 3μg和 9μgCOX 2AS ODN/瓶后PC 3细胞COX 2蛋白质的表达。 18只鸡胚分 3组 ,其绒毛尿囊 (CAM )分别接种PC 3细胞以及Lipo、Lipo +COX 2AS ODN、Lipo +COX 2AS ODN +前列腺素E2 (PGE2 ) ,另 6只鸡胚仅接种PC3细胞用作对照。用Leica体视显微镜观察新生血管生成情况。结果 RT PCR示随转染COX 2AS ODN浓度的增加 ,PC3细胞的COX 2mRNA表达逐渐下调 (直到COX 2AS ODN浓度为 0 .2 μmol/L时 )。COX 2AS ODN的作用于 12h后最强 ,以后渐弱 ,4 8h后基本?
- 王兴鹏谢传高董育玮张汝玲吴丽颖吴凯
- 关键词：胰腺癌新生血管生成
