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上海市卫生局科研基金(2007178)
作品数:
2
被引量:1
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相关作者:
梅建
陆晔
胡衡
沈鑫
武洁
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相关机构:
上海市疾病预防控制中心
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2011
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结核分枝杆菌异烟肼耐药株和敏感株亚细胞蛋白质组差异研究
被引量:1
2011年
目的研究结核分枝杆菌异烟肼耐药株和敏感株亚细胞蛋白质组差异,鉴定菌体细胞壁蛋白和细胞膜蛋白中与异烟肼耐药相关的蛋白,并初步探讨其在临床检验中的应用价值。方法应用密度梯度离心法分离5株异烟肼耐药株和5株敏感株的细胞壁和细胞膜蛋白,利用二维液相色谱分离技术进一步获得耐药株和敏感株的亚细胞蛋白表达差异图谱。运用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱技术对获得的1280个细胞壁和细胞膜组分进行质谱鉴定,并运用DAVID数据库中GO注释功能对鉴定到的蛋白进行细胞成分和生物过程的注释和分类。运用NASF技术对蛋白表达进行定量,报告阈值为1.5。选取5个在耐药株中表达上调、2个在敏感株中表达上调的蛋白分别与菌株来源患者的血清进行ELISA检测,检测上述组分与血清样品发生免疫应答的强度,组问比较采用t检验。结果共鉴定到347个蛋白。蛋白定位分析表明58%蛋白定位于细胞膜或跨膜。蛋白功能聚类分析表明31%蛋白参与三羧酸循环,26%、15%蛋白分别参与脂类、脂肪酸生物合成和代谢,28%蛋白参与脂质体的生物合成、代谢、转运和定位。其中琥珀酰氯化胆碱合酶、单加氧酶、假想蛋白Rv2255c、烟碱核苷二甲基联苯酰磷酸核酮糖激酶、膜磷脂胞嘧啶转移酶在耐药株中表达上调,含有上述蛋白的组分与感染耐药株患者的血清免疫学反应的吸光度(A450值)明显高于与感染敏感株患者的血清免疫学反应强度,差异有统计学意义(t值分别为0.028、0.044、0.066、0.064、0.083,P均〈0.01)。Rv2002蛋白A链、Rv2632e蛋白A链在敏感株中表达上调,含有上述蛋白的组分与感染敏感株患者的血清免疫学反应的A柏。值明显高于与感染耐药株患者的血清免疫学反应强度,差异有统计学意义(t值分别为0.053、0.073,P均�
陆晔
林成招
胡衡
梅建
武洁
沈鑫
关键词:
结核分枝杆菌
异烟肼耐药
亚细胞蛋白质组
人结核分枝杆菌和牛结核分枝杆菌差异蛋白质组学的研究
2011年
目的探讨人MTB标准株H37Rv与牛分枝杆菌标准株卡介苗株的亚细胞蛋白质组学差异。方法应用密度梯度离心法分离H37Rv和卡介苗株的细胞壁、细胞膜和细胞质蛋白,利用二维液相色谱分离技术进一步获得H37Rv和卡介苗株亚细胞蛋白质组,采用酶联免疫吸附试验分别检测H37Rv和卡介苗各组分与结核病患者和健康人各5例血清的免疫学反应。组间比较采用t检验。结果共获得26个特异性引发免疫反应的H37Rv菌株蛋白组分。细胞膜组分M3Frl8与结核病患者的血清免疫学反应的吸收光度(A450值)为(721±3)×10^-3,明显高于健康人[(356±6)×10-3],也明显高于卡介苗株细胞膜相应组分与健康人的血清免疫学反应强度[(414±7)×10-3],差异均有统计学意义(t值分别为1.852和1.037,均P〈0.01)。细胞膜组分MIOFr21与结核病患者的血清免疫学反应的A450值为(954±6)×10-3,明显高于健康人[(415±6)×10-3],也明显高于卡介苗株细胞膜相应组分与健康人的血清免疫学反应强度[(315±4)×10-3],差异均有统计学意义(t值分别为2.113和2.550,均P〈0.01)。结论二维液相色谱和酶联免疫吸附试验联合应用,有助于检测人MTB感染的相关抗原蛋白。M3Frl8和M10Fr21蛋白质组分可引起结核病患者的特异性免疫反应,提示其可能是人MTB感染的特异抗原。
陆晔
梅建
胡衡
罗继
武洁
沈鑫
桂晓红
关键词:
分枝杆菌
结核
蛋白质组学
色谱法
酶联免疫吸附测定
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