卫生部科学研究基金(WKJ2007-2-024)
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 相关作者：段广才郗园林张卫东朱静媛宋春花更多>>
- 相关机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 志贺菌耐多药相关基因水平转移的验证及其耐药性研究被引量：1
- 2010年
- 目的对志贺菌耐多药相关基因(T1C4)水平转移进行验证,并对其与细菌耐药性的关系进行初步判定。方法培养已筛选出的包含T1C4基因片段的阳性克隆,提取其质粒,PCR扩增T1C4基因片段、纯化、制备探针,与志贺菌敏感株SS23、志贺菌耐多药转移株(ST11)、大肠埃希菌耐多药株(E667)的基因组DNA和质粒DNA进行斑点杂交。采用药敏纸片法研究含T1C4基因片段大肠埃希菌的耐药性。结果应用PCR方法可以从ST11和E667菌株基因组DNA中扩增出T1C4基因片段,而SS23菌株不含该基因片段;应用T1C4基因探针进行斑点杂交显示,ST11和E667菌株的全基因组和质粒DNA均可显示杂交信号,而SS23菌株的基因组和质粒DNA均不产生杂交信号;14种药物的药敏试验表明,含有T1C4基因的大肠埃希菌(DH5α)对四环素、先锋V、头孢噻吩、氟哌酸、复方新诺明等五种药物的抑菌环直径明显小于(相差3mm以上)不含T1C4基因的DH5α菌株。结论 T1C4基因片段为ST11菌株从E667菌株获得,且存在于两菌株的质粒上;T1C4基因可能介导细菌对多种药物的抗性。
- 王淑玲宋春花段广才张卫东郗园林朱静媛
- 关键词：志贺菌耐多药基因水平转移
- 志贺菌主动外排泵调控基因marOR突变与泵表达水平的关系被引量：2
- 2010年
- 目的了解临床分离志贺菌调控基因marOR的突变情况，并探讨其与主动外排泵表达水平的关系。方法对100株临床分离志贺菌和本实验室筛选的敏感菌及标准株的marOR基因进行聚合酶链反应（PCR），对扩增产物进行限制性内切酶酶切与单链构象多态性（SSCP）分析，对marOR基因突变株进行测序，利用RT-PCR测定其泵基因acrA、acrB和tolC的表达水平，并对其进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、诺氟沙星、复方新诺明等6种药物的药敏试验。结果100株临床分离志贺菌、敏感株及标准株均扩增出marOR基因，未发现该基因缺失株；SSCP分析发现marOR基因的突变率为23％；随机选择11株marOR基因突变株和1株敏感株及标准株进行测序，其中有9株存在4个碱基的缺失和3个位点的碱基突变，RT-PCR分析表明11株marOR基因突变株的acrAB—tolC主动外排泵表达水平高于敏感株和标准株，且该11株均为多重耐药株。结论在该实验中志贺菌marOR基因突变率较高，其突变株的acrAB—tolC主动外排泵基因高表达，可能增加耐多药性。
- 任静朝段广才宋春花吕锐利张卫东郗园林
- 关键词：志贺菌
- 志贺菌属非典型1类整合子与耐多药关系被引量：2
- 2011年
- 目的研究志贺菌属中非典型1类整合子的分布及其与耐多药性的关系。方法对实验室保存的90株志贺菌属进行8种抗生素药敏实验,针对非典型1类整合子的耐药基因盒区域设计引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增和限制性片段长度多态性(RFLP)分析,对代表性菌株进行测序分析。结果 90株志贺菌属中有86株(95.6%)对≥3种抗生素耐药;有66株(73.3%)对氨苄青霉素(AMP)、四环素(TET)和氯霉素(CHL)联合耐药;非典型1类整合子分布于65株(72.2%)志贺菌属中;RFLP分析结果表明,所有酶切产物的带型均一,测序分析发现序列为blaoxa-30-aadA1;非典型1类整合子阳性菌株对AMP-TET-CHL联合耐药率(81.5%)高于阴性菌株(52.0%),经双侧χ2检验发现差异有统计学意义(P<0.05)。结论志贺菌属非典型1类整合子阳性与其对AMP-TET-CHL联合耐药有关,可能参与耐多药性的形成。
- 朱静媛段广才范清堂郗园林
- 关键词：志贺菌属耐多药
- 志贺菌属整合子的耐药贡献与稳定性研究被引量：1
- 2011年
- 目的分析志贺菌属整合子对耐药性的贡献及其稳定性。方法对志贺菌属1类、2类整合子的耐药基因盒分别克隆、转化DH5α,观察阳性克隆菌对多种抗生素敏感性的变化。将整合子阳性克隆菌与多重耐药志贺菌进行质粒接合实验,并测定耐药性的改变。对10株耐药谱不同、携带整合子不同的志贺菌属细菌进行无抗生素压力下连续多次传代实验,检测其耐药性及整合子的变化。结果志贺菌属1类整合子耐药基因盒dfrA17-aadA5阳性克隆菌对链霉素和甲氧苄啶的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)分别提高了8倍和32倍;2类整合子耐药基因盒dfrA1-sat1-aadA1阳性克隆菌对链霉素和甲氧苄啶的MIC分别提高了64倍和32倍;整合子阳性克隆菌经质粒接合传递后对抗生素的MIC无改变。1株携带2类整合子的志贺菌属菌株经过多次传代培养后丢失整合子及其耐药性。结论志贺菌属整合子-耐药基因盒系统可引起特定抗生素的耐药性,对质粒接合传递耐药性无影响。志贺菌属的2类整合子可发生丢失。
- 朱静媛段广才范清堂郗园林
- 关键词：志贺菌属整合子克隆耐药性
- 志贺菌诱导耐药相关基因序列分析
- 2010年
- 目的获取并分析志贺菌由抗生素诱导产生的耐多药相关基因序列。方法以志贺菌敏感株(Z23)和诱导株(YD)基因组DNA为模板,利用引物设计软件Primer 5.0根据已测得基因序列(Y16B3、Y16B8和Y16A11)设计引物,PCR扩增诱导耐多药相关基因并将相关基因克隆到pMD19-T载体上,测序并将结果在序列相似性搜索工具Blast上检索分析相关基因序列。结果Y16B3和Y16B8基因片段分别在诱导株中扩增出320和225 bp产物,在敏感株中未扩增出;而Y16A11基因片段在诱导株扩增出310 bp产物,在敏感株中扩增出554 bp产物,并且产物序列同源性极低。结论志贺菌在抗生素诱导下产生的耐多药株与敏感菌株比较,具有基因组差异。
- 朱雪冰段广才宋春花张卫东郗园林
- 关键词：志贺菌耐多药相关基因
- 志贺菌主动外排泵调控基因marOR突变与耐药的关系
- 2010年
- 目的 探讨临床分离志贺菌调控基因marOR的突变对细菌耐药性的影响.方法 利用重叠延伸PCR扩增4个碱基缺失的marOR基因,与T载体连接后转入DH5α,得到4个碱基缺失的marOR基因克隆株 4个碱基缺失联合3个点突变的marOR基因克隆株是扩增具有该突变菌株的marOR基因,然后与T载体连接后转入DH5α所得 通过凝胶电泳图谱和核酸序列分析证实克隆成功与否 检测DH5α、转入T载体后的DH5α[DH5α（T）]、完整marOR基因克隆株[DH5α（marOR）]、4个碱基缺失的marOR基因克隆株[DH5α（marOR-ACTT）]及4个碱基缺失联合3个点突变的marOR基因克隆株[DH5α（marOR-CATT＋3m）]对多种抗生素的耐药性,并进行比较.结果 按抑菌环直径相差5 mm以上为抗生素耐药性有差别：与DH5α（T）比较,DH5α（marOR-ACTT）对链霉素、妥布霉素、先锋V、头孢氨苄的耐药性增加,DH5α（marOR-ACTT＋3m）对链霉素和四环素的耐药性增加 与DH5α（marOR）比较,DH5α（marOR-ACTT）和DH5α（marOR-ACTT＋3m）对链霉素、四环素、氯霉素、先锋V、左氟沙星、环丙沙星和氟哌酸的耐药性增加 DH5o（marOR-CATT）与DH5α（marOR-CATT＋3m）相比对除甲氧苄啶外的试验所用抗生素的抑菌环直径无明显差异.结论 marOR基因第1376～1379处的4个碱基缺失,使志贺菌对部分抗生素的耐药性增加 marOR基因第1411、1417、1435处的点突变对志贺菌的耐药性的影响较小.
- 任静朝段广才杨海燕吕锐利张卫东郗园林
- 关键词：志贺菌耐药性
