陕西省自然科学基金(2006C248)
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 相关作者：张磊邵晨闫永平邵中军张景霞更多>>
- 相关机构：第四军医大学第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙肝病毒标志物阳性血清感染胎盘滋养层细胞的体外研究被引量：4
- 2007年
- 目的提供血清中的HBV病毒能进入体外培养的滋养层细胞(HPT-8)的依据。方法用HBV阳性血清体外感染HPT-848h,设感染组和对照组。ELSIA检测细胞培养上清中HBsAg、HBeAg,PCR检测细胞培养上清和细胞中HBVDNA,细胞免疫组织化学法检测细胞中HBsAg、HBcAg,免疫荧光定量PCR检测细胞培养上清中HBVDNA的含量。结果ELISA检测PBS洗8次后第1、2代感染细胞的培养上清的HBsAg、HBeAg均呈阳性;PCR在感染细胞第1、2代的培养上清中检测到HBVDNA特异的片断;第1、2代感染细胞中检测出了rcDNA,第1代感染细胞中检测出了cccDNA;免疫组化检测感染组第2代细胞中HBsAg阳性;荧光定量PCR检测感染细胞第1、2代培养上清中HBVDNA的滴度分别为8×104拷贝/ml和4.6×103拷贝/ml,第3代<103拷贝/ml。结论血清中的HBV病毒能进入HPT-8,但在HPT-8内很难复制、繁殖。
- 张磊邵晨王安辉门可张景霞邵中军闫永平徐德忠许文娟
- 关键词：肝炎病毒乙型滋养层胎盘
- 胶体金探针对HBV全基因转染滋养细胞中HBsAg的示踪研究
- 2010年
- 目的通过胶体金探针标记乙肝病毒(HBV)全基因转染的人胎盘滋养细胞(HPT-8-HBV),示踪乙肝表面抗原(HBsAg)在HPT-8-HBV细胞中的分布。方法通过脂质体介导的方法将HBV全基因转染HPT-8细胞,G418筛选,通过ELISA、免疫组化对转染细胞进行检测;采用胶体金标记的HBsAg单克隆抗体作为探针(简称胶体金探针)对转染细胞中的HBsAg进行标记示踪。结果成功将质粒pcDNA3-3HBV转染到HPT-8,转染后第1、2代培养上清ELISA检测显示HBsAg阳性,免疫组化检测第2代转染细胞中HBsAg阳性;通过胶体金探针标记发现HBsAg存在于转染滋养细胞中的粗面内质网、分泌泡、空泡和溶酶体内,以及细胞膜和绒毛上。结论可以从重组质粒pcDNA3-3HBV转染的滋养细胞的树脂切片中获得HBsAg的超微结构定位。
- 张磊邵晨邵中军张景霞卢娟门可闫永平徐德忠
- 关键词：乙型滋养细胞转染
- HBsAb标记胶体金探针对HBV阳性血清感染HPT-8细胞的示踪研究被引量：1
- 2007年
- 目的：为临床诊断提供HBV进入HPT-8的依据。方法：HBV阳性血清（1．5×10^8拷贝／毫升）体外感染HPT-8细胞48h，设感染组、阴性对照组和空白对照组，ELISA检测细胞培养上清中HBsAg、HBeAg，提取感染后传代的各代细胞中DNA用于PCR检测HBVDNA。免疫荧光定量PCR检测细胞培养上清中HBVDNA的滴度。采用乙肝表面抗原单克隆抗体标记的胶体金探针对感染的HPT-8细胞中的乙肝表面抗原进行标记示踪。结果：ELISA检测感染组细胞第1、2代培养上清中HBsAg阳性，PCR检测感染组第1、2代细胞HBVDNA，结果均阳性。免疫荧光定量PCR检测感染组细胞上清在第1、2代、3代48h的HBV滴度分别为8×10^4、4．6×10^3〈10^3（拷贝／毫升）。通过胶体金探针的标记：乙肝表面抗原存在于感染细胞的溶酶体内、细胞膜和绒毛上。结论：血清中的HBV病毒能进入胎盘滋养细胞，并可从感染滋养细胞的树脂切片中获得乙肝表面抗原的超微结构定位。
- 张磊邵晨邵中军张景霞王安辉门可闫永平徐德忠卢娟
- 关键词：乙型肝炎病毒滋养细胞胶体金探针
- Adr亚型HBV转染人胎盘滋养层细胞株的体外研究被引量：1
- 2008年
- 目的通过转染adr亚型HBV-DNA,建立可复制HBV的人胎盘滋养层细胞(HPT-8)。方法采用脂质体介导的方法将重组真核表达质粒pcDNA3-3HBV转染人胎盘滋养层细胞,经G418筛选,通过ELISA、免疫组化、PCR等方法对转染细胞和培养上清分别进行检测。结果HPT-8细胞稳定转染质粒pcDNA3-3HBV后,第1、2代转染细胞的培养上清ELISA检测显示HBsAg、HBeAg阳性,免疫组化检测显示转染细胞胞浆中HBsAg、HBcAg呈阳性信号,PCR检测培养上清中HBV-DNA呈阳性,荧光定量PCR检测其滴度达9×106拷贝/L,并且转染滋养细胞中有HBV-rcDNA和HBV-cccDNA存在。结论重组质粒pcDNA3-3HBV能在人滋养层细胞中表达、转录、复制。
- 张磊邵晨赵艳芳张景霞马向东邵中军门可闫永平徐德忠
- 关键词：肝炎病毒乙型滋养层细胞ADR亚型
- 乙肝研究的历史回顾及其哲学思考被引量：1
- 2007年
- 乙型肝炎的研究可以分为病因学、感染传播机制和防治三部分,涵盖了流行病学、传染病学、生物化学、病理学、分子生物学等多种学科。随着现代科学技术的快速发展和进步,过去十年我们才对乙型肝炎进行了科学、系统的研究。本文主要回顾了乙型肝炎的研究史,我们发现正确的研究方法和科学思路在揭示乙型肝炎发病机制、病毒感染传播、乙型肝炎预防和治疗中起到了关键的作用。客观辨证地分析单个机体内部、周围环境和人群间的关系、人群研究和实验室研究、基础研究和临床研究、传统方法和现代高科技的有机结合、微观研究和宏观研究相结合,是乙型肝炎研究突破的重要环节。
- 邵虹张磊邵晨许文娟
- 关键词：乙型肝炎流行病学哲学
- HBsAg Mab胶体金探针制备与鉴定的实验研究被引量：9
- 2007年
- 目的:研制合格的乙肝表面抗原单克隆抗体(HBsAg Mab)标记的胶体金探针。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备15nm的胶体金;所制备的胶体金通过透射电镜和紫外分光计度计鉴定其大小和均匀度。通过CVAI曲线,确定胶体金标记HBsAg Mab蛋白用量;采用斑点免疫吸附试验对探针进行鉴定。结果:制备的15nm胶体金颗粒均匀;紫外分光光度计400-700nm扫描结果最大吸收波长为518nm,峰宽较窄;纯化的HBsAg Mab浓度为65mg/mL;在PH为8．2时,每毫升胶体金的蛋白最适保护量为32．5μg;采用斑点免疫吸附试验鉴定探针质量合格,可保存3个月。结论:制备的HBsAg Mab胶体金探针质量合格,为进一步研究提供手段。
- 张磊邵晨邵中军张景霞门可闫永平徐德忠许文娟
- 关键词：乙肝表面抗原单克隆抗体胶体金
