国家自然科学基金(30670521)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 真核表达载体pEGFP-N2/AT2R的构建及其在原代血管平滑肌细胞的表达
- 2011年
- 目的体外构建携带血管紧张素Ⅱ2型受体(ANGⅡType 2 Receptor,AT2R)基因的增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,并观察其在大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中的表达。方法以pUHD-10.3/AT2R质粒为模板,PCR扩增AT2R基因的全长cDNA序列,再将其克隆入载体pEGFP-N2,构建其真核表达载体pEGFP-N2/AT2R。以基因转染技术,将AT2R导入原代VSMCs。倒置荧光显微镜观测转染后VSMCs生长变化及AT2R在其中的表达等情况。图像分析技术检测AT2R在VSMCs中的转染效率。Western blot检测转染AT2R基因的VSMCs表达其编码蛋白。RT-PCR法对AT2R基因修饰的VSMCs进行鉴定。结果成功构建AT2R基因的真核表达载体pEGFP-N2/AT2R,该真核载体能携带AT2R基因转染并有效表达于VSMCs,其转染效率约40%,RT-PCR及Western blot均可检测到AT2RmRNA及蛋白在血管平滑肌细胞中高表达。结论成功地将克隆到的AT2R基因克隆入pEGFP-N2载体中,并实现了AT2R基因在原代VSMCs的表达。
- 左玉梅王媛刘建平
- 关键词：克隆绿色荧光蛋白
- AT2R基因在体电穿孔转染抑制大鼠颈总动脉新生内膜增生被引量：1
- 2011年
- 目的探讨AngⅡ2型受体(AT2R)基因局部电穿孔转染对大鼠颈总动脉球囊损伤后新生内膜增生的影响。方法建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型,用局部电穿孔方法转染AT2R真核表达载体(pEGFP-AT2R)或空载体(pEGFP-N2),分别于术后7、14 d和21 d采用HE染色及RT-PCR方法进行AT2R、AngⅡ1型受体(AT1R)在颈动脉壁中表达的变化和组织形态学分析,检测其对在体血管新生内膜的影响作用。结果球囊损伤21 d后,pEGFP-AT2R组大鼠颈动脉AT2R mRNA表达为(1.262±0.317),pEGFP-N2组为(0.396±0.100),单纯损伤组为(0.410±0.053),pEGFP-AT2R组与pEGFP-N2组和单纯损伤组相比差异有统计学意义(P<0.01);球囊损伤后21 d时AT1R的表达,pEGFP-AT2R组为(0.469±0.065)、pEGFP-N2组为(0.363±0.046)、单纯损伤组为(0.373±0.045),pEGFP-AT2R组较pEGFP-N2组和单纯损伤组相比差异有统计学意义(P<0.05),pEGFP-N2组和单纯损伤组间无统计学差异(P>0.05);球囊损伤后21 d,pEGFP-AT2R组的内膜面积与中膜面积比(I/M)为(0.828±0.101),pEGFP-N2组为(1.432±0.086),单纯损伤组为(1.515±0.078),pEGFP-AT2R组较pEGFP-N2组和单纯损伤组相比差异有统计学意义(P<0.01)。pEGFP-AT2R组与单纯损伤组相比,使实验动物新生内膜增生平均受抑制率达45.35%。结论在体血管局部电穿孔转染AT2R基因可使AT2R在损伤血管组织表达较单纯损伤组明显增加。AT2R基因与AT1R基因之间在表达量上不存在此消彼长的关系。
- 屈小玲刘德峰刘建平
- 关键词：AT2R内膜增生
