广东省自然科学基金(WSTJJ20120319130623198210011211)
- 作品数：2 被引量：12H指数：2
- 相关作者：孙毅凡江振友更多>>
- 相关机构：广东省结核病控制中心暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 佛波酯诱导THP-1细胞分化条件的优化及自噬模型的建立被引量：5
- 2013年
- 目的 探讨佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA）诱导THP-1细胞（人类单核/巨噬细胞）分化的最优条件，建立相关自噬模型，为基于细胞自噬模型的研究奠定实验基础。 方法 采用PMA诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞；用表达融合蛋白pcDNA3.1-YFP-LC3质粒转染THP-1细胞，YFP为黄绿色荧光蛋白，以示踪自噬体的形成。采用倒置显微镜观察不同浓度（0、10、20、50、100、200 ng/ml）、不同时间（0、24、48、60 h）PMA分化细胞形态学变化；采用荧光显微镜示踪不同条件下LC3点聚集的增强；实时荧光定量聚合酶链式反应（reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction ，RT-qPCR）检测自噬相关基因mRNA的表达。采用SPSS 17.0软件进行统计分析。mRNA相对含量2-ΔΔCt用“x±s”表示。经比较Ct值法分析基因表达差异。Earle’s balanced salts solution（EBSS，又称饥饿培养基），诱导细胞自噬相关基因mRNA表达量变化的比较采用t检验分析，以P0.05为差异有统计学意义。 结果 PMA浓度为100 ng/ml、诱导时间为24～48 h时，THP-1细胞分化成巨噬细胞的形态学状态较理想。饥饿培养基EBSS处理分化的THP-1细胞，能增加自噬体YFP-LC3点聚集，其自噬相关基因LC3、Atg5、Atg7、Beclin1的mRNA表达水平显著增加 （2-ΔΔCt均值分别为1.35±0.16、1.18±0.39、1.44±0.12、1.08±0.09，t值分别为4.00、2.90、5.16、3.57，P值均＜0.05）。 结论 PMA在浓度为100 ng/ml、24～48 h时诱导THP-1分化为巨噬细胞状态较理想；成功构建了THP-1源性细胞自噬模型。
- 陈亮孙毅凡陈涛李海成江振友周琳钟球
- 关键词：白血病单核细胞细胞系自噬
- 环介导等温扩增对肺结核快速诊断的分析研究被引量：7
- 2013年
- 目的:探讨环介导等温扩增检测方法在肺结核诊断中的价值。方法:选取408份初诊疑似肺结核患者的痰标本,同时进行直接涂片抗酸染色法、改良罗氏培养基培养法和环介导等温扩增法检测。结果:在检测的408份痰标本,直接涂片抗酸染色法检出阳性标本86份,阳性率21.1%(86/408);培养检出阳性标本112份,阳性率27.5%(112/408);LAMP检出阳性标本110份,阳性率27.0%(110/408)。以改良罗氏培养基培养法检测结果为标准,涂片法的灵敏度为72.3%(81/112),特异性为98.3%;LAMP灵敏度为92.9%(104/112),特异性为98.0%。检测结果具有统计学差异(χ2=16.42,P<0.05)。结论:LAMP在疑似肺结核患者的诊断中具有较高的灵敏度和特异性,可作为结核病诊断和鉴定的重要依据。
- 江勇钱明陈涛李海成陈燕梅卓文基郭卉欣钟球周琳
