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江苏省科技攻关计划(BE2004611)
江苏省科技攻关计划(BE2004611)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：夏兵吉玉辉张鑫宇夏晓莉孙怀昌更多>>
- 相关机构：扬州大学更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目江苏省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 基于thyA基因的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系统的构建与应用被引量：2
- 2008年
- 将大肠杆菌DH5α在含胸腺嘧啶核苷和三甲氧苄二氨嘧啶的琼脂平板上培养,获得了遗传稳定的ThyA-大肠杆菌DH5α21株。用PCR扩增野生菌和ThyA-大肠杆菌的thyA基因,将测定的序列与野生型thyA基因相比,6号突变株的thyA基因第92位碱基发生G→A转换,导致第31位甘氨酸被天冬氨酸替换,4、7和13号突变株的thyA基因从第73位连续缺失6个碱基,导致第25位甘氨酸和第26位苏氨酸缺失。经PCR扩增的包括启动子在内的鼠伤寒沙门菌thyA基因与野生型大肠杆菌DH5αthyA基因的同源性为86%。以鼠伤寒沙门菌thyA基因为选择标记,构建了含人溶菌酶基因的真核表达载体pDTALYZ,以ThyA-大肠杆菌为受体菌,构建了染色体-质粒平衡致死系统。在相同条件下,pDTALYZ转化ThyA-大肠杆菌的效率高于以卡那霉素抗性基因为选择标记的pcDNAKLYZ转化野生大肠杆菌的效率;在发酵培养过程中,两种重组菌的生长速率相似,质粒丢失率分别为25%和10%,湿菌重分别为57.68 g/L和51.00g/L,重组质粒产量分别为134.9 mg/L和135.0 mg/L。
- 吉玉辉孙怀昌张鑫宇夏晓莉夏兵
