国家自然科学基金(30100152)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 相关作者：徐雷杜柳涛何云魏青杨杏芬更多>>
- 相关机构：中山大学深圳市疾病预防控制中心广东省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人DNA聚合酶β全长cDNA的克隆、鉴定及真核表达载体的构建被引量：2
- 2002年
- 【目的】克隆人类DNA聚合酶 (pol β)基因全长cDNA ,构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤维细胞HLF总RNA进行RT PCR扩增 ,用pGEM T载体经T/A克隆、DNA测序确定后 ,用双酶切将 pol β全长cDNA定向克隆到绿色荧光蛋白表达载体 pEGFP C1,转染大肠杆菌DH5α ,筛选阳性克隆 ,双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT PCR获得 1 0 3kb的产物 ,经DNA测序 ,确定所扩增片段为人类 pol β基因全长cDNA ,进而成功筛选出真核表达载体 pEGFP C1 β。【结论】成功构建人 pol β基因全长cDNA真核表达载体 。
- 杜柳涛庄志雄高昆杨杏芬何云徐雷魏青
- 关键词：DNA聚合酶Β聚合酶链反应DNA
- 人DNA聚合酶β高表达细胞HLFβ的细胞学分析被引量：2
- 2004年
- 目的 获取人HLF细胞内稳定高表达人DNA聚合酶beta(pol β) ,并对pol β稳定高表达细胞的细胞学特征进行分析。方法 使用构建的人pol β全长cDNA的绿色荧光蛋白GFP表达载体pEGFP Cl β ,转染人HLF细胞 ,经G418筛选 ,获得单克隆的pol β稳定高表达的细胞HLFβ ,并对HLFβ细胞的细胞增殖、细胞周期、自发突变率、恶性增殖能力等特征进行分析。结果 Western印迹显示 ,HLFβ细胞的pol β蛋白表达稳定 ,较空载体转染对照细胞高 60 %以上 ,且在不同代间表达稳定。HLFβ细胞增殖能力较对照细胞增强。HLFβ细胞自发突变率略有增加 ,但与对照细胞的差异无显著性 ,细胞周期分布及细胞恶性程度亦无明显改变。结论 该研究成功获得人pol β稳定高表达细胞HLFβ ,在正常生理状况下 ,pol β的高表达对细胞周期、自发突变和恶性增殖能力未见明显影响。
- 杜柳涛徐雷杨杏芬何云魏青庄志雄
- 关键词：恶性增殖DNA聚合酶Β细胞学分析EGFP
- 人pol-β高表达对细胞应对DNA损伤反应时的影响被引量：10
- 2006年
- 目的探讨DNA聚合酶beta（pol-β）高表达对细胞应对遗传损伤反应的影响。方法转染筛选人pol-β稳定高表达的细胞株HLFβ，以甲基甲磺酸（MMS）染毒，从DNA损伤、细胞周期及诱发突变等方面，研究pol-β在细胞应对DNA损伤时的作用。结果经过筛选获得人pol-β稳定高表达的细胞HLFβ，在MMS中、高剂量组（0．5～0．8mmol／L），MMS对HLFβ细胞的DNA损伤反应明显低于对照细胞，差异有统计学意义（P〈0．05）。细胞周期分析显示，MMS染毒后2种细胞在G2期均有阻滞现象。而在HLFβ组，当MMS剂量增加到0．5mmol／L时，除呸期阻滞外，49．0％的细胞被阻滞在G1期，而相同剂量下对照组只有20．1％阻滞于G1期。此外，在MMS 0．5mmol／L组，HLFβ与HLFC相比，诱发突变率从4．5×10^-6增加到8．2×10^-6差异有统计学意义（P〈0．05）。结论pol-β的高表达对细胞应对MMS的细胞毒性和遗传毒性具有一定的保护作用，其效应与HLFβ细胞周期G1期的阻滞有一定关系。但由于pol-β合成DNA的保真度较低，高表达的pol-β也增加了细胞突变的概率，可能产生远期遗传毒性。
- 杜柳涛徐雷杨杏芬何云魏青庄志雄
- 关键词：细胞周期DNA突变分析
