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不同沉淀方法处理胶乳总RNA对基因扩增效率的影响: 2016年; 为探明沉淀方法对胶乳总RNA提取及PCR扩增效率的影响,并寻求较好的RNA沉淀方法,针对胶乳中蛋白、多糖、橡胶粒子含量高的特点,在本实验室改进的SDS法的基础上,分别用Li Cl、Na Cl+异丙醇、Na Cl+Na Ac+无水乙醇和Na Ac+无水乙醇对橡胶树胶乳总RNA进行沉淀,并对所得RNA的完整性、纯度、含量和RT-PCR扩增效率进行比较。结果表明,4种方法均可获得完好的RNA,但其纯度、含量和PCR扩增效率随方法不同而有所差别,其中Na Cl+Na Ac+无水乙醇沉淀的橡胶树胶乳总RNA纯度、产率和18S、REF基因扩增效果均较高,故认为用Na Cl+Na Ac+无水乙醇沉淀胶乳总RNA是一种较为有效的方法。; 吴春太黎瑜冯伟瑜曾日中; 关键词：橡胶树胶乳总RNA提取

酵母双杂交系统筛选新橡胶延长因子HbREF3互作蛋白被引量：5: 2016年; 橡胶延长因子(rubber elongation factor,REF)等橡胶粒子蛋白可能通过相互作用形成蛋白复合体在橡胶生物合成发挥作用。为鉴定REF家族中一新成员Hb REF3的互作蛋白,以橡胶树Hb REF3基因的c DNA序列为基础,分别构建了筛选Hb REF3相互作用蛋白的3种诱饵载体p GBKT7-Hb REF3-F(含全长ORF序列)及p GBKT7-Hb REF3-N(含N端序列)和p GBKT7-Hb REF3-C(含C端序列),并分别转化到Y2H Gold酵母菌株中,进行诱饵表达载体的自激活性与毒性检测。实验证明,3种诱饵载体转化的酵母菌能在SD/-Trp平板上正常生长,而在SD/-Trp/-His/-Ade平板上不能生长,因此,诱饵载体本身没有自激活性,它们的表达产物也没有毒性,不影响转化酵母菌Y2H的生长,满足作为诱饵质粒的条件,并用于橡胶树胶乳c DNA酵母表达文库的筛选。结果表明,用Hb REF3基因的全长ORF编码产物作诱饵,没有筛选到任何候选互作蛋白,而用Hb REF3的N端和C端区域分别作诱饵,均筛选到了可能与Hb REF3具有相互作用的候选蛋白,其中包括REF家族的其他成员和膜联蛋白D4等。; 孙丽娜康桂娟黎瑜曾日中; 关键词：橡胶树酵母双杂交诱饵载体

不同提取液对巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质提取和分离的影响被引量：2: 2013年; 橡胶粒子是巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)乳管细胞内进行橡胶生物合成的亚细胞结构;对橡胶粒子的蛋白质组学研究,可为揭示天然橡胶生物合成机理提供线索。采用5种提取液分别提取橡胶粒子蛋白,并对橡胶粒子蛋白进行SDS-PAGE和16-BAC/SDS-PAGE电泳分离及MALDI TOF/TOF串联质谱分析,证明不同提取液抽提的橡胶粒子蛋白具有不同组成,发现分子量较高的橡胶延伸因子家族蛋白更难从橡胶粒子上被洗脱和提取。通过检索橡胶树转录组数据库,鉴定了3个新的橡胶粒子蛋白,即醌氧化还原酶、含蓖麻毒素B链凝集素结构域蛋白及枯萎/脱水相关蛋白。本研究建立的橡胶粒子蛋白质提取和分离方法,为进一步鉴定低丰度和具有重要功能的橡胶粒子蛋白提供了参照体系。; 代龙军黎瑜聂智毅康桂娟段翠芳曾日中; 关键词：巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质提取液

橡胶树MSAP反应体系优化及其不同开割高度单株DNA甲基化分析被引量：2: 2016年; 以‘热研7-33-97’橡胶树无性系幼嫩叶片为材料,通过利用单因素和正交试验相结合的方法,对酶切、预扩增和选择性扩增3个影响甲基化敏感扩增多态性(MSAP)分析的关键步骤的反应体系中关键影响因素进行了优化,建立橡胶树MSAP反应最佳体系,并用于高低割线橡胶树基因组DNA甲基化差异分析。结果表明:在50μL反应体系中,750 ng基因组DNA用EcoRⅠ20 U,HpaⅡ20 U或MspⅠ10 U于37℃恒温同步酶切10 h,酶切完全。最佳预扩增体系(20μL)为:连接产物4μL,Mg Cl_2(25 mmol·L^(-1))0.15μL,d NTPs(2.5 mmol·L^(-1))0.1μL,上下游引物E-00/HM-00(10μmol·L^(-1))各0.3μL,Taq酶(5 U·μL^(-1))0.1μL,10×PCR Buffer 2μL。最佳选择性扩增反应体系(20μL)为:稀释20倍的预扩增产物2μL,Mg Cl_2(25 mmol·L^(-1))0.1μL,d NTPs(2.5 mmol·L^(-1))0.125μL,上下游引物E+3/HM+3(10μmol·L^(-1))各0.4μL,Taq酶(5 U·μL^(-1))0.1μL,10×PCR Buffer 2μL。高低割线树DNA的甲基化比例分别为37.22%和36.43%,2种开割胶树基因组CCGG位点胞嘧啶全甲基化率明显高于半甲基化率,推测橡胶树基因组甲基化主要模式可能是Cp G型。综上表明,建立的MSAP反应体系稳定可靠且重复性好,为后续橡胶树不同胁迫(割胶)程度DNA甲基化的研究奠定了基础。; 吴春太班硕黎瑜曾日中

巴西橡胶树橡胶粒子中2个含RicinB_Lectin_2结构域蛋白质研究初报: 2014年; 采用不同提取液,从洗涤过的巴西橡胶树橡胶粒子中提取蛋白质,并对其进行电泳分离与质谱鉴定。分离鉴定了2个含RicinB_Lectin_2结构域的糖基识别蛋白质,分别命名为HbRBLLP-1和HbRBLLP-2。这2个蛋白质可能是橡胶粒子膜蛋白质或是与橡胶粒子有较强的相互作用的蛋白质。对HbRBLLP-1及HbRBLLP-2进行生物信息学分析,结果表明它们的RicinB_Lectin_2结构域均仅有1个Q-x-W模体,而非蓖麻毒素B链所具有的(Q-x-W)3模体。; 代龙军黎瑜康桂娟聂智毅段翠芳曾日中; 关键词：巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质

产胶植物橡胶转移酶的研究进展被引量：12: 2013年; 天然橡胶合成中,橡胶转移酶催化异戊二烯焦磷酸的多聚化过程,这一过程对天然橡胶的品质及产量至关重要。橡胶转移酶及其性质、橡胶生物合成分子机理及橡胶的分子量大小决定机制是亟待解决的重要科学问题。本文介绍了以巴西橡胶树为主的产胶植物橡胶转移酶的性质和生物学功能,对橡胶转移酶的分离与鉴定及其活性调节等研究进展进行了综述。; 代龙军曾日中; 关键词：天然橡胶巴西橡胶树

外源激素对热研7–33–97低割龄橡胶树单株产量及其构成因素的影响被引量：1: 2015年; 为配合热研7–33–97的推广应用,探寻不同割胶刀次下的适宜激素,以热研7–33–97低割龄橡胶树为试验材料,研究0.5%乙烯利和0.3%茉莉酸刺激采胶与割胶刀次对橡胶产量及构成因素的影响。结果表明：热研7–33–97用0.5%乙烯利刺激采胶时,第2刀次为适宜增产期,单株干胶产量高达72.59 g,净胶乳增产率达17.88%,净干胶含量增长率为3.28%;0.3%茉莉酸刺激采胶的情况下,各割次株产胶乳量均下降,仅2~5割次干胶含量增加,在此条件下未获得较高的干胶产量。综合分析,采用上述2种激素刺激割胶时,胶乳产量是影响热研7–33–97干胶产量的主要因素,干胶含量对干胶产量影响相对较小。; 吴春太黎瑜聂智毅康桂娟代龙军曾日中; 关键词：巴西橡胶树乙烯利茉莉酸干胶产量

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国家自然科学基金(31270713)