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浙江省科技厅科技计划项目(2008C33032)
作品数:
2
被引量:1
H指数:1
相关作者:
孙琦
孙爱华
严杰
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相关机构:
杭州医学院
浙江大学
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相关领域:
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年份
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2009
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抗菌肽Alloferon-1串联式重组表达及其产物体外抗病毒活性的研究
被引量:1
2009年
目的:构建串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统,检测合成及重组表达的Alloferon-1体外抗病毒活性。方法:采用基因工程技术构建含6×His-EK-8×Alloferon-1-EK-6×His序列的人工融合基因及其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统了解目的重组产物8×rAlloferon-1-EK表达情况和产量。采用Ni-NTA亲和层析及EK酶切和Sephadex G-50层析法,提纯8×rAlloferon-1-EK及rAlloferon-1-EK。采用CPE观察和MTT法检测rAlloferon-1-EK体外抗IV-A3、CV-B4和RSV-E6株的作用,并与直接合成的Alloferon-1(sAllofer-on-1)和Alloferon-1-EK(sAlloferon-1-EK)的抗病毒活性比较。结果:获得了序列正确的目的人工融合基因克隆及其原核表达系统pET42a-8×rAlloferon-1-EK-E.coliBLDE3。该原核重组表达系统串联式表达的目的重组蛋白8×rAlloferon-1-EK产量约为细菌总蛋白的30%。Ni-NTA和Sephadex G-50层析后可分别获得8×rAlloferon-1-EK和rAlloferon-1-EK。25μg/ml的各Alloferon-1s均无明显的抗病毒作用,50μg/ml和100μg/ml的各Alloferon-1s有抗IV-A3和RSV-E6株作用且活性相似(P>0.05),但各Alloferon-1s均无抗CV-B4株的作用。结论:本研究成功地构建了串联表达Alloferon-1的原核表达系统,其表达产物具有与合成的Alloferon-1和Alloferon-1-EK相似的体外抗病毒活性。
孙琦
孙爱华
严杰
关键词:
抗菌肽
抗病毒活性
不同Alloferon-1体外抗病毒效果
2009年
Alloferon-1是Chernysh等于2002报道的一种由13个氨基酸组成、相对分子质量为1481.53的新型抗菌肽,动物实验证实该抗菌肽有较强的抗流感病毒和抗白血病细胞的活性。人工合成或重组表达的抗菌肽Magainin—Ⅱ的生物学活性与天然产物相同。本研究中构建了串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统得到rAlloferon-1-EK,同时人工合成了sAlloferon-1和sAlloferon-1-EK,比较重组及人工合成的3种Alloferon-1体外抗病毒活性,以期为抗病毒新药研发提供实验依据。
孙琦
孙爱华
严杰
关键词:
MAGAININ
生物学活性
相对分子质量
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