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沉默SOCS1共表达HMGB1及肿瘤相关抗原质粒构建: 2011年; 目的:构建沉默细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)并共表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及肿瘤相关抗原的质粒。方法:首先PCR扩增带有胰岛素信号肽序列的IRES片段和带有胰岛素信号肽序列的HMGB1片段,PCR拼接后取代IRES及EGFP片段装入pIRES-EGFP载体中构建pIRES/sig-HMGB1质粒。然后PCR扩增带有NY-ESO-1编码序列及MAGE3(表位)编码序列亚克隆入pIRES/sig-HMGB1中后以此为模板扩增CMV+NY-ESO-1-MAGE3(表位)-IRES+胰岛素信号肽-HMGB1片段。最后合成针对SOCS1的shRNA序列并连接入pENTR/U6载体,扩增U6-shSOCS1片段与CMV+NY-ESO-1-MAGE3(表位)-IRES+胰岛素信号肽-HMGB1片段连接后装入pIRES-EGFP中,完成p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1质粒的构建并测序,酶切和PCR验证质粒。结果:经测序证实所构建质粒序列与预期序列一致,酶切和PCR验证质粒结构正确。结论:成功构建可用于修饰DC疫苗的p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1质粒,为构建新型DC疫苗奠定了基础。; 霍佳杨莉莉魏枫于津浦李慧任秀宝; 关键词：高迁移率族蛋白B1 质粒 DC疫苗

肿瘤微环境中负性调节树突状细胞功能的因素及治疗策略被引量：4: 2011年; 在肿瘤免疫治疗中，树突状细胞（DCs）因拥有强大的抗原提呈功能而受到了极大的关注，但并非所有的DCs肿瘤疫苗都能够获得预期的效果。肿瘤微环境中及DCs自身存在的多种因素对DCs抗原提呈功能的抑制是影响DCs肿瘤疫苗作用的一个重要原因。因此，认识并靶向性地降低或消除这些抑制性因素是增强DCs肿瘤疫苗的一个重要研究方向。; 张晶任秀宝; 关键词：树突状细胞肿瘤疫苗

“核转染”技术对树突状细胞功能的影响: 2011年; 目的:研究"核转染"方法对DC活率、细胞表面分子及细胞因子分泌水平的影响。方法:体外诱导单核细胞分化为DC后,通过"核转染"方法将p/IRES-EGFP质粒转染至细胞核内,同时设立未转染DC为对照组。应用台盼蓝染色计算转染后细胞的活率;荧光显微镜下观察转染效率;流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD83、CD86、HLA-DR及CD11c等的表达;ELISA法检测DC培养上清IL-12及TNFα-的分泌水平。结果:DC转染后随时间推移,细胞活率下降;荧光蛋白在转染后4小时即有表达,表达量逐渐增加,24小时转染效率为56%±12%,48小时转染效率为45%±15%;转染后细胞表面分子CD80、CD83及CD86表达随时间推移逐渐降低,CD11c及HLA-DR表达水平稳定;转染可诱导DC分泌IL-12及TNFα-水平增加。结论:"核转染"是一种有效的转染DC的方法,并可诱导DC分泌多种细胞因子。; 张晶霍佳于津浦李慧赵华李润美刘亮张家丽于文文任秀宝; 关键词：树突状细胞转染质粒

新型树突状细胞疫苗的构建及功能的初步鉴定: 2011年; 目的:构建可同时实现沉默细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)刺激和肿瘤相关抗原负载的新型树突状细胞(DC)疫苗。方法:构建沉默SOCS1并共表达HMGB1及肿瘤相关抗原NY-ESO-1的质粒(p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1)。体外诱导单核细胞分化为DC,将p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染入DC细胞。同时设立未转染组、shNC/GFP转染组和p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染组。PCR和Western blot验证基因及蛋白表达后,酶联免疫吸附(ELISA)法检测DC细胞分泌的肿瘤坏子因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-12、IL-1及IL-6的变化。结果:经测序证实所构建质粒序列与预期序列一致,酶切和PCR验证质粒结构正确。成功将p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染入DC细胞,并在基因和蛋白水平验证NY-ESO-1的正确表达,HMGB1可在胞浆内表达。SOCS1 shRNA质粒shS可沉默SOCS1表达。p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染组DCTNF-α、IL-12、IL-1及IL-6分泌量较未转染组和shNC/GFP转染组升高(P<0.05)。结论:成功构建可同时实现沉默SOCS1、HMGB1刺激和肿瘤相关抗原负载的新型DC疫苗。; 霍佳杨莉莉魏枫于津浦李慧任秀宝; 关键词：细胞因子信号转导蛋白抑制因子树突细胞癌症疫苗质粒转染

SOCS1负性调节细胞因子和Toll样受体信号通路的研究进展被引量：1: 2011年; 细胞因子（CK）信号通路和Toll样受体（TLRs）信号通路在调节免疫细胞增殖、分化和存活，以及维持免疫稳态过程中发挥重要作用。在细胞内，上述信号传导通路受多个负性调节分子的严格调控，其中细胞因子信号传导抑制蛋白1（SOCS1）是最重要的一个分子。SOCS1是一个JAK结合蛋白，可通过多靶点干预对CK和TLR信号通路发挥抑制作用，使信号级联及时终止，而深入阐明SOCS1在CK和TLR信号通路中的作用机制有助于进一步提高免疫系统的抗肿瘤作用。; 于津浦张晶任秀宝; 关键词：TOLL样受体细胞因子信号通路

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天津市自然科学基金(09JCZDJC20400)