广东省“十五”重大科技专项(2002A3020206)
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
- 相关作者：高毅慕宁唐力军汪艳孙尔维更多>>
- 相关机构：南方医科大学华中科技大学第二军医大学更多>>
- 发文基金：广东省“十五”重大科技专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 输注同种异基因凋亡淋巴细胞在受体内的分布被引量：5
- 2006年
- 目的探讨供体凋亡淋巴细胞诱导移植耐受模型中转输细胞的作用。方法用荧光标记供体脾淋巴细胞,诱导凋亡后分离纯化。将标记细胞经尾静脉输入受者,于不同时间点取肝、脾、肺脏进行荧光细胞分布观察与测定。结果除最初30 min内荧光标记细胞在肺脏短暂汇集,从开始到其后12 h内一直以肝脏内荧光细胞比例最高。脾脏内荧光细胞比例远远低于肝脏。12 h各器官荧光细胞基本消失。结论异源供者凋亡淋巴细胞经转输后主要聚集并驻留于肝脏。鉴于肝脏本身的特殊免疫功能,初步推测肝脏为转输异源凋亡细胞发生作用的关键位点。
- 汪艳高毅孙尔维陈忠华
- 关键词：静脉输注淋巴细胞移植耐受肝脏
- 双阴性选择法纯化培养人骨髓多能成体祖细胞被引量：15
- 2005年
- 目的建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞(MAPCs)的方法.方法取健康成人志愿者适量骨髓采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)负分选,流式细胞术鉴定分选后细胞纯度;对传代到不同阶段的细胞进行CD45、GlyA流式细胞分析,初步了解MAPCs在培养、增殖过程中的免疫学稳定性.结果通过miniMACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约(5～10)×104/ml的MAPCs,分选前后细胞活力分别为(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,无明显差异;自制的培养基培养分选后的MAPCs生长良好,最长传代到第16代;流式细胞仪分析获取的CD45、G1yA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪分析传代第4、8、12代MAPCs,CD45-、G1yA-细胞纯度大于98%.结论CD45、GlyA miniMACS负分选可从骨髓中分离高纯度的MAPCs;MAPCs在本室自制的人MAPCs培养基中体外有较强的增殖能力,且能保持较长时间的稳定状态.
- 慕宁高毅唐力军
- 关键词：免疫磁珠分离法分离纯化细胞培养流式细胞术
- 体外诱导人骨髓多能成体祖细胞向肝样细胞分化的实验研究
- 骨髓源干细胞具有多向分化潜能,特别是具有向肝脏干细胞、肝细胞及血管内皮细胞分化的潜能.由于其取材方便,可以来自患者自身,无排斥反应,具有重要的临床应用价值,因此成为当前肝组织工程学中的一大热点。Catherine M.V...
- 高毅慕宁唐力军
- 文献传递
- 两种细胞因子诱导人骨髓多能成体祖细胞向肝样细胞分化的作用被引量：3
- 2005年
- 本实验用免疫磁性分离(MACS)方法分选骨髓间充质干细胞(MSCs)亚群MAPCs[1],用成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)及肝细胞生长因子(HGF)诱导其向肝细胞方向分化,并采用不同方法鉴定了细胞分化能力.
- 高毅唐力军慕宁
- 关键词：细胞分化免疫磁珠分离法多能成体祖细胞细胞因子诱导人骨髓免疫磁性分离
- 两种细胞因子诱导人骨髓多能成体祖细胞向肝样细胞分化的作用
- 骨髓源干细胞具有多向分化潜能,特别是具有向肝脏干细胞、肝细胞及血管内皮细胞分化的潜能,由于其取材方便,可以来自患者自身,无排斥反应,具有重要的临床应用价值,因此成为当前肝组织工程学中的一大热点。Catherine M.V...
- 高毅唐力军慕宁
- 文献传递
- 双阴性选择法纯化培养人骨髓多能成体祖细胞
- 骨髓源干细胞具有多向分化潜能,特别是具有向肝脏干细胞、肝细胞及血管内皮细胞分化的潜能,由于其取材方便,可以来自患者自身,无排斥反应.具有重要的临床应用价值,因此成为当前肝组织工程学中的一大热点。Catherine M.V...
- 慕宁高毅唐力军
- 文献传递
- 共培养诱导人骨髓多能成体祖细胞分化为肝细胞样细胞被引量：5
- 2007年
- 目的探索人骨髓来源多能成体祖细胞（ZHJ-MAPC）在与人肝细胞系L02在体外共培养条件下诱导分化为肝细胞的可行性。方法（1）间接共培养：将ZHJ-MAPC和人肝细胞系L02仅培养液相通行间接共培养。分别于培养第1、3、5、7天应用免疫细胞化学法鉴定ZHJ-MAPC的白蛋白、甲胎蛋白（AFP）、细胞角蛋白-18（CK-18）、细胞角蛋白-19（CK-19）等肝细胞特征性表型的表达情况。（2）直接共培养：将荧光染料羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE，绿色）标记的ZHJ-MAPC与L02细胞（均为1×10^4个／ml）按照各50％比例混合行直接共培养。5d后采用荧光免疫细胞化学SABC-Cy3法（红色）双标后在激光共聚焦显微镜下分别观察ZHJ-MAPC表达白蛋白、AFP、CK-18的情况。结果（1）间接共培养结果：AFP在ZHJ-MAPC间接共培养第1天即表现为强阳性，随后表达逐渐减弱；白蛋白在第5天达到高峰；CK-18在第5天开始出现阳性，第7天出现较强表达。CK-19在各时间点均为阴性。（2）直接共培养结果：共培养第5天在检测白蛋白和CK-18表达情况时呈黄色荧光的阳性细胞即向肝细胞分化的ZHJ-MAPC出现较多，而AFP阳性表达则较少。结论人骨髓来源的ZHJ-MAPC与人肝细胞系L02行间接或直接共培养均能够诱导其向成熟肝样细胞定向分化。
- 蒋泽生高毅慕宁
- 关键词：骨髓干细胞肝细胞细胞培养
- 免疫磁珠法分选人骨髓多能成体祖细胞及初步鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的：应用免疫磁珠法分选人骨髓多能成体祖细胞,观察其分选效果,建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞（hMAPCs）的方法.方法：取健康成人志愿者适量骨髓后采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,在自制培养基下贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A（GlyA）免疫微磁珠（miniMACS）负分选,锥虫蓝拒染实验计数MACS分选前后细胞活力.流式细胞仪鉴定分选后细胞纯度;流式细胞仪分析培养细胞CD29、CD44、CD34和HLA-DR表达情况.结果：通过MACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约（5～10）×104/ml hMAPCs,分选后的hMAPCs细胞生长良好,最长传代到第20代.分选前后细胞活力分别为（96.7±1.7）%和（96.0±2.4）%,无明显差异;流式细胞仪分析获取的CD45-、GlyA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪检测hMAPCs中CD29阳性表达细胞比率为99.2%,CD44阳性细胞比率为98.3%,CD34阳性细胞比率为1.2%,HLA-DR阳性细胞比率为5.3%.结论：CD45、GlyA免疫微磁珠负分选可从骨髓中分离高纯度的hMAPCs;分选后hMAPCs在自行研制的培养基中有较强的增殖能力.
- 慕宁汪艳谢金敏朱应乾高毅
- 关键词：骨髓祖代细胞多能成体祖细胞免疫磁化分离细胞培养技术
- 人骨髓来源多能成体祖细胞与人肝细胞系L02体外共培养向肝样细胞分化的实验研究
- 2007年
- 目的探索人骨髓来源多能成体祖细胞（hMAPCs）在与人肝细胞系L02在体外共培养条件下诱导分化为肝细胞的可行性，为其在组织工程学研究和临床医学中的广泛应用奠定基础。方法（1）取健康成人志愿者适量骨髓采用CD45、糖化蛋白A（GlyA）免疫微磁珠负分选，纯化培养CD45^-、GlyA^-hMAPCs。（2）间接共培养：将分别接种于盖玻片上的传代hMAPCs和人肝细胞系L02（密度均为1×10^5／ml）按照各50％比例共置于直径10cm培养皿中，培养液共通，实现间接共培养。分别于第1、3、5、7天免疫细胞化学鉴定hMAPCs的Alb、AFP、细胞角蛋白18（CK18）、细胞角蛋白19（CK19）等肝细胞特征性表型表达变化情况，并设阳性对照（单独培养的L02细胞）和阴性对照（单独培养未经诱导的hMAPCs），计数阳性细胞比率。（3）直接共培养：将CFSE荧光（绿色）标记的hMAPCs与L02（密度均为1×10^4／ml）按照各50％比例混合后接种于激光共聚焦显微镜检查专用培养皿内，实现直接共培养。5d后用SABC-Cy3免疫荧光（红色）双标后在激光共聚焦显微镜下分别观察hMAPCs表达Alb、AFP、CK18的情况。同样设阳性对照（单独培养的CFSE标记L02细胞）和阴性对照（单独培养的CFSE标记MAPCs）。镜下表达黄色荧光的细胞即是向肝细胞分化的MAPCs，为阳性细胞；单纯表达绿色荧光的细胞为未分化的MAPCs；单纯表达红色荧光的细胞为L02细胞。结果（1）间接共培养结果：AFP作为不成熟肝细胞的表型标志，在间接共培养第l天表现为强阳性表达，随后逐渐减弱，至第7天，AFP的阳性表达已经很少。而Alb在第l天有可疑阳性表达，第3天，Alb即出现较强的阳性表达，第5天，Alb的阳性表达就达到高峰，第7天，密集生长的细胞仍广泛的阳性表达Alb。第l、3天检测CK18均为阴性，至第5天CK18开始出现阳性表达，第7天CK18阳性表达�
- 慕宁王明元林雨冬高毅
- 关键词：肝细胞细胞分化显微镜检查共焦
