绍兴市科技计划项目(2013A23002)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
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- 发文基金：绍兴市科技计划项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- 海藻酸钠固定细胞产D-阿洛酮糖的研究被引量：12
- 2015年
- D-阿洛酮糖3-差向异构酶(DPEase)是一种能催化D-果糖转化为D-阿洛酮糖的异构酶。本实验采用海藻酸钠作为载体,包埋重组大肠杆菌催化D-果糖生成D-阿洛酮糖。以固定化细胞的酶活活力回收率为指标,优化出最佳固定化条件为:海藻酸钠浓度3%,细胞包埋量60g/L,Ca Cl2浓度2%,固定化时间4h,0.01%浓度戊二醛溶液中交联4h。该条件下所得固定化细胞的酶活回收率高达76%,且具有较好的操作稳定性,重复操作8次后酶活回收率仍然保持61%。固定化后DPE细胞的最适酶反应温度提高了5℃、最适pH与游离细胞基本一致,耐热性明显提高,p H稳定性与游离细胞一致。
- 李秋喜林春芳沐万孟江波张涛
- 关键词：海藻酸钠固定化
- 生物转化法产D-阿洛糖的分离纯化被引量：2
- 2014年
- 利用重组菌E.coli BL21/p ET-22b-tl-rpib,将原料D-阿洛酮糖生物转化为具有抑癌效果的稀有糖D-阿洛糖。经液相色谱和串联质谱联用技术(LC-MS/MS)鉴定,反应混合液中25%的D-阿洛酮糖转化成了D-阿洛糖。等电聚焦法测定了重组蛋白的等电点为6.3,并成功运用到产物混合液的去蛋白沉淀中。经过预处理的混合糖液,通过DTFCa2+型离子交换树脂实现了分离纯化。最佳分离条件为:柱温60℃,进样量4m L,流速1m L/min。
- 冯再平沐万孟江波张涛薛冬
- 关键词：生物转化纯化
- 一种新型糖磷酸异构酶在大肠杆菌中的重组表达被引量：1
- 2014年
- 核糖-5-磷酸异构酶(RpiB)是新型功能性稀有糖D-阿洛糖生物合成过程中的重要酶。克隆Thermotoga lettingae TMO来源的RpiB基因,以pET-22b(+)为载体,E.coli BL21(DE3)为宿主细胞,构建了基因重组菌。诱导剂IPTG可诱导目的蛋白表达;经金属亲和层析纯化得到电泳纯的重组蛋白,SDS-PAGE显示17ku处出现显著的特征蛋白质条带。活性检测结果表明,该重组RpiB具有较高的产D-阿洛糖生物活性,静息细胞和纯酶反应3h后转化率分别为19%和23%。
- 冯再平沐万孟江波薛冬
- 关键词：克隆表达
