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深圳市罗湖区软科学研究计划项目(2010069)
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相关作者:
黎剑华
赵洁玲
姚相杰
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卓菲
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发文基金:
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黎剑华
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2012
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EV71病毒P1和3CD基因共表达重组杆状病毒双顺反子穿梭载体的构建及鉴定
2012年
目的通过克隆EV71病毒结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的重组杆状病毒表达载体。方法设计合成EMCV病毒IRES序列的特异性引物,克隆至含有CMV启动子的杆状病毒穿梭载体pFastBacDual-CMV上,命名为pFBCMV-IRES。从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经RT-PCR技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,定向克隆至杆状病毒穿梭载体pF-BCMV-IRES的IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠杆菌DH5α中,经PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果通过对重组杆状病毒穿梭载体pFBCMV-IRES-P1-3CD进行酶切和DNA序列分析,证明共表达EV71病毒P1和3CD基因的重组杆状病毒双顺反子穿梭载体构建成功。结论共表达EV71病毒P1和3CD基因重组杆状病毒双顺反子穿梭载体的成功构建,将为下一步制备EV71病毒的类病毒颗粒疫苗打下基础。
蔡春林
姚相杰
赵洁玲
卓菲
黎剑华
关键词:
杆状病毒
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