国家自然科学基金(81071849)
- 作品数：10 被引量：5H指数：1
- 相关作者：郭潮潭沃恩康王怡婷吴海波王巧刚更多>>
- 相关机构：浙江省医学科学院浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科学研究基金浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 甲型流感病毒NS1蛋白应用研究进展
- 2011年
- 流感病毒是引起急性流感的病原体，具有传染性强、变异快和宿主范围广的特点。随着对流感病毒研究的深入，人们对流感病毒的认知度不断提高，对其的开发利用也随之启动，其中对最短的NS基因及其编码蛋白（NSI和NS2）的研究开发更令人注目。NS1蛋白虽在病毒出芽时未被包装，但在感染细胞中发挥了多种生物功能，如对宿主细胞IFN的调节、与病毒RNA转录和蛋白的表达有关等。人们利用NS1蛋白这些生物特性，进行研究开发利用。此文对NS1蛋白开发应用及其研究进展作一综述。
- 王巧刚郭潮潭
- 关键词：流感病毒A型NS1蛋白
- 甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用被引量：1
- 2017年
- 目的 制备甲型流感病毒核蛋白（NP）单克隆抗体,为甲型流感病毒诊断试剂盒以及相关研究提供材料.方法 大肠埃希菌BL21 （DE3）表达NP作为免疫原,免疫Balb/c小鼠后取脾脏细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得阳性细胞株,注射小鼠腹腔得到单克隆抗体,纯化后进行Western印迹法、ELISA法、细胞免疫染色和荧光法、双抗夹心ELISA法确定NP抗体的生物学特性,探索应用范围.结果 从Western印迹法、ELISA和细胞免疫染色法的结果可得知,抗NP单克隆抗体可以与免疫原特异性结合,也可以与H1N1、H3N2亚型流感病毒的NP特异性结合,具备检测流感病毒的能力.双抗夹心ELISA法进一步提升了抗体对抗原的检测灵敏度至128 pg.同时,通过细胞免疫荧光法观察到抗体可在细胞内显示NP从细胞核扩散到细胞质的过程.结论 制备的抗体成功检测H1N1、H3N2两种亚型的流感病毒,可作为用于流感防治的流感病毒诊断试剂盒的材料.
- 张儒轩沃恩康丁建祖方迪陈帅帅杨新燕郭潮潭
- 关键词：流感病毒A型核蛋白单克隆抗体
- 大蒜提取物抑制流感病毒在MDCK细胞上的增殖作用被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨大蒜提取物G、G1、G2抑制流感病毒在MDCK细胞上的增殖作用.方法 以利巴韦林为阳性对照药物,用不同方法获得的不同浓度大蒜提取物作用于流感病毒感染的MDCK细胞,以MTT法检测细胞存活率,判断大蒜抗流感病毒的效果.结果 G1对MDCK细胞的半数毒性浓度（CC50）为（60.39±7.00）mg/mL,抑制流感病毒增殖的半数有效浓度（EC50）为（15.00±4.36）mg/mL,选择性指数（S1=CC50/EC50）为4.03;G2的CC50为（50.93±10.17）mg/mL,但其抑制流感病毒的效果未超过50%;G无抑制效果.结论 G1在MDCK细胞上对流感病毒有明显的抑制作用,G2抑制作用并不明显,而G无抑制作用.结果 证明,不同提取方法其抑制作用有所差别.
- 尤金彪郭潮潭王怡婷吴海波沃恩康李颖王巧刚王怡
- 关键词：大蒜流感病毒抗病毒作用
- 鸡贫血病毒vp3基因的克隆和分子特征
- 2011年
- 目的获得来源于浙江地区鸡组织中的鸡贫血病毒（CAV）筇基因并分析其变异情况。方法根据GenBank登录的vp3序列设计特异引物，利用PCR方法从鸡组织中获得7个CAV的硪，基因克隆，将其克隆到载体进行测序。结果40份鸡血清中共检出CAV阳性16份，阳性率40．0％。序列测定结果表明，叼妇基因长366bp，编码121个氨基酸，与GenBank登录的其他毒株目妒基因的核苷酸序列同源性为97．O％。100．0％，氨基酸序列同源性为95．0％-100．0％。结论通过PCR方法扩增获得了CAVvp3基因，w3基因及VP3蛋白总体上非常保守。
- 吴海波沃恩康尤金彪王怡婷王巧刚吴南屏郭潮潭
- 关键词：鸡贫血病毒VP3基因克隆分子特征
- H7N9亚型人禽流感病毒全基因组分析及其生物特性研究被引量：1
- 2013年
- 目的分析研究H7N9亚型人禽流感病毒基因组序列特征，明确该病毒的分子进化及生物学特性。方法GISAI和GenBank中获取H7N9基因组全序列，对各段基因与已知序列进行分析比较，绘制进化树，并全面分析和预测病毒株的基因组特征、传染性、致病性、药物敏感性等。结果町N9病毒的基因组完全属于禽源，HA和NA基因属于欧亚谱系，其余6段基因与瑚N2亚型病毒同源性高达99％。该病毒尚不能在人与人之间有效传播，不呈现典型高致病性病毒特征，病毒对金刚烷胺和金刚乙胺耐药，而对奥司他韦敏感。结论该病毒是H7亚型、N9亚型和H9N2亚型禽流感病毒三者的重配体，需警惕该毒株的进一步变异。
- 沃恩康王怡婷陈帅帅吴海波尤金彪王巧刚郭潮潭
- 关键词：禽流感基因组分子特性
- 流感病毒聚合酶2蛋白介导的病毒毒力及宿主适应性选择
- 2012年
- 流感病毒的毒力由多种因素共同决定，其中聚合酶PB2能与宿主前体mRNA的5’端帽子结构结合，利用其核酸内切酶活性切割下5’端的核苷酸短链，进而介导病毒自身mRNA的转录合成。目前已经鉴定出PB2中多个位点的突变与病毒毒力和宿主适应性密切相关，是一个主要的毒力决定因子。因此，此文主要就流感病毒PB2蛋白在病毒毒力，宿主适应性选择，以及与宿主因子相互作用等方面的最新研究进展作一综述。
- 沃恩康王怡婷郭潮潭
- 关键词：流感病毒毒力
- 人感染禽流感病毒的传播被引量：1
- 2013年
- 禽流感病毒属于A型流感病毒，其感染导致的传染病一般只在禽类间传播，然而1997年以来，存在于家禽中的一些禽流感病毒已经突破了动物种间屏障，能够直接从禽类传播给人类，导致亚洲及全球范围内很多感染病例的死亡，存在潜在大流行的威胁。此文对1997年以来禽流感病毒感染人类的状况进行分析，为今后新型禽流感暴发的预防和控制提供参考。
- 陈帅帅郭潮潭
- 关键词：禽流感
- 禽流感病毒实现种间传播的分子机制
- 2012年
- 近年来，H5、H7和H9亚型禽流感病毒跨越种间屏障不断感染人类，特别是人感染HSN1亚型高致病性禽流感后死亡率高达60％。然而这些毒株尚未获得有效的人传人能力，这可能源于人流感病毒和禽流感病毒受体结合特异性的差异，禽流感病毒必须适应人类受体才能实现人际间传播。因此，此文就病毒的氨基酸变异与受体结合特异性、病毒如何在哺乳动物间实现空气传播以及血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）之间功能平衡等方面对种间传播的影响作了综述。
- 沃恩康王怡婷郭潮潭
- 关键词：流感病毒A型种间传播受体
- 病毒密码子偏性及其研究意义被引量：1
- 2012年
- 密码子偏性是生物体内普遍存在的现象，并受到多种因素的影响。开展针对病毒密码子偏性的相关研究，将对病毒生物学的各项研究起到重要作用。此文对影响病毒密码子偏性的因素和病毒密码子偏性的研究意义进行综述。
- 吴海波郭潮潭吴南屏
- 关键词：病毒密码子偏性
- 抗流感病毒NS1蛋白抗体的制备及其生物特性研究
- 2012年
- 目的NSI蛋白在流感病毒复制和传播中起到重要的调节作用，其功能多样，如能调节宿主细胞的蛋白合成、诱导感染细胞的凋亡以及拮抗IFN作用等，此外还有许多功能至今尚未明了。因此，研制一个特异性高的抗NS1抗体，对NS1蛋白功能的进一步研究起到重要作用。方法RT-PCR扩增流感病毒NS1基因，将其克隆进原核表达载体pET-28a（＋）中。然后在大肠埃希菌B121中表达，用切胶纯化方法获取NS1融合蛋白。用该蛋白免疫新西兰大白兔，制备效价较高的多克隆抗体，并测定其效价（间接ELISA法）。用病毒感染细胞实验、Western印迹法和间接免疫荧光实验等方法，观察病毒复制过程中NS1蛋白的表达及细胞定位情况。结果首先构建了能表达NS1蛋白的质粒，并经原核细胞表达获得了NS1蛋白。然后用该蛋白免疫大白兔，获得了效价较高（1：256000）的抗NS1蛋白抗体。实验发现，该抗体可以特异性结合非依赖亚型的甲型流感病毒NS1蛋白。病毒感染后6h即可以检测到NSI蛋白，随着病毒复制时间的延长NS1蛋白表达量变化不明显；24h后NS1蛋白主要分布于细胞核内并能定位于核仁中，也有部分位于细胞质。结论本研究通过原核表达获得了NS1蛋白，并利用常规的免疫方法获得了效价较高的抗NS1多克隆抗体。所制备的多克隆抗体能够有效定位NS1蛋白的表达，并且能和甲型流感病毒各亚型结合，具有较高的特异性。该抗体不仅能用于NS1蛋白功能及其对宿主细胞影响的研究，而且可用于鉴别诊断猪或其他动物中的病毒感染还是接种疫苗后的反应，有较好的开发应用前景。
- 王巧刚吴海波沃恩康王怡婷尤金彪郭潮潭
- 关键词：正黏病毒科NS1基因多克隆抗体
