国家自然科学基金(40376030)
- 作品数：10 被引量：54H指数：4
- 相关作者：向军俭罗辉武邓宁唐勇陈文吟更多>>
- 相关机构：暨南大学解放军第458医院惠州学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程天文地球更多>>
- 麻痹性贝类毒素GTX2,3模拟表位的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的:利用噬菌体展示随机肽库筛选可模拟麻痹性贝类毒素GTX2,3抗原表位的噬菌体,初步鉴定人工合成的GTX2,3抗原表位肽的特异性。方法:以抗麻痹性贝类毒素GTX2,3单克隆抗体(mAb)为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行3轮免疫亲和筛选,以夹心ELISA方法鉴定噬菌体克隆,竞争ELISA鉴定阳性噬菌体克隆的特异性。对阳性克隆进行DNA测序并推导噬菌体所展示的氨基酸序列。竞争ELISA鉴定模拟GTX2,3表位的合成肽的特异性。结果:经过3轮筛选获得20株能与靶分子高亲和力结合的阳性噬菌体克隆。序列分析表明DXLXPP为保守序列(X为任意氨基酸)。竞争ELISA检测表明,麻痹性贝类毒素GTX2,3可抑制阳性噬菌体克隆phage2与抗GTX2,3mAb结合。根据阳性序列合成的短肽可以抑制phage2与抗GTX2,3mAb的结合(IC50=13μg/mL)。结论:通过噬菌体肽库筛选技术,成功地获得麻痹性贝类毒素GTX2,3的模拟表位,并初步证实以此为基础合成的短肽能够准确和特异的模拟GTX2,3的表位。
- 向征刘北一侯晓睿向军俭富宁
- 关键词：噬菌体展示肽库
- 抗麻痹性贝毒素GTX2,3单克隆抗体的制备及特性分析被引量：11
- 2005年
- 制备抗麻痹性贝毒GTX2,3单克隆抗体。利用醛化法将GTX2,3与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备完全抗原。免疫小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合。GTX2,3与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联作为检测抗原,用间接ELISA法筛选阳性克隆株。将筛选的阳性细胞株制备腹水。获得三株稳定分泌抗GTX2,3单克隆抗体的杂交瘤细胞株F4、F10、G9。间接ELISA法检测F10细胞株腹水抗体效价为1.4×10-5。半抗原GTX2,3与载体蛋白偶联后,作为免疫原,可制备高滴度的抗GTX2,3抗血清和单克隆抗体。该抗体对于藻毒素具有高特异性和高亲和力,可用于污染海产品的麻痹性贝毒的检测。
- 向军俭唐琦罗辉武江天久邓宁唐勇杨红宇凌钦婕
- 关键词：麻痹性贝毒单克隆抗体
- 麻痹性贝类毒素GTX2,3间接与直接竞争酶免疫学检测方法的比较研究被引量：18
- 2006年
- 目的：初步比较麻痹性贝类毒素GTX2，3间接竞争酶免疫学检测方法（idc—ELISA）与直接竞争酶免疫学检测方法（de—ELISA）。方法：用高碘酸盐氧化法制备GTX2，3-HRP偶联物并用直接ELISA对其进行鉴定。分别用GTX2，3与葡萄糖氧化酶（GOX）的偶联物GTX2，3-GOX和兔抗小鼠IgG多抗做为包被抗原，用GTX2，3标准毒素作为抑制剂，做间接及直接竞争ELISA，确定并比较两种ELISA的特异性、灵敏度、检测限、工作范围。结果：成功制备出GTX2，3-HRP偶联物，间接和直接竞争ELISA灵敏度分别为10μg／ml和4μg／ml，检测限为6．25μg／ml和0．5μg／ml，工作范围为6—50μg／ml和0．5—50μg／ml。结论：两种竞争ELISA都能应用于麻痹性贝类毒素的快速检测，但dc—ELISA比idc—ELISA更加灵敏，更适合于进一步的研究。
- 罗辉武向军俭唐勇杨红宇
- 关键词：麻痹性贝类毒素ELISA
- 膝沟藻毒素GTX2,3完全抗原的HPLC及免疫学鉴定
- 2008年
- 通过醛化法将膝沟藻毒素(GTX2,3)分别与血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备完全抗原,高效液相色谱法(HPLC)检测醛化反应前后游离GTX2,3的浓度,完全抗原免疫Balb/C小鼠,间接酶免疫吸附试验检测免疫后血清中抗体效价。GTX2,3与KLH及BSA偶联反应前溶液中毒素的浓度分别为760μg.mL-1和660μg.mL-1,偶联反应后毒素的浓度分别为191μg.mL-1及256μg.mL-1,Balb/C小鼠经过5次免疫后血清的效价为1:500。结果表明,反应后游离的GTX2,3的浓度降低,制备的GTX2,3完全抗原免疫小鼠后小鼠产生抗GTX2,3抗体,说明GTX2,3与载体蛋白发生偶联反应,偶联物具有免疫原性。
- 罗辉武向军俭
- 陆源输入营养盐对赤潮形成的影响被引量：18
- 2006年
- 刘亚林刘洁生俞志明韩笑天白洁王璐邹景忠
- 关键词：有害赤潮营养盐海洋科学研究生态灾害赤潮发生
- 人源性抗HBsAg Fab抗体的发酵生产研究被引量：4
- 2004年
- 为了适应工业生产的需要 ,利用fed batch方法 ,重组人源性抗HBsAgFab抗体酵母工程菌在 30L发酵罐中进行了高密度发酵 ,发酵最适温度 30℃ ,pH值范围 5 0～ 5 3,溶氧范围 2 0 %～ 30 %。发酵液OD6 0 0 值达到 30 0时开始诱导 ,甲醇最佳诱导浓度为 1 0mL L。重组人源性抗HBsAgFab抗体经离子交换层析纯化 ,纯化产品经SDS PAGE、Westernblot进行分析和ELISA方法进行活性测定。结果显示 ,重组Fab抗体在Fed batch发酵系统中可高效表达 ,经过 1 92h的发酵生产 ,重组人源性抗HBsAgFab抗体的表达量可达 4 1 2mg L。发酵上清经过离子交换层析纯化 ,获得纯度为 95 %的重组Fab抗体 ,该Fab抗体经ELISA分析具有较高的HBsAg抗原亲和力和特异性。结果证实可以通过高密度发酵毕赤酵母工程菌来高效生产重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,为后续的工业化生产应用奠定了基础。
- 邓宁向军俭陈文吟熊盛王珣章粟宽源
- 关键词：抗体发酵生物制品表面抗原
- 重组人源性抗HBsAg Fab抗体纯化方法的比较研究被引量：3
- 2004年
- 抗HBsAgFab抗体被认为在预防和治疗HBV引起的肝病中具有重要的作用。为了建立稳定的、适于生产应用的重组人源性抗HBsAgFab抗体的纯化工艺 ,本实验对不同纯化方法进行了比较研究。比较了抗Fab抗体亲和层析、ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析等 3套纯化工艺在酵母发酵生产的重组人源性抗HBsAgFab抗体纯化中的效率。结果显示 ,抗Fab抗体亲和层析柱纯化酵母表达的重组Fab ,纯度为 96 8% ,但回收率偏低 ,只有30 %～ 4 0 %。ScFv单克隆抗体亲和层析纯化的重组Fab ,纯度为 97 5 % ,回收率达 75 %～ 85 %。该工艺能很好的适应较小规模的生产应用。离子交换层析纯化的重组Fab ,纯度为 97% ,回收率为 75 %～ 85 %。该工艺能很好的适应较大规模的生产应用。以上结果表明 ,应用ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析纯化技术均能很好的纯化出重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,这两种纯化工艺不仅大大节约纯化成本 ,且纯化效率和回收率有很大提高。
- 邓宁向军俭饶桂荣陈文吟
- 关键词：HBSAG纯化方法毕赤酵母
- 麻痹性贝类毒素GTX2,3单克隆抗体在直接竞争ELISA检测方法中的应用被引量：3
- 2008年
- 目的利用麻痹性贝类毒素GTX2,3单克隆抗体建立麻痹性贝类毒素GTX2,3直接竞争ELISA(dc-ELISA)检测方法。方法通过过氧化反应将GTX2,3与辣根过氧化物酶(HRP)偶联。以兔抗小鼠IgG多抗为包被抗体,GTX2,3为竞争剂,与GTX2,3-HRP竞争结合GTX2,3单克隆抗体,初步建立检测麻痹性贝类毒素GTX2,3的dc-ELISA,并用该方法检测GTX2,3单克隆抗体与C2毒素之间的交叉反应。结果直接ELISA检测证实GTX2,3与HRP偶联成功。dc-ELISA检测麻痹性贝类毒素GTX2,3的灵敏度为1.5μg/ml,工作范围为1.5～40μg/ml,GTX2,3毒素与C2毒素无交叉反应。该方法具有良好的特异性。结论dc-ELISA适用于麻痹性贝类毒素的快速检测。
- 罗辉武向军俭
- 关键词：麻痹性贝类毒素单克隆抗体
- 自制麻痹性贝毒GTX2，3单克隆抗体在直接竞争酶免疫学检测方法中的初步应用
- 2008年
- 【目的】建立麻痹性贝类毒素GTX2，3直接竞争酶免疫学检测方法（de-ELISA）。【方法】通过过氧化反应将GTX2，3与辣根过氧化物酶HRP偶联，利用适当稀释的兔抗小鼠IgG多抗作为包被抗体，利用GTX2，3作为竞争剂与GTX2，3-HRP竞争结合自制GTX2，3的单克隆抗体，初步建立检测麻痹性贝类毒素GTK2，3的de-ELISA，并用直接竞争ELISA检测该方法与C2毒素之间的交叉反应。【结果】直接ELISA结果显示GTX2，3与HRP发生过氧化反应，de-ELISA检测麻痹性贝类毒素时，该方法的灵敏度为1μg／mL，工作范围为1-40μg／mL，该方法与C2毒素无交叉反应。【结论】初步建立的dc-ELISA适用于麻痹性贝类毒素的快速检测，为其酶免疫学快速检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 罗辉武向军俭
- 关键词：麻痹性贝类毒素单克隆抗体ELISA
- 亲和层析纯化重组人源性抗HBsAg Fab抗体被引量：6
- 2004年
- 目的 :纯化酵母发酵产生的重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,建立稳定、适于生产应用的纯化工艺。方法 :以原核表达的重组人源性抗HBsscFv免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备大量分泌mAb的杂交瘤细胞株 14F7。将该细胞株注入小鼠腹腔制备mAb腹水 ,经辛酸沉淀纯化后 ,制备亲和层析柱 ,纯化酵母发酵产生的重组人源性抗HBsAgFab抗体。结果 :用抗scFvmAb亲和层析柱纯化的重组人源性抗HBsAgFab的纯度可达 95 %以上 ,回收率可达 70 %～ 85 %。结论 :人源性抗HBsscFv制备mAb作为亲和层析的介质 ,可有效地从酵母发酵上清中纯化重组人源性抗HBsAgFab,适用于大规模生产重组人源性抗HBsAgFab。
- 邓宁陈文吟向军俭饶桂荣唐勇
- 关键词：HBSAG
