浙江省科技计划项目(2005C22052)
- 作品数：6 被引量：8H指数：1
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- 相关机构：苏州大学湖州师范学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技计划项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 抗病毒基因MxA真核表达载体的构建及在鸡细胞中的表达被引量：6
- 2008年
- 将人抗病毒蛋白基因MxA与携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达质粒重组后构建MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经PCR和酶切方法鉴定后,重组质粒在脂质体介导下转染鸡成纤维细胞和睾丸组织原代细胞,通过荧光观察,RT-PCR及细胞免疫组化检测目的基因的表达。结果表明,MxA基因片段已经被克隆到pEGFP-C1表达载体,成功构建了MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经该重组质粒转染后的鸡细胞的胞质中呈现颗粒状分布的绿色荧光,RT-PCR扩增出EGFP和MxA基因的特异性片断,免疫组化结果显示EGFP报告基因在细胞内的阳性表达,并表现出MxA的表达特征,间接证明了MxA可在鸡细胞中表达。MxA基因真核表达载体的成功构建以及在鸡细胞中的表达为进一步研究MxA基因在抗禽病毒性疾病中的应用打下了基础。
- 刘莉采克俊张易祥何湃丁志丽张念慈
- 关键词：转染
- 白消安对性成熟公鸡睾丸发育的影响被引量：1
- 2009年
- 将96只165日龄健康公鸡随机分为3组,分别行腹腔内单次注射法注射白消安0、50、60mg/kg鸡重,分别在白消安处理后5、10、15、20、25、30d研究其对鸡睾丸形态和曲细精管组织学方面的影响。结果表明,白消安(50mg/kg、60mg/kg)可显著降低鸡的睾丸质量并严重损伤鸡睾丸曲细精管和生精细胞,是制备精原干细胞移植受体的合适剂量。
- 陈云波张易祥曹广力刘莉采克俊
- 关键词：公鸡睾丸发育白消安
- 抗病毒基因MxA在鸡体内的表达
- 2008年
- 大量提取人抗病毒基因MxA的重组质粒pEGFP-C1-MxA,肌肉多点注射未成年广西土鸡,RT-PCR及免疫组化方法检测MxA基因在鸡体内各组织的分布表达。采用RT-PCR方法于注射后5d、10d在呼吸道上皮、脾脏、肌肉组织中均可检出MxA基因的转录;采用免疫组化方法检测到GFP和MxA基因均能在肌肉组织中得到表达,且注射5d后的表达量高于注射10d后。结果表明重组质粒肌肉多点注射可介导MxA在鸡体内多种组织中转录、表达,为进一步探讨MxA的生物学活性以及禽类抗病毒免疫制剂的研发奠定了基础。
- 何湃刘莉张焕相采克俊张易祥董顺利
- EGFP-LacZ双报告基因真核表达载体的构建及体外表达被引量：1
- 2009年
- 构建(β-半乳糖苷酶与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双报告基因的真核表达载体,并在真核细胞中表达。采用PCR方法从质粒pLenti6/V5-GW/LacZ中获取LacZ全基因,与pEGFP-C1重组后构建真核表达载体pEGFP-C1-LacZ。该重组质粒经PCR和酶切方法鉴定后,在脂质体介导下转染293FT细胞株及鸡胚成纤维细胞,通过荧光观察和组织化学方法检测Egfp和LacZ基因的表达。结果表明,LacZ基因被克隆到pEGFP-C1,成功构建了双报告基因真核表达载体。该重组质粒转染后的细胞呈现绿色荧光,组织化学方法检测到呈蓝色的细胞,表明两个报告基因均能在细胞内正确表达。
- 刘莉周政采克俊张易祥何湃曹访
- 关键词：真核表达
- 病毒载体在转基因技术中的研究进展被引量：1
- 2008年
- 转基因技术的广泛应用对基因导入系统提出了越来越高的要求。构建能将目的基因高效稳定导入靶细胞的重组载体是制备转基因动物以及进行基因治疗的关键技术之一。基因导入系统可分为病毒载体与非病毒载体,病毒载体转染效率高、能介导外源基因稳定表达,因而在转基因技术应用中倍受关注。就病毒载体在转基因技术中的研究进展作一综述。
- 何湃刘莉
- 关键词：基因导入系统转基因动物基因治疗
- 精原干细胞标记及活体追踪的研究进展
- 2009年
- 研究表明，精原干细胞（spermatogonial stem cells，SSCs）具有重建不育个体精子发生的能力。采用细胞标记试剂标记精原干细胞，可以活体追踪移植至睾丸的精原干细胞命运，即在发育过程中的增殖、运动及分化情况。标记和追踪精原干细胞将有助于了解精子发生恢复的机理并选择最优的移植策略。
- 陈云波张易祥采克俊刘莉曹访
- 关键词：精原干细胞磁共振成像
