背景:目前所用的生物因子诱导骨髓间充质干细胞后尚未获得成熟的软骨细胞,以骨髓间充质干细胞为种子细胞的软骨组织工程也未得到有临床应用价值的组织工程化软骨,所得到的被证明只是软骨样组织。目的:应用基因芯片技术筛选大鼠骨髓间充质干细胞及软骨细胞的差异表达基因。设计、时间及地点:细胞学基因水平实验,于2007-07在大连医科大学附属第一医院中心实验室完成。材料:健康2月龄SD大鼠8只,由大连医科大学实验动物中心提供。27K Rat Genome Array芯片由北京博奥基因芯片公司提供。方法:无菌条件下体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞和耳部软骨细胞,采用Trizol一步法提取两种细胞的总mRNA并纯化,反转录为双链cDNA探针,用Cy5-dCTP,Cy3-dCTP分别标记骨髓间充质干细胞和软骨细胞,杂交并清洗,应用双通道激光扫描仪进行扫描,所得荧光信号图像用GenePixPro4.0图像软件进行分析。主要观察指标:基因表达谱芯片杂交结果。结果:按差异显著性标准(差异为2倍),以骨髓间充质干细胞为对照,在软骨细胞中有1226条基因上调,888条基因下调。由于骨髓间充质干细胞和软骨细胞的差异表达基因数量较多,所以将Cy5/Cy3<0.05及Cy5/Cy3>20的基因定义为显著差异基因,结果发现两种比较重要的细胞因子:软骨调节素、结缔组织生长因子。结论:基因芯片技术可作为组织工程软骨研究中筛选细胞因子的有效手段。软骨调节素与结缔组织生长因子在软骨细胞中高表达,提示二者与骨髓间充质干细胞向软骨的分化关系密切。
