目的观察亚硝基化在锰致蛋白二巯基异构酶活性改变中的作用。方法以胎大鼠脑片为模型,实验分4组,分别为对照组,正常DMEM培养液;锰处理组,含400μM锰的DMEM培养液;低剂量L-刀豆氨酸硫酸盐(L-Can)预处理组,用0.5 m M L-刀豆氨酸硫酸盐预处理脑片12 h后,再用含400μM锰的DMEM培养液;高剂量L-刀豆氨酸硫酸盐预处理组,用2 m M L-刀豆氨酸硫酸盐预处理脑片12 h后,再用含400μM锰的DMEM培养液。37℃孵育24 h。检测下列指标:蛋白二巯基异构酶(PDI)蛋白活性,PDI的基因和蛋白表达,以及PDI亚硝基化情况,NO生成量、诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)活性。结果锰可活化i NOS,使细胞内PDI亚硝基化水平升高,降低PDI正常活性。L-刀豆氨酸硫酸盐可抑制神经细胞损伤后i NOS的活性、降低NO的生成量,降低PDI蛋白亚硝基化水平。结论锰诱导i NOS活化,造成神经细胞内PDI蛋白亚硝基化,影响其正常功能;L-Can可以减轻锰所致的PDI蛋白亚硝基化水平,对锰致神经细胞损伤起到保护作用。
[目的]观察不同浓度锰对大鼠脑片神经细胞的损伤情况,探讨诱导型一氧化氮合酶（i NOS）在锰诱导神经细胞损伤中的变化。[方法]培养出生后4~7 d大鼠脑片,培养液为50%高糖杜尔伯科改良伊格尔培养基,25%Hank平衡盐溶液,24%热灭活马血清,1%青霉素和链霉素。待第15天脑片神经细胞生长状态最佳时加入0、25、100、400μmol/L Mn Cl2。培养24 h后,测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性,脑片细胞悬液中细胞凋亡率、一氧化氮生成量和i NOS活性,m RNA和蛋白表达水平。[结果]不同浓度锰处理脑片24 h后,脑组织切片神经细胞发生明显损伤。随着锰处理浓度升高,LDH活性升高,100和400μmol/L锰处理组是对照组的1.71、2.76倍。细胞凋亡率和一氧化氮生成量升高增加,25、100和400μmol/L锰处理组分别是对照组的3.31、4.50和6.97倍和1.98、2.79和4.02倍。i NOS活性增强,100和400μmol/L锰处理组分别是对照组的2.12和2.64倍。i NOS m RNA和蛋白表达水平明显升高,25、100和400μmol/L锰处理组i NOS m RNA表达水平是对照组的1.27、1.43和1.86倍。100和400μmol/L锰处理组i NOS蛋白表达水平分别是对照组的4.17和5.50倍。[结论]锰可致大鼠脑片神经细胞一氧化氮生成量和i NOS表达升高,进一步导致细胞凋亡率增加。
