重庆市教育委员会科学技术研究项目(0200050174KJ090303)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：陈伟庆郭元红房殿亮唐鹏沈文拥更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市教育委员会科学技术研究项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Runx3基因对HepG2细胞顺铂耐药性的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨Runx3基因对HepG2细胞耐药性的影响及可能机制。方法取在1.6μg/ml顺铂(CDDP)下生长良好的HepG2耐药细胞(HepG2/CDDP-1.6),建立耐药HepG2/CDDP的动态变化模型HepG2/CDDP/2.0,并予以甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理;将Runx3-shRNA表达载体转染HepG2/CDDP-1.6细胞,RT-PCR检测处理及转染前后细胞Runx3 mRNA的表达。MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪分析细胞周期,Hoechst 33258检测凋亡,Western blot检测P-gp表达的变化。结果在动态变化模型中随CDDP诱导时间的延长,Runx3 mRNA的表达逐渐降低。5-Aza-CdR处理后Runx3 mRNA的表达增加,细胞生长受到明显抑制,S期细胞逐渐增加,凋亡细胞明显增多,细胞内P-gp的表达减少。转染Runx3-shRNA载体后HepG2/CDDP-1.6细胞对CDDP的耐受性增强,G1期细胞增加,P-gp的表达增加。结论 Runx3基因的表达可抑制HepG2/CDDP耐药的形成,提高HepG2/CDDP细胞对化疗药物的敏感性。
- 郭元红陈伟庆房殿亮
- 关键词：RUNX3耐药DNA甲基化RNA干扰
- Runx3-shRNA表达载体的构建及其干扰作用的检测
- 2012年
- 目的构建Runx3基因shRNA重组表达质粒,并检测其干扰作用。方法人工合成靶向Runx3基因的shRNA序列,克隆至pGenesil-1.1表达载体上,构建重组表达质粒Runx3-shRNA,转染人耐药肝癌HepG2细胞;采用半定量RT-PCR及Western blot法检测重组表达质粒对HepG2细胞中Runx3基因的转录和表达水平的影响。结果重组表达质粒Runx3-shRNA经酶切及测序证明构建正确;其转染人耐药肝癌HepG2细胞后,细胞Runx3基因的转录和蛋白表达水平均明显降低,与空白对照组和阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论已成功构建了Runx3-shRNA表达质粒,为进一步研究Runx3基因在肿瘤耐药细胞中的作用奠定了基础。
- 郭元红陈伟庆房殿亮
- 关键词：RUNX3基因RNA干扰
- P38MAPK磷酸化对HepG2细胞耐药的影响及其意义被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨p38MAPK磷酸化对HepG2细胞耐药的影响及其意义.方法 采用浓度递增法,建立动态HepG2/顺铂（CDDP）耐药模型,Western blot检测磷酸化p38的表达;予以p38MAPK特异性抑制剂SB203580分别处理24、48、72 h后,流式细胞仪动态分析HepG2/CDDP耐药细胞周期、四甲基偶氮唑盐法检测顺铂对HepG2/CDDP耐药细胞的半数药物抑制浓度（IC50）、Western blot检测HepG2/CDDP耐药细胞凋亡分子Bcl-2、Bax及P-gp蛋白的表达.动态耐药模型磷酸化P38的检测行单因素方差分析; SB203580处理后计量资料行3×3析因设计方差分析,率的比较采用x2检验.结果 成功建立HepG2/CDDP耐药细胞株,其对CDDP的IG50值与对照HepG2细胞差异具有统计学意义（t=99.30,P〈0.01）;随着HepG2/CDDP耐药细胞株耐药表型的增强,P38MAPK活化水平逐渐增强（F=69.39,P〈0.01）.P38MAPK特异性抑制剂SB203580可逐渐降低HepG2/CDDP对顺铂的IC50值（F=2350,P〈0.01）、G0/Gl期细胞比例（x2=520,P〈0.01）、Bcl-2/Bax表达比值（F=83.8,P〈0.01）及细胞膜药物转运相关蛋白P-gP的表达（F=107,P〈0.01）.结论 P38活化水平随着肝癌耐药细胞株耐药表型的增强而逐渐升高;抑制P38的活化可有效逆转肝癌HepG2/CDDP耐药细胞株的耐药性.
- 唐鹏陈伟庆沈文拥
- 关键词：细胞周期P38
