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HTLV-1 Tax蛋白阳性T细胞中EGR-1表达调控机制的研究被引量：1: 2014年; 目的：探讨成人T淋巴细胞白血病病毒1型（ HTLV-1病毒） Tax蛋白阳性T细胞TaxP中早期生长反应基因-1（EGR-1）表达调控的机制。方法构建不同长度的EGR-1调控序列报告基因，将其转染TaxP细胞，加入NF-κB抑制剂BAY 11-7082或同等体积的二甲基亚砜（DMSO），24 h后收集细胞检测荧光素酶活性；TaxP细胞上清中加入BAY 11-7082或同等体积的DMSO，24 h后免疫印迹检测EGR-1蛋白表达；将Tax及其突变体M22和M47分别转染293 T细胞，24 h后免疫印迹检测EGR-1蛋白表达。结果成功构建了不同长度及突变体的EGR-1调控序列荧光素酶报告基因；荧光素酶报告基因检测显示：相对于E1、E2而言， E3、DelE、MutE的荧光素酶活性明显降低，加入BAY 11-7082后，E1、E2的荧光素酶活性明显降低（P＜0．01），而E3、DelE、MutE无明显变化；同样地，免疫印迹检测显示加入BAY 10-7082后，EGR-1蛋白表达明显降低；相对于野生型和M47，转染M22突变体后，293 T细胞EGR-1蛋白表达明显降低。结论 NF-κB是Tax蛋白阳性T细胞中EGR-1表达调控的关键核因子。; 韩静贤牛志国刘威高彩宋向凤张国俊孙爱平王辉; 关键词：TAX蛋白早期生长反应基因-1 核因子ΚB

HTLV-1 Tax蛋白对T细胞中HMGB1调控的影响被引量：2: 2013年; 目的探讨人T淋巴细胞白血病1型病毒（humanT—cellleukemiavirus1，HTLV-1）Tax蛋白对人高迁移率族蛋白1（highmobilitygroupbox1，HMGB1）基因转录调控的影响。方法提取TaxN和TaxP细胞总RNA和蛋白质，通过real—timePCR和Westernblot分析HMGB1mRNA和蛋白质的表达情况；利用脂质体介导方法，将6个含有不同长度HMGB1调控序列的pGL3-HMGB1-luc瞬时转染至TaxN和TaxP细胞，观察HMGB1基因在不同T细胞中的转录活性；pCMV—Tax与pGL3-HMGB1-luc瞬时共转染至Jurkat细胞，观察Tax蛋白对HMGB1基因的转录调控影响；染色体免疫共沉淀（ChIP）找寻Tax蛋白影响HMGB1基因转录调控的区段。结果TaxP细胞中HMGB1mRNA和蛋白质表达水平高于TaxN细胞。TaxN和TaxP细胞中HMGB1调控趋势基本相似，均表现出3号质粒（pHLuc3，含有-504～＋83HMGB1区段）的相对荧光素酶活性（HMGB1／neo）最高，但是6号质粒（含有-1163-＋83HMGB1区段）却表现出TaxP细胞HMGB1的转录活性明显高于TaxN细胞。pCMV．Tax与pGL3．HMGB1．Luc报告基因共转染到Jurkat细胞也显示，6号质粒（pHLuc6）中Tax促进HMGB1基因的转录。ChIP分析证实了Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163—-1043区段。结论-504—-383可能是HMGB1基因转录激活的关键启动子区，Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段促进HMGB1基因转录。; 张晨光牛志国王辉尹明梅李月朱琳琳赵庆伟丁肖华化瑞芳蒲亚陆胡丽华; 关键词：TAX蛋白高迁移率族蛋白1 基因调控

rhHMGB1对HTLV-1＋MT2细胞中HMGB1相关受体表达的影响被引量：3: 2014年; 目的探讨重组人高迁移率族蛋白1（recombinant human HMGB1，rhHMGB1）对人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染的T细胞中与HMGB1相关膜受体表达的影响。方法病毒阳性细胞MT2中加入终浓度为1μg／ml的人源化重组人rhHMGB1蛋白或等体积的PBS，培养24h后，以流式细胞术、免疫印迹、免疫荧光检测膜受体晚期糖基化终产物受体（receptor for advanced glycosylation end products，RAGE）、T细胞相关免疫球蛋白黏蛋白3（T cell immunoglobulin mucin3，TIM-3）、Toll样受体4（Toll like receptor4，TLR4）的表达及分布。结果流式细胞术检测结果显示1μg／ml rhHMGB1刺激MT2细胞后，与对照相比RAGE表达下降，TLR4的表达明显升高（P〈0．05）；免疫印迹检测结果显示1μg／ml rhHMGB1刺激MT2细胞后，细胞总蛋白和胞质中，膜受体RAGE和TLR4表达均明显升高（P〈0．05），而TIM-3的表达没有明显变化；免疫荧光检测结果显示rhHMGB1刺激MT2细胞后TLR4和RAGE的荧光强度均有增加，而TIM-3的荧光强度没有明显变化，且TLR4、TIM-3集中于细胞膜，而RAGE则集中于细胞质，细胞膜表达较少。结论胞外的HMGB1可促进HTLV-1感染T细胞RAGE和TLR4的表达。; 李向平牛志国韩静贤高彩刘威宋向凤高志涛王辉

EGR1对HTLV-1病毒感染后宿主细胞自噬的影响被引量：1: 2017年; 目的探讨早期生长反应基因1（EGR1）对成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染后宿主细胞自噬的影响。方法获得病毒早期感染模型，免疫印迹检测病毒核心蛋白p19、宿主细胞EGRl的表达：荧光素酶报告基因检测EGRl的5’端调控序列转录活性；筛选有效的EGRlsiRNA，将EGR1 siRNA转染HeLa细胞，随后HTLV．1病毒阳性细胞系MT2与HeLa细胞进行共培养，免疫印迹检测病毒核心蛋白p19、EGR1、自噬相关蛋白LC3；real-timePCR检测病毒载量；免疫荧光检测自噬体数目。结果共培养后，宿主细胞EGR1蛋白表达和调控序列荧光素酶活性逐渐增强，且EGRl蛋白的表达与细胞自噬水平呈现正相关；筛选了有效的EGRlsiRNA，命名为siE2；共培养模型干扰EGRI的表达后，病毒核酸载量、核心蛋白p19的表达以及自噬相关蛋白LC3B／LC3A比例均下调，同时伴有胞内自噬体数目的减少（P〈0．01）。结论EGR1与HTILV-1感染后宿主细胞自噬水平和病毒复制密切相关。; 黄青松牛志国赵伟栋丁自强毋梦林侯小美吕若涵毛璐爽李泽黄新祥王辉; 关键词：早期生长反应基因1 细胞自噬病毒复制

细胞自噬对HTLV-1在HeLa细胞中复制动力学的影响被引量：4: 2017年; 目的探讨成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染后的复制动力学及其对宿主细胞状态的影响。方法将HTLV-1病毒阳性细胞系MT2与HeLa细胞进行共培养，获得病毒早期感染模型，免疫印迹检测病毒核心蛋白p19、凋亡相关蛋白caspase-3/9、自噬相关蛋白LC3；real-time PCR检测病毒载量；荧光素酶活性检测3′长末端重复序列（3′-LTR）转录活性；免疫荧光检测自噬体数目。结果通过细胞共培养成功模拟了早期病毒感染；共培养后4 h、8 h、16 h、24 h、36 h，病毒核酸载量及长末端重复序列3′-LTR转录活性逐渐增加（P〈0.01），24-36 h达到平台期；而核心蛋白p19的表达4 h可以检测到，但8 h后降低，16 h后又升高，24 h和36 h差异无统计学意义；病毒感染后宿主细胞中caspase-3/7/9的活性及蛋白没有明显变化（P〉0.05），但是自噬相关蛋白LC3B/LC3A比例逐渐上升，伴有胞内自噬体数目的增加（P〈0.01）。结论HTLV-1病毒复制动力学与宿主细胞的自噬密切相关。; 黄青松丁自强牛志国王婷婷侯小美毛璐爽吕若涵李泽黄新祥王辉; 关键词：细胞凋亡细胞自噬

人T细胞白血病1型病毒Tax蛋白、高迁移率组蛋白1及自噬被引量：2: 2015年; 人T细胞白血病1型病毒(HTLV-1)是引起成人T细胞白血病的病原体,癌蛋白Tax在HTLV-1病毒复制及疾病转归过程中发挥重要的促进作用;自噬是细胞质内一种溶酶体降解途径,可以发挥细胞防御作用,参与病原体的清除。高迁移率组蛋白作为细胞应激的产物,在多种疾病中出现高表达,在细胞自噬、DNA损伤修复、炎症因子释放等生理或病理过程中发挥重要作用,与病原体感染关系密切。本文就Tax、高迁移率组蛋白1及细胞自噬三者之间的相互关系做一综述。; 韩静贤牛志国王辉; 关键词：TAX蛋白细胞自噬

HTLV-1病毒Tax蛋白阳性T细胞中EGR-1表达调控机制: 目的:探讨HTLV-1病毒Tax蛋白阳性T细胞TaxP中早期生长反应基因-1表达调控的机制。方法:构建不同长度的EGR-1调控序列报告基因,将其转染TaxP细胞,加入NF-κB抑制剂BAY 11-7082或同等体积的DM...; 王辉韩静贤牛志国刘威高彩宋向凤; 关键词：医学免疫学 TAX蛋白早期生长反应基因-1 核因子ΚB; 文献传递

HMGB1与其受体分子信号转导通路的研究进展被引量：14: 2014年; 高迁移率族蛋白B1 （High mobility group box1 protein,HMGB1）是一种广泛存在于真核细胞中的非组蛋白染色体结合蛋白,参与DNA的复制、转录、修复以及细胞运动等.随着对HMGB1研究的深入,发现HMGB1是一种炎性细胞因子,由损伤坏死的细胞被动释放,或在内毒素、IL-1和TNF等的刺激下,由巨噬细胞、单核细胞活化后主动分泌.HMGB1因缺乏引导肽结构而不能以高尔基体/内质网途径分泌,而是通过非典型的囊泡介导途径,由胞外溶血磷脂胆碱（LPC）激发溶酶体胞吐而主动分泌到细胞外.; 张晨光任峰王辉; 关键词：HMGB1 信号转导通路受体分子高迁移率族蛋白B1 炎性细胞因子真核细胞

胞外高迁移率组蛋白1对HTLV-1感染的T细胞中病毒复制的影响被引量：4: 2012年; 目的探讨胞外的高迁移率组蛋白1（high mobility group box 1，HMGB1）对人T淋巴细胞白血病病毒1型（human T-cell leukemi int1，HTLV-1）感染的T细胞中病毒复制的影响。方法ELISA检测HTLV．1病毒阴性T细胞系Jurkat、MOLT4细胞及HTLV-1病毒阳性的T细胞系MT2、MT4细胞培养上清中的HMGBl水平；将HTLV-1的长末端重复序列荧光素酶报告基因pHTLV-1-LTR-luc转染病毒阳性细胞MT2，随后加入终浓度为0．25、0．50、0．75μs／ml的HMGBl多克隆抗体（PcAb）及其同型对照抗体，30、100、300ns／ml的重组人HMGB1蛋白（rhHMGB1）及其对照PBS，48h后检测荧光素酶活性；在病毒阳性细胞MT2中加入终浓度为0．25斗晷／ml的HMGBlPcAb及同型对照抗体，300ng／ml的rhHMGB1及对照PBS，real．timePCR检测病毒编码基因tax、poll、pol2、p19、gag、env。结果HTLv．1病毒阴性T细胞系和HTLV．1病毒阳性细胞系培养上清中的HMGBI水平无明显差异；0．25μg／ml的HMGBlPcAb可明显抑制HTLV-1-LTR的转录活性，而300ng／ml的rhHMGB1可明显促进HTLV．1．LTR的转录活性；real．timePCR检测显示0．25恤g／ml的HMGBlPcAb可明显抑制病毒编码基因poll,po／2、gag、e删的表达，300ns／ml的rhHMGB1可明显促进pol1、pol2、gag、env的表达。结论胞外的HMGB1可促进HTLV-1病毒感染T细胞的病毒复制。; 王霞牛志国高彩孙启蒙王金恒宋向凤高志涛韩静贤王辉; 关键词：病毒复制

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国家自然科学基金(81273241)

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