国家自然科学基金(30800285)
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
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- TAT-ASPP2融合蛋白的制备及其对胶质瘤细胞增殖的抑制作用
- 2011年
- 目的:制备TAT-ASPP2融合蛋白,探讨其对人胶质瘤U-87MG细胞和U251细胞增殖的抑制作用。方法:设计TAT-ASPP2引物,应用IN-Fusion技术构建原核表达质粒pET-TAT-ASPP2,双酶切、DNA测序鉴定后转化大肠杆菌E.coliBL21,IPTG诱导TAT-ASPP2融合蛋白的表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定TAT-ASPP2融合蛋白。MTT法检测TAT-AS-PP2融合蛋白对U-87MG和U251细胞增殖的作用。结果:成功构建了原核表达质粒pET-TAT-ASPP2,转化E.coli BL21后成功表达TAT-ASPP2融合蛋白,其相对分子质量约为128000,并可被ASPP2特异性抗体所识别。TAT-ASPP2融合蛋白对U-87MG和U251细胞增殖的抑制率分别为(65.0±3.0)%和(64.7±2.5)%,而ASPP2蛋白则不能抑制U-87MG和U251细胞的增殖。结论:成功地克隆、表达及纯化TAT-ASPP2融合蛋白,该融合蛋白可抑制胶质瘤细胞的增殖。
- 何火聪苏颖潘剑茹黄争荣
- 关键词：胶质瘤融合蛋白增殖
- 融合蛋白PTD-SOD对豚鼠UVB损伤的预防效应被引量：7
- 2009年
- 本研究建立了体外豚鼠皮肤一次性中波紫外(UVB)损伤和多次性UVB损伤模型,以超氧化物歧化酶(SOD)为对照,探讨两种融合了蛋白转导域的超氧化物歧化酶(PTD-SOD)PTD-SOD1和PTD-SOD2对豚鼠UVB损伤的预防效应,动物实验利用数码相机拍摄豚鼠背部相关区域皮肤的颜色变化,再利用PHOTOSHOP软件通过测量a*值,分析产生红斑程度来衡量辐射损伤的程度。结果表明,对于一次性辐射损伤,SOD基本没有预防效果,两种PTD-SOD均有较好的预防效果,PTD-SOD2的预防效果优于PTD-SOD1,两种蛋白的剂量与其保护效果均呈钟形曲线关系。其最佳给药时间均为辐射前0.5 h,使用量为2000 U,超过则保护效果减弱。对于多次性辐射损伤,也是SOD基本没有预防效果,两种PTD-SOD均有较好的预防效果,而PTD-SOD2的预防效果优于PTD-SOD1;皮肤切片结果也表明,两种PTD-SOD都能有效减轻豚鼠皮肤表皮层因多次性UVB辐射引起的肿胀。
- 潘剑茹周静宏彭树美何火聪刘树滔饶平凡
- 关键词：蛋白转导域超氧化物歧化酶
- 融合蛋白PTD-SOD对受紫外线照射豚鼠皮肤损伤的保护作用被引量：7
- 2010年
- 采用0.26×10-4W/cm2的紫外线(UVB)照射豚鼠背部皮肤,于照射后给予不同的融合蛋白(PTD-SOD1和PTD-SOD2)霜剂和野生型SOD霜剂涂抹受照部位皮肤,利用数码相机拍摄豚鼠背部皮肤颜色的变化情况,用Photoshop软件通过测量分析皮肤红斑度的变化来反映辐射损伤的程度,以探讨两种融合蛋白和野生型SOD对受照豚鼠的皮肤保护作用。结果表明,照射后立即给予PTD-SOD有较好的保护作用,其效果随给药剂量的增加而增加。PTD-SOD1蛋白对一次性UVB辐射损伤的保护作用最好,野生型SOD蛋白对一次性UVB辐射损伤也有保护作用,其效果与PTD-SOD2蛋白相当。
- 潘剑茹彭树美周静宏何火聪刘树滔饶平凡
- 关键词：UVB
- X射线致小鼠急性损伤的观察被引量：2
- 2012年
- 本研究用6 Gy X射线对小鼠进行全身一次性照射,分别在照射后1、3和7 d经颈椎脱臼处死,测定小鼠外周血红、白细胞数量,胸腺指数和脾脏指数,骨髓嗜多染红细胞微核形成率以及肝脏抗氧化水平。结果表明:照射24 h后,小鼠外周血白细胞数量急剧降低,胸腺指数和脾脏指数下降,骨髓嗜多染红细胞微核形成率增加,肝脏脂质过氧化水平上升。放射7 d后,胸腺指数稍有回升,骨髓红细胞微核形成率和肝脏脂质过氧化水平略为降低,其它指标随时间变化损伤程度持续增加。
- 何火聪吴君心苏颖潘剑茹郑光进刘树滔
- 关键词：X射线小鼠
- TAT蛋白转导结构域介导融合蛋白在小鼠活体的跨膜递送作用被引量：1
- 2010年
- 目的探讨跨膜递送短肽——TAT蛋白转导结构域(简称TAT)介导的与其融合的活性蛋白在活体的跨膜递送作用。方法以融合蛋白GST-TAT-GFP,GST-GFP-TAT和GST-GFP为研究模型蛋白,不经过蛋白质的变性处理、直接通过向小鼠腹腔注射和皮肤涂抹这两种含TAT的融合蛋白及作为对照的融合蛋白GST-GFP,一定时间作用后取体内器官和皮肤做冷冻切片,荧光显微镜检测这些融合蛋白的跨膜递送情况;并对分别融合在C端或者N端的TAT介导GFP在活体动物体内和皮肤的跨膜递送作用进行对比。结果腹腔注射实验结果表明,TAT可以介导不经过蛋白质的变性处理的融合蛋白GST-TAT-GFP和GST-GFP-TAT跨膜递送进入到小鼠的心脏、肝、肾、脾和肺,甚至脑组织;其中GST-GFP-TAT跨膜递送效率比GST-TAT-GFP更高。结构模拟分析提示GST-GFP-TAT与GST-TAT-GFP中的TAT的暴露情况不同可能是造成两种蛋白跨膜递送活性差异的重要因素。皮肤实验的结果则表明TAT不仅介导融合蛋白GST-TAT-GFP和GST-GFP-TAT进入小鼠表皮,而且使其进入小鼠皮肤的真皮层。结论 TAT可以跨膜递送不经过变性处理的融合蛋白进入小鼠皮肤和体内,递送效率可能与TAT的暴露程度相关;这些结果为在蛋白质疗法方面应用TAT提供了进一步的理论依据。
- 刘树滔何火聪陈菁傅蓉潘剑茹饶平凡
- 关键词：融合蛋白跨膜递送器官
- 不同来源SOD蛋白的稳定性比较被引量：6
- 2009年
- 纯化制备了来源于猪血的天然SOD,由大肠杆菌体系表达的PTD-SOD1以及由酵母体系表达的重组SOD和PTD-SOD2三种基因重组SOD蛋白,并从pH稳定性、温度稳定性、水浴时间稳定性和外源试剂耐受性几个方面对它们进行了比较.结果表明,重组SOD的稳定性总体上是最强的,PTD-SOD2次之,PTD-SOD1最弱,而天然SOD仅比PTD-SOD1稍强.
- 潘剑茹郑光进黄文斌张锦道刘树滔饶平凡
- 关键词：SOD稳定性
