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产琼胶酶菌株发酵条件优化及酶学特性被引量：5: 2014年; 为提高产琼胶酶菌株的产酶能力，优化其发酵条件，并研究其酶学特性。通过单因素试验和正交试验确定最佳发酵条件为：酵母粉浓度0．3％，琼脂浓度1．2％，培养基起始pH8，28℃，K2HPO4 0．02％，CaCl20．02％。优化后的酶活高达576．25U／mL，为优化前的2．05倍。酵母粉浓度，琼脂浓度和pH3个因子之中，pH对酶活的影响最大，酵母粉浓度的影响最小。酶学特性的研究表明：FG15的琼胶酶最适pH为7．5，在pH为6．5～8时酸碱稳定性较好；最适温度为36℃，在20℃-45℃热稳定性较好。该菌株产酶能力强，具有良好的稳定性，是生产琼胶寡糖潜在的优势菌。; 尹群健陈潇骁杨宏胜林明师毛欣琪方再光; 关键词：琼胶酶发酵条件酶学特性

琼胶降解菌产酶条件优化、酶学性质和糖代谢途径被引量：2: 2014年; 为确定热带海洋环境中琼胶降解菌的最佳产酶条件和最适培养条件,提高其产酶能力,采用3,5-二硝基水杨酸（3,5-Dinitrosalicylic acid,DNS）比色法测酶活,研究其酶学性质并利用高通量测序获得其参加糖代谢的酶。单因素和多因素研究结果表明：FG12的最佳产酶条件为1%蛋白胨、0.8%琼脂、0.02%K2HPO4、pH 7.5、28℃;最适培养条件为0.8%琼脂粉、0.5%蛋白胨、pH 6.8。优化后的酶活达到739.58 U/mL,比优化前提高了273.49%。琼胶酶的最适温度为36℃,在36~55℃之间的热稳定性很好;最适pH值为7.5,在pH为6.5~7.5时,酸碱稳定性较好。高通量测序的代谢图中,FG12中含有多种不同数量的酶参与糖代谢,能通过基因改造提高酶产量。因此,FG12是一株高效琼胶降解菌,为潜在的工程菌。; 尹群健陈潇骁杨宏胜林明师毛欣琪方再光; 关键词：琼胶酶产酶条件酶学性质

Vibrio sp.FG1琼胶酶的分离纯化及酶学性质研究: 2021年; 目的:通过对琼胶降解菌FG1发酵液的分离纯化,拟获得较高纯度的琼胶酶,并探究其最适反应条件,为后续琼胶酶的工业化生产提供基础.方法:将FG1菌株的发酵液离心后得到粗酶液,再通过超滤浓缩、透析、葡聚糖凝胶柱层析进行酶的分离纯化.通过DNS法测定酶解反应产物还原糖含量从而计算得出酶活力单位,运用单因素实验和正交试验设计对单一琼胶酶组分的酶解反应条件进行优化.结果:经分离纯化紫外检测得到两个峰值产物且均具有琼胶酶活性,分别命名为FG1-A、FG1-B,酶组分A与酶组分B经PAGE电泳分别显示为两条亮带和一条亮带,酶组分A中两种蛋白质分子量分别为53.45 kD和46.85 kD,酶组分B蛋白质分子量为42.50 kD.对单一酶组分B进行反应条件优化得出其最适反应pH为6.4,最适反应温度为37℃,最适反应底物浓度为0.35%.结论:本研究利用葡聚糖凝胶柱对FG1粗酶液纯化了7.65倍,初步探讨了FG1琼胶酶的酶解条件,为最终得到高纯度的琼胶酶奠定理论与实践基础.; 张力雄刘明明方再光; 关键词：琼胶酶酶解条件优化

产微球茎属(Microbulbifer sp.)FG4菌株琼胶酶功能基因的克隆与表达: 2023年; 以FG4菌株琼胶酶基因侧翼序列为基础,构建重组质粒与载体,从而获得高效产琼胶酶的表达菌株。本研究利用染色体步移法获得FG4菌珠琼胶酶基因功能的侧翼序列之后,将基因组端序列克隆基因片段与表达载体进行重组,并转入到受体细胞BL21中,在鉴定表达菌株的成功构建后利用IPTG诱导表达琼胶酶。实现产微球茎属(Microbulbifer sp.)FG4菌株琼胶酶功能基因的克隆与表达,以期为琼胶酶类在不同领域的实际应用提供理论支持。; 张力雄刘明明陈良方再光; 关键词：琼胶酶染色体步移

海洋琼胶降解菌FG15基因组从头测序分析: 2017年; 为充分了解琼胶降解菌FG15的基因功能和代谢途径,本研究使用SOAP de novo 2.04对Illumina Hiseq2000平台测序产生的基因片段进行了拼接和组装,同时利用Glimmer 3.02来预测基因的开放性阅读框,并采用蛋白质直系同源基因簇(COG)、基因本体数据库(GO)以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)的数据来预测其基因功能,获得了代谢途径.结果表明:FG15的基因组大小为5.10 Mb,G+C含量为44.58%,共有38条Scaffolds,4 922个开放性阅读框,82个tRNA,2个rRNA;通过COG分析可将菌株FG15注释到22种COG功能类型,主要包括细胞代谢、细胞信号转导等;利用GO注释可将FG15注释到3大类39个GO功能亚类上;KEGG分析能将其定位到154个代谢通路中,包括物质代谢、次生代谢产物的生物合成等.次生代谢产物的合成代谢途径精确显示,FG15能合成青霉素和头孢菌素,且其与抗生素抗性实验的结果一致.研究结果为FG15功能基因组学的研究和相关次级代谢产物的生物合成途径以及异源表达的研究提供了理论基础.; 曾鸿俏张力雄刘明明方再光; 关键词：琼胶寡糖基因功能代谢途径

Microbulbifer sp.FG5琼胶酶的分离纯化及酶学性质研究: 2022年; 琼胶酶是一种糖苷水解酶,能够特异性降解琼胶为琼胶寡糖。本研究从一株琼胶降解菌FG5的培养液中分离纯化得到纯净的琼胶酶并研究其酶学特性。将FG5菌株的发酵液离心后得到粗酶液,再通过超滤浓缩、透析、葡聚糖凝胶柱层析进行酶的分离纯化。收集得到葡聚糖凝胶柱层析紫外检测主峰组份,经SDS-PAGE电泳检测为单一条带蛋白质,分子量约为54 kD。酶活检测证明该蛋白具有琼脂酶活性,命名为琼胶酶FG5-A。采用单因素试验和正交试验设计对FG5-A的酶解反应条件进行优化分析。FG5-A琼胶酶活性最适条件为:pH 7.3,反应温度51℃,反应底物含量0.351%。探索了FG5-A的纯化流程,经葡聚糖凝胶柱纯化后琼胶酶活性相比发酵液提高了6.95倍,并初步优化了FG5-A琼胶酶的最适酶解条件,为高纯度琼胶酶的工业化生产和应用奠定理论与实践基础。; 刘明明张力雄龙昊; 关键词：琼胶酶

产琼胶酶菌株Agarivorans sp.FG15的筛选鉴定与酶学性质被引量：3: 2014年; 从中国南海热带海洋环境中分离纯化出产琼胶酶菌株FG15,并以16S rDNA进行分子鉴定,分析其酶学性质.FG15为革兰氏阴性球菌,对硫酸链霉素,氨苄青霉素,羧苄青霉素和氯霉素都不敏感.通过16S rDNA序列分析和BLAST同源性比对发现：FG15菌株的16S rDNA序列与船蛆杆菌（Teredinibacter turnerae）,噬琼胶菌属（Agarivorans sp.）对应序列同源性最高,为95％.利用MEGA 5.0软件构建系统发育树,FG15与噬琼胶菌属（Agarivorans sp.）亲缘关系最近,同源性高达99％.因此,可以初步鉴定FG15为噬琼胶菌属（Agarivorans sp.）.酶学性质的研究表明：FG15所产琼胶酶的最适温度为36℃,在20～45℃之间热稳定性较好;最适pH为7.5,在pH7.0～8.0之间酸碱稳定性较好;产酶主要为胞外酶;琼脂酶的动力学参数米氏常数Km为4.978mg/mL,最大反应速率Vmax为10.33μmol/（L· min）.; 尹群健陈潇骁杨宏胜林明师毛欣琪方再光; 关键词：琼胶酶 RDNA 酶学性质

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国家自然科学基金(40666001)